패혈증의 맹장 결찰 및 천자 유도 마우스 모델에서 신뢰할 수 있는 바이오마커의 평가

본 연구의 주요 목적은 맹장 결찰 및 천자-유도 패혈증의 마우스 모델을 사용하여 패혈증의 신뢰성 있는 혈액 바이오마커를 평가하는 것이다. 맹장 결찰 및 천자 또는 간단히 CLP는 패혈증의 임상 적으로 관련된 모델입니다. CLP는 패혈증 연구에서 일반적으로 사용되는 모델이다.

시트룰린 화 히스톤 H3 또는 CitH3는 패혈증 유발 NETosis에서 비롯됩니다. 우리의 이전 연구는 CitH3가 패혈증의 신뢰할 수있는 진단 바이오 마커임을 보여줍니다. 수컷 C57BL/6 마우스를 선택합니다.

마우스의 무게를 측정하고, 1.5%이소플루란을 흡입하여 마우스를 마취시킨다. 마우스를 가열 패드에 고정하십시오. 복부에 탈모 크림을 바르고 크림과 머리카락을 제거하기 전에 1 분 이상 방치하지 마십시오.

설치류 동물 수술에 적합한 멸균 수술기구를 준비하십시오. 복부 피부를 요오드로 적어도 세 번 소독하십시오. 적절한 멸균 수술 휘장으로 수술 부위를 덮으십시오.

멸균 수술 가위를 사용하여 선형 알바를 따라 복벽에 약 2cm 절개를하십시오. 멸균 핀셋으로 복강 밖으로 맹장을 확인하고 분리하십시오. 맹장의 75 부피를 4-0 실크 봉합사로 라이게이트하십시오.

장간막 혈관을 결찰하지 마십시오. 주목해야 할 점은, 맹장 결찰의 상이한 백분율이 패혈증의 중증도를 결정한다. 25%저등급 패혈증, 50%중급 패혈증, 75%고급 패혈증으로 이어짐

꼬리 끝과 결찰 사이의 중간 지점에 21 게이지 바늘로 맹장을 한 번의 관통 천공으로 뚫습니다. 침투 구멍을 통해 맹장에서 대변을 부드럽게 짜냅니다. 주목해야 할 점은, 복강 내로 압착 된 대변의 양은 대변이 패혈증의 중증도를 결정하기 때문에 일정해야합니다.

맹장과 대변을 복강 내로 부드럽게 교체하십시오. 복부 근육층과 피부층을 6-0 실크 봉합사로 닫습니다. 요오드로 절개 부위를 소독하십시오.

맹장을 피하기 위해 킬로그램 당 5 밀리그램의 케토 프로 펜 주사를 복부의 왼쪽 아래 사분면에서 수행해야합니다. 완전히 회복될 때까지 마우스를 가열 패드에 놓습니다. 마우스는 온도가 조절되는 방에 보관되며 음식과 물을 자유롭게 이용할 수 있습니다.

동물은 패혈증 증상과 함께 이산화탄소 과다 복용으로 안락사되며, 제시된 연구를 기반으로 미리 정의된 종말점과 관련이 있습니다. 마우스는 무작위로 가짜 그룹, CLP 그룹, 및 CLP와 Cl-아미딘 또는 YW3-56 치료군으로 나뉩니다. 가짜 그룹의 마우스는 맹장 결찰 및 천자를 제외한 모든 CLP 절차를 받습니다.

수술 후 24시간에 말초혈액을 채취하고 원심분리를 통해 혈청을 준비합니다. CitH3 농도는 웨스턴 블로팅 및 자체 개발한 ELISA 키트에 의해 결정되었다. 그림 2에서 볼 수 있듯이 가짜 그룹에서는 CitH3가 검출되지 않았습니다.

CitH3 수준은 CLP 삽입 후에 상승하였고, 이는 PAD 억제에 의해 유의하게 감쇠되었다. 우리의 데이터를 바탕으로, 우리는 순환하는 CitH3가 패혈증의 신뢰할 수있는 진단 바이오 마커라고 결론지었습니다.