小鼠中Pax8定向缺失肿瘤抑制因子 Arid1a 和 Pten 的子宫内膜癌进展的非侵入性超声评估

这项研究表明，手动引导超声非常适合监测子宫内膜癌诱导小鼠模型中子宫病理的发展。超声成像是无创的，因此可以在几天和几周内对个体小鼠进行纵向研究。这允许捕获个体变异，并最终减少用于研究的动物。

该方法可以很容易地应用于监测病理变化和其他镜像模型，包括用于泌尿和消化道肿瘤形成和慢性疾病的模型。通过选择范围为 32 至 56 兆赫兹的换能器或探头，开始设置超声机以对子宫或卵巢进行成像。从主屏幕转到“应用程序”选项卡，然后选择鼠标小腹部模式。

然后单击“扫描”返回主屏幕并等待显示实时图像。接下来，从左侧工具栏上的选项中选择 B 模式，然后单击“更多控件”选项以查看用于图像细化的其他工具，例如图像增益和深度或调整剪辑采集设置，例如每秒帧数。选择图像设置后，单击B模式返回主屏幕。

将装有无菌等渗液体溶液的注射器放在加热垫和吸收垫之间几分钟，将其预热至35至40摄氏度。如果机器没有加热器，请在加热垫上放一瓶超声波凝胶。要将一到两毫升溶液注入小鼠的腹膜腔，请用一只手固定小鼠，露出腹侧。

然后将鼠标保持在大约 20 度角，鼻子指向地板。将 25 号结核菌素注射器针头插入腹部尾部右象限的皮肤和腹壁。为避免注射到脉管系统或胃肠道中，请以最小的压力拉回注射器柱塞以寻找血液。

将鼠标置于加热垫上的吸收垫上的腹侧卧位，然后将啮齿动物鼻锥牢固地放在鼠标的鼻子和口吻上。在麻醉小鼠的最后一根肋骨和骨盆之间的两侧将少量预热的超声凝胶远轴到脊柱。将少量凝胶放在超声探头上。

接下来，将探针平行于椎骨放置，探针的前部位于颅侧。将鼠标放在腹侧卧位，慢慢扫描该区域以查找肾脏标志。在看到肾脏的情况下，拉动探头尾部以找到卵巢，卵巢是一个略微高回声的椭圆形到圆形结构，位于一个非常高回声的卵巢脂肪垫内，颅腹与肾脏接壤，背侧与背腹壁接壤。

通过使用控制屏幕底部的滑块调整信号增益来提高图像对比度。为了改善肾脏的成像，用手指对侧腹部施加压力。改变压力和角度，从平行于脊柱到大约 20 度腹侧。

查看感兴趣的器官后，通过单击捕获视频 保存剪辑 or 开始录制.完成后，单击“停止录制”以预设的帧数保留图像。将探头向尾部握住，直到卵巢位于视野的最颅面。

改变探头压力和角度以查看和成像子宫。对每个感兴趣的器官重复视频和帧收集。发现子宫沿腹背壁纵向延伸，腿部外侧肌肉组织一览无余。

监测组织的蠕动运动，以区分肠袢和子宫固定角。将鼠标放在背卧位以从腹侧方法收集图像。确保眼睛润滑充分，并且枪口固定在鼻锥中。

在腹腹处涂抹少量预热的超声凝胶，然后在耻骨的中线和颅骨处使用探头，将膀胱定位为低回声标志。要找到子宫角，请将探头拉向膀胱的侧面。从鼠标的一侧或两侧施加轻微的数字压力。

一旦子宫角进入视野，将探头垂直于鼠标并扫描腹部两侧以捕获两个角的横向视图。旋转探头以捕获矢状视图。超声波检查后，用纸巾擦拭鼠标，然后将其放回笼子中恢复。

一旦小鼠在两到五分钟后完全清醒，将鼠标送回动物室。盐水注射前后小鼠腹腔的超声图像比较显示，盐水注射后腹部器官（包括子宫和卵巢）的可视化得到改善。腹侧方法用于研究与低回声膀胱相邻的子宫角的横截面。

使用针对Arid1a和Pten的抗体进行免疫组织化学，以研究与邻近基质组织相比，子宫上皮细胞中完成的足够的肿瘤抑制蛋白损失。在多西环素治疗三周后，检测到具有早期病理变化的小鼠子宫的超声图像，显示子宫腔的低回声和扩张。在同一子宫的大体病理学和组织病理学研究中，分别观察到较小但扩张的薄壁子宫和保留明显管腔的早期子宫内膜增生。

在较晚的时间点安乐死的小鼠显示出较大的子宫，较小的管腔和增厚的壁。在学习使用手动放置探针时，过大的压力或快速移动会使器官识别变得困难。使用温和、深思熟虑的动作，并专注于首先识别具有里程碑意义的器官。

在研究终点，处死小鼠并收集组织以确认基因敲低并表征组织变化。该技术允许研究人员随着时间的推移监测腹内病变。在我们的案例中，我们用它来监测iPad模型中的子宫癌进展，然后我们通过组织病理学证实了这一点。