一种稳定建立的溶血磷脂酰胆碱诱导的小鼠局灶性脱髓鞘模型的两点注射

我们的模型与脱髓鞘疾病高度相关，尤其是多发性硬化症。它有助于相关的临床相关研究。这是一个详细的方案，可以通过外科手术直接快速稳定地导致小鼠的严重脱髓鞘。

第一次尝试此技术时，请耐心等待，并确保坐标准确无误。首先将 32 号针头连接到 5 微升注射器。取出5微升LPC溶液用于制备注射液。

接下来，在呼吸顺畅时通过缺乏脚趾捏反射来确认鼠标的麻醉深度。将鼠标放在立体定位框架中，背侧朝上，并用鼻锥和齿夹固定头部。将鼠标固定在带有双侧耳条的立体定位装置上。

确保耳杆水平，头部水平且稳定。用碘酒擦拭头部皮肤进行消毒。然后用手术刀沿着头皮中线切一个小切口约1.5厘米，露出头骨。

用蘸有 1% 过氧化氢的棉签擦拭技能，直到后囟暴露在外。将注射器放在立体定位装置上。确保动物头部的水平定位，并定位胼胝体。

确定注射部位后，记录坐标，并在头骨上用标记做标记。用骷髅钻轻轻地钻标记部位。注意避免出血。

慢慢地将指针移动到给定的坐标。为了诱导胼胝体脱髓鞘，在每个注射部位以每分钟0.4微升的速度注射2微升LPC溶液。注射后，将针头在每个部位再保留10分钟。

最后，用4-0缝合缝合皮肤，等待动物在10分钟内醒来。代表性图像显示了通过Luxol快速蓝色染色检测白质军团的过程。从结果来看，在注射后10天和28天可以看到胼胝体的稳定脱髓鞘。

此处显示了不同时间点脱髓鞘区域的定量。通过免疫荧光染色降解的髓鞘碱性蛋白，在注射后10 d观察到LPC注射组的dMBP显着增加，这表示胼胝体中的髓鞘丢失。髓鞘碱性蛋白（MBP）表达的蛋白质印迹分析显示注射LPC后MBP明显丢失。

β-肌动蛋白用作加载对照来测量基线表达。电子显微镜图像证实了假手术组和LPC注射组胼胝体中的髓鞘超微结构。GST-pi是少突胶质细胞前体细胞或OPC分化成熟的标志物。

注射LPC10 d后，GST-pi 与假手术组相比有所下降。同时，少突胶质细胞的增殖能力可以通过少突胶质细胞增殖与总少突胶质细胞谱系细胞的比例来体现。较高的比率表示注射后10天后少突胶质细胞的增殖更多。

代表性图像显示了小鼠在每组中的游泳路径，在平台存在的情况下以及移除平台后。结果表明，在两点LPC注射模型中，脱髓鞘小鼠的空间记忆明显受损。在尝试此过程时，请确保注射速率准确，并将针头在每个部位再保持 10 分钟。