この研究の主な目的は、盲腸結紮と穿刺誘発性敗血症のマウスモデルを使用して、敗血症の信頼できる血液バイオマーカーを評価することです。盲腸結紮および穿刺、または略してCLPは、敗血症の臨床的に関連するモデルです。CLPは敗血症研究で一般的に使用されるモデルです。
シトルリン化ヒストンH3、またはCitH3は、敗血症誘発性NETosisに由来します。私たちの以前の研究は、CitH3が敗血症の信頼できる診断バイオマーカーであることを示しています。雄のC57BL/6マウスを選択します。
マウスの体重を測定し、1.5%イソフルランを吸入してマウスを麻酔する。マウスを加熱パッドに固定します。脱毛クリームを腹部に塗り、クリームと髪を取り除く前に1分以内放置します。
げっ歯類の動物の手術に適した滅菌手術器具を準備します。腹部の皮膚をヨウ素で少なくとも3回消毒します。手術部位を適切な滅菌手術用カーテンで覆います。
滅菌手術用ハサミを使用して、リネアアルバに沿って腹壁を約2センチ切開します。滅菌ピンセットで腹腔から盲腸を識別して隔離します。盲腸の75巻を4-0絹縫合糸で結睭化する。
腸間膜血管を結紮しないでください。盲腸結紮の割合が異なると、敗血症の重症度が決まります。25%は低悪性度敗血症につながり、50%は中性度敗血症につながり、75%は高悪性度敗血症につながります。
尾端と結紮の中間点に21ゲージの針を使用して、盲腸を1回の貫通穿孔で穿刺します。浸透穴を通して盲腸から糞便をそっと絞り出します。なお、糞便も敗血症の重症度を決定するので、腹腔に押し込まれる糞便の量は一貫していなければならない。
盲腸と糞便を腹腔内にやさしく交換します。腹筋層と皮膚層を6-0シルク縫合糸で閉じます。切開部をヨウ素で消毒します。
ケトプロフェンの注射、キログラムあたり5ミリグラムは、盲腸を避けるために腹部の左下の象限で実行する必要があります。完全に回復するまでマウスを加熱パッドに置きます。マウスは温度管理された部屋に収容され、食物と水に自由にアクセスできます。
動物は、敗血症の症状を伴う二酸化炭素の過剰摂取によって安楽死させられます、提示された私たちの研究に基づいて私たちの事前定義されたエンドポイントに関連しています。マウスは、偽群、CLP群、およびCLPプラスCl-アミジンまたはYW3-56処置群に無作為に分けられる。偽群のマウスは、盲腸結紮と穿刺を除くすべてのCLP手順を受けます。
術後24時間で末梢血を採取し、遠心分離により血清を調製する。CitH3濃度は、ウェスタンブロッティングおよび自社開発のELISAキットにより測定した。図2に示すように、偽群ではCitH3は検出されなかった。
CitH3レベルはCLP挿入後に上昇し、PAD阻害によって有意に減弱した。我々のデータに基づいて、循環CitH3は敗血症の信頼できる診断バイオマーカーであると結論付けました。
