该方案将有助于为猪模型中胰腺移植的不稳定过程提供循序渐进的方法。该技术遵循与在人类中观察到的几乎相同的步骤,因此是最接近在临床实践中复制的模型。与人类相比,猪的内脏结构和血管非常脆弱。
因此,这对任何第一次做手术的人来说都是最大的挑战。首先使用牛电灼术的纯切割模式从剑胸骨到耻骨联合做一个中线切口。确保在以外的切口下部保持尿道外侧,以避免受伤。
放置自保全腹壁牵开器,避免损伤脾脏和肝脏,以优化暴露于手术区域。为了动员胰头,在助手的帮助下对胰十二指肠沟进行反牵引。沿肝下IVC中胰实质十二指肠叶之间的无血管筋膜平面进行解剖。
通过沿门静脉两侧的筋膜解剖来启动胰环动员,以确保连接叶从上覆的门静脉完全动员。最安全的方法是沿着门静脉的两侧开始解剖,并顺时针或逆时针方向分离组织。接下来,确定胰腺和亲本组织之间的连接处,并开始解剖下层脾静脉的尾巴,靠近实质。
结扎并分割小静脉支流到实质,注意不要伤害脾静脉,使用 Silk 3-0 领带。对于胰腺体动员,沿着将实质与大肠和胃分开的薄组织层解剖,沿幽门下区域保留薄血管弓。然后对于胰十二指肠动员,通过牵引,反牵引在胰十二指肠沟中尖锐解剖,将实质与二重奏的C环分开,沿十二指肠的C形环保留薄血管弓。
接下来,确定胰管。与Silk 2-0的结扎和分裂,在十二指肠C形环上保持约三到五毫米的导管残端,远离十二指肠血管弓。通过从门静脉两侧的连接叶、十二指肠和结肠之间的交界处解剖实质来完成活动的最后一部分。
通过将门静脉前侧的连接叶分开来提取样本。提取标本需要实质分割,因为它位于门静脉周围的圆周位置。确保沿夹层区域止血,并检查十二指肠是否有任何损伤和血管充血。
通过修剪吻合边缘来准备移植门静脉和主动脉近端。将准备好的移植物放入装有UW溶液的器官袋中,放在冰浴上。从胰尾取核心针活检,将它们储存在福尔马林中,然后快速冷冻。
在稍后阶段提取RNA。使用Prolene 6-0以八字形的方式缝合活检部位。通过识别右输尿管并沿筋膜解剖开始主动脉腔夹层,将输尿管与下腔静脉上的腹膜后覆盖物分开。
沿主动脉外缘解剖,使其与下面的比目鱼肌暴露。接下来,沿主动脉腔沟解剖,将主动脉与IVC分开。通过试验Satinsky血管钳夹放置,确保主动脉和IVC充分活动。
与第一助手切换位置,并通过缩回左侧的肠袢来准备手术区域,以暴露主要血管以进行吻合。将试验夹放在IVC和主动脉上,以重新评估两个血管的充分动员以进行吻合。将血管侧咬夹放入IVC后,在血管前壁上开一个小口,并使用Potts剪刀将其颅骨和尾部伸展至足够的尺寸。
使用静脉插管的柔性鞘用肝素化盐水冲洗管腔。使用Prolene 6-0双针,在IVC和移植门静脉上做角形由内而外的缝合线。固定角缝合线,并沿着移植物和受体静脉的后壁连续运行其中一根针。
以由外而内连续的方式固定前壁,并用肝素化盐水冲洗吻合腔后将结固定在前壁中央。然后将斗牛犬的血管夹放在远离吻合口的移植门静脉上,并慢慢从受体IVC中释放侧咬夹。检查静脉再充盈,以及吻合口是否有大出血。
接下来,将侧咬夹放在主动脉上,而不会损伤沿血管后内侧壁的腰支。指导麻醉师通过中心静脉导管注射肝素和甲泼尼龙。在血管前壁上开一个口,并向颅骨和尾部延伸,注意不要沿着血管壁解剖。
用肝素化盐水冲洗管腔。并使用Prolene 6-0双针,通过降落伞技术将移植主动脉的近端连续缝合到受体主动脉开口。用肝素化盐水冲洗管腔,然后将最后一个结绑在血管前壁上。
在开始再灌注之前,检查血流动力学改变是否有任何平均血压急剧下降。每分钟监测有创血压,并对血管加压药和液体前负荷进行剂量滴定,以将目标平均血压保持在 45 至 50 毫米汞柱之间。然后,通过评估实质、主动脉旁区域和门脉周围区域的任何大出血,从静脉中取出斗牛犬夹后保持止血。松开主动脉钳夹并检查动脉吻合口部位是否有出血。
用结扎和止血缝合固定出血点。要求麻醉师通过中心静脉导管注射一瓶氨甲环酸。在再灌注的这一阶段,必须尽量减少对胰腺的积极处理,以避免移植物水肿和血肿。
在确保无肠系膜扭转后,在距十二指肠空肠交界处 40 至 50 厘米处隔离一圈空肠,并将其靠近移植物。使用聚二恶烷酮4-0缝合线以侧对侧连续的方式将十二指肠移植物吻合到受体空肠。确认移植物周围和吻合部位止血。
然后在再灌注后一小时从胰尾进行三次核心穿刺活检。储存在福尔马林中,快速冷冻,稍后提取RNA。用Prolene 6-0以八字形的方式缝合活检部位。
在评估拖把滞留并确保止血后,使用聚二恶烷酮 0 针连续缝合腹直肌,使中下线远离尿道。使用连续的Silk 0缝合线闭合皮肤。在颈部创建一个皮下隧道,并通过将其埋在隧道下方并用 Silk 0-0 切割针缝合覆盖的皮肤来固定中心静脉导管。
在确保血气分析中的平均血压稳定且pH和乳酸水平呈改善趋势后,移除动脉导管并结扎血管以确保颈部止血。用 Silk 0 缝合线以连续方式关闭覆盖的皮肤。再灌注后一小时的平均心率平均为每分钟135次,平均血压约为37毫升汞柱。
在高剂量的去甲肾上腺素输注下维持这些水平,在所有五种情况下都可以逐渐减少并停止,然后再将动物移回其围栏。再灌注后在手术室监测乳酸水平3小时。所有五只动物在临床上都是警觉的,在再灌注后五到六个小时内四肢和呼吸模式的积极运动很明显。
监测术后前三天淀粉酶、血清脂肪酶和血清乳酸脱氢酶水平。术后第三天进行120分钟葡萄糖耐量试验。随后提取血液样本并在2分钟,5分钟,10分钟,20分钟30分钟,60分钟,90分钟和120分钟处理葡萄糖水平。
在胰腺切除术中,细致处理胰腺周围的血管弓至关重要。仔细执行此步骤可确保在手术结束时十二指肠的良好血管供应,这反过来又是胰腺切除术后成功的关键决定因素。该技术开辟了猪模型移植机器灌注的选择,并建立了生存模型。