Основной целью данного исследования является использование мышиной модели перевязки слепой кишки и пункционно-индуцированного сепсиса для оценки надежного биомаркера сепсиса в крови. Перевязка и пункция слепой кишки, или сокращенно CLP, является клинически значимой моделью сепсиса. CLP является широко используемой моделью в исследованиях сепсиса.
Цитруллинированный гистон H3, или CitH3, происходит от НЕТоза, вызванного сепсисом. Наше предыдущее исследование показывает, что CitH3 является надежным диагностическим биомаркером сепсиса. Выберите самцов мышей C57BL/6.
Взвешивают мышь, и обезболивают мышь путем вдыхания 1,5% изофлурана. Закрепите мышь на грелке. Нанесите крем для депиляции на живот и оставьте не дольше одной минуты перед удалением крема и волос.
Подготовьте стерильные хирургические инструменты, подходящие для хирургии грызунов на животных. Дезинфицируйте кожу живота йодом не менее трех раз. Накройте оперативную хирургическую область соответствующей стерильной хирургической драпировкой.
Используйте стерильные хирургические ножницы, чтобы сделать примерно двухсантиметровый разрез в брюшной стенке, вдоль linea alba. Определите и выделите слепую кишку из брюшинной полости стерильным пинцетом. Лигат 75 объема слепой кишки с 4-0 шелковым швом.
Не следует лишать брыжеечные кровеносные сосуды. Следует отметить, что различный процент перевязанной слепой кишки определяет тяжесть сепсиса. 25% приводит к низкосортному сепсису, 50% приводит к сепсису средней степени, а 75% приводит к полноценному сепсису.
Проколите слепую кишку одной сквозной перфорацией иглой 21 калибра в средней точке между хвостовым концом и перевязкой. Аккуратно выдавите кал из слепой кишки через отверстия для проникновения. Следует отметить, что количество каловых масс, втиснутых в брюшинную полость, должно быть постоянным, так как кал также определяет выраженность сепсиса.
Осторожно замените слепую кишку, а также кал в брюшную полость. Закройте мышечный слой живота и слой кожи 6-0 шелковым швом. Продезинфицируйте разрез йодом.
Инъекция кетопрофена, пять миллиграммов на килограмм, должна быть выполнена в нижний левый квадрант живота, чтобы избежать слепой кишки. Поместите мышь на грелку до полного восстановления. Мышь размещается в помещении с контролируемой температурой и получает свободный доступ к пище и воде.
Животные будут усыплены передозировкой углекислого газа с симптомами сепсиса, имеющими отношение к нашим предопределенным конечным точкам, основанным на представленном нами исследовании. Мыши случайным образом делятся на фиктивную группу, группу CLP и группу лечения CLP плюс Cl-амидин или YW3-56. Мыши в фиктивной группе получают все процедуры CLP, кроме перевязки слепой кишки и пункции.
Соберите периферическую кровь через 24 часа после операции и подготовьте сыворотку путем центрифугирования. Концентрацию CitH3 определяли с помощью вестерн-блоттинга и самостоятельно разработанного набора ИФА. Как показано на рисунке два, в фиктивной группе не было обнаружено CitH3.
Уровни CitH3 были повышены после введения CLP, что значительно ослаблялось ингибированием PAD. Основываясь на наших данных, мы делаем вывод, что циркулирующий CitH3 является надежным диагностическим биомаркером сепсиса.
