莱因哈蒂衣原体中去膜化细胞模型的再激活

这种方法可以帮助了解哪些因素会影响纤毛运动。该技术的主要优点是，这种现象只在体内暂时发生，这种纤毛中钙离子浓度的反转可以在体外连续观察到。该方法特别有助于运动纤毛的研究领域。

初学者很难执行去膜化步骤。因此，强烈建议您轻柔而精确地执行这些步骤。首先在20摄氏度下在1， 000 RCF下离心约10毫升莱因哈蒂衣原体培养物3分钟。

倾析上清液，并用巴斯德移液器吸出残余物。将沉淀物重悬于约五毫升的洗涤缓冲液中。在洗涤缓冲液中以1， 000 RCF在20摄氏度下离心细胞3分钟。

用移液管小心地丢弃上清液。向细胞沉淀中加入约0.5毫升去膜缓冲液。轻轻摇动试管以将细胞大致悬浮在缓冲液中，然后将试管放在冰上。

用移液管轻轻悬浮剩余的细胞沉淀，然后再次将管子放在冰上。取5至10微升细胞模型，用稀释缓冲液稀释十倍，并在显微镜下观察以确认所有细胞模型均去膜化且不游泳。在0.5毫升管中，通过敲击管将80微升的再活化溶液，10微升的ATP溶液和10微升的电池模型混合。

将大约30微升的混合溶液放在载玻片上，并用垫片轻轻地在其上放置盖玻片，以避免对细胞模型进行机械冲击。在显微镜下观察重新激活的细胞模型。在C.reinhardtii培养物脱膜后，所有细胞模型变得不育，去膜化的纤毛仍然附着在细胞体上，证实了细胞模型的不动性不是由去纤毛引起的。

在ATP中将细胞模型与再活化缓冲液混合后，超过50%的细胞模型变得可运动。即使没有ATP再生系统，再活化的细胞继续移动约90分钟，最终ATP浓度为1毫摩尔，然后逐渐停止。去膜步骤至关重要。

所有的细胞都应该停止游泳，但它们不应该混合得如此强烈，以至于发生去纤毛。研究人员可以修改该协议以包括钙离子或环AMP等试剂，或者对缺乏特定蛋白质的突变体进行实验以确定其生物学作用。