Bu çalışma, manuel kılavuzlu ultrasonun, endometriyal kanserin indüklenmiş bir fare modelinde uterus patolojisinin gelişimini izlemek için çok uygun olduğunu göstermektedir. Ultrason görüntüleme noninvazivdir ve bu nedenle günler ve haftalar boyunca bireysel farelerin uzunlamasına çalışmalarına izin verir. Bu, bireysel varyasyonun yakalanmasına ve sonuçta çalışma için daha az hayvanın kullanılmasına izin verir.
Bu yöntem, patolojik değişiklikleri ve neoplazi ve idrar ve sindirim sisteminin kronik hastalıkları da dahil olmak üzere diğer yansıtma modellerini izlemek için kolayca uygulanabilir. 32 ila 56 megahertz aralığında bir dönüştürücü veya prob seçerek uterus veya yumurtalık görüntülemek için ultrason makinesini kurmaya başlayın. Ana ekrandan Uygulamalar sekmesine gidin ve Fare Küçük Karın Modu'nu seçin.
Ardından ana ekrana dönmek için Tara'ya tıklayın ve canlı bir görüntünün görüntülenmesini bekleyin. Ardından, görüntü kazancı ve derinliği gibi görüntü iyileştirmeye yönelik ek araçları görüntülemek veya saniyedeki kare sayısı gibi klip alma ayarlarını yapmak için Diğer Kontroller seçeneğine tıklamadan önce sol araç çubuğundaki seçeneklerden B Modu'nu seçin. Görüntü ayarları seçildikten sonra, B Modu'na tıklayarak ana ekrana dönün.
35 ila 40 santigrat dereceye kadar önceden ısıtmak için birkaç dakika boyunca bir ısıtma yastığı ile emici bir ped arasına steril bir izotonik sıvı çözeltisi ile doldurulmuş üç ila 10 mililitrelik bir şırınga yerleştirin. Makinede ısıtıcı yoksa, ısıtma yastığına bir şişe ultrason jeli yerleştirin. Bir farenin periton boşluğuna bir ila iki mililitre çözelti enjekte etmek için, fareyi bir elinizle tırnağıyla sabitleyerek ventrumu açığa çıkarın.
Ardından, fareyi burun yere bakacak şekilde yaklaşık 20 derecelik bir açıyla tutun. Karnın kaudal sağ kadranının derisinden ve karın duvarından 25 gauge tüberkülin şırınga iğnesi yerleştirin. Vaskülatür veya GI kanalına enjeksiyondan kaçınmak için, kan aramak için şırınga pistonunu minimum basınçla geri çekin.
Bir kemirgen burun konisini farenin burnuna ve namlusuna güvenli bir şekilde yerleştirmeden önce fareyi emici pedin üzerine bir ısıtma yastığının üzerine ventral yatışta konumlandırın. Anestezi uygulanan farenin her iki tarafındaki omurgaya az miktarda önceden ısıtılmış ultrason jeli abaksiyelini son kaburga ve pelvis arasına yerleştirin. Ultrason probu üzerine az miktarda jel koyun.
Daha sonra, probu omurlara paralel olarak, probun önü kraniyal tarafta olacak şekilde yerleştirin. Ventral yatışta bir fare ile, böbrek dönüm noktası için bölgeyi yavaşça tarayın. Böbrek göz önünde bulundurulduğunda, çok hiperekoik bir yumurtalık yağ yastığı içinde hafif hiperekoik oval ila yuvarlak bir yapı olan yumurtalığı bulmak için prob kaudalını çekin, böbrek tarafından kraniyal-ventralal olarak sınırlanmış ve dorsal-lateral olarak dorsal karın duvarı tarafından.
Kontrol ekranının altındaki kaydırıcıyı kullanarak sinyal kazancını ayarlayarak görüntü kontrastını iyileştirin. Böbreğin görüntülenmesini iyileştirmek için, bir parmağınızı kullanarak kontra-lateral karın bölgesine basınç uygulayın. Basıncı ve açıyı omurgaya paralelden yaklaşık 20 derece ventral'e kadar değiştirin.
İlgilendiğiniz organ görüntülendikten sonra, Klibi Kaydet veya Kaydı Başlat'a tıklayarak bir video çekin. İşiniz bittiğinde, görüntüleri önceden ayarlanmış sayıda karede tutmak için Kaydı Durdur'u tıklayın. Probu, yumurtalık görüş alanının en kafatası yönünde olana kadar kaudal olarak tutun.
Uterusu görüntülemek ve görüntülemek için prob basıncını ve açısını değiştirin. İlgilendiğiniz her organ için video ve kare koleksiyonunu tekrarlayın. Dorsal karın duvarı boyunca uzunlamasına uzanan uterusu, lateral bacak kas yapısı görünürken bulun.
Bağırsak halkalarını uterus sabit boynuzlarından ayırt etmek için dokuyu peristaltik bir hareket için izleyin. Görüntüleri ventral bir yaklaşımdan toplamak için fareyi dorsal yatışa yerleştirin. Göz yağlamasının yeterli olduğundan ve namlunun burun konisine sabitlendiğinden emin olun.
Mesaneyi hipoekoik bir dönüm noktası olarak bulmak için probu pubisin orta hattına ve kraniyaline uygulamadan önce ventral karnına az miktarda önceden ısıtılmış ultrason jeli uygulayın. Rahim boynuzlarını bulmak için, probu mesaneye lateral olarak çekin. Farenin iki tarafından veya her iki tarafından hafif dijital basınç uygulayın.
Rahim boynuzları görüş alanına girdikten sonra, probu fareye dik tutun ve her iki boynuzun enine görünümlerini yakalamak için karnın her iki tarafını da tarayın. Sagital görünümleri yakalamak için probu döndürün. Ultrasondan sonra, iyileşmek için kafesine geri döndürmeden önce fareyi bir kağıt havluyla silin.
Fare iki ila beş dakika sonra tamamen uyandığında, fareyi hayvan odasına geri getirin. Salin enjeksiyonundan önce ve sonra fare karın boşluğunun ultrason görüntüsü karşılaştırması, salin enjeksiyonundan sonra uterus ve yumurtalıklar da dahil olmak üzere karın organlarının daha iyi görselleştirilmesini gösterdi. Hipoekoik mesaneye bitişik uterus boynuzlarının kesitlerini incelemek için ventral bir yaklaşım kullanıldı.
Arid1a ve Pten'e karşı antikorlara yönelik immünohistokimya, komşu stromal dokuya kıyasla uterus epitel hücrelerinde gerçekleştirilen yeterli tümör baskılayıcı protein kaybını incelemek için kullanıldı. Erken patoloji değişiklikleri olan bir fare uterusunun ultrason görüntüleri, uterusun hipoekoik ve dilate lümenini gösteren üç haftalık doksisiklin tedavisinden sonra tespit edildi. Aynı uterusun brüt patolojisi ve histopatolojisi çalışmasında, sırasıyla daha küçük fakat genişlemiş ince duvarlı uterus ve belirgin lümenin korunması ile erken endometrial hiperplazi gözlendi.
Daha sonraki zaman noktalarında ötenazi yapılan fareler, daha küçük bir lümen ve kalınlaşmış bir duvar ile daha büyük uterus gösterdi. Probların manuel olarak yerleştirilmesini kullanmayı öğrenirken, aşırı basınç veya hızlı hareket organ tanımlamayı zorlaştırabilir. Nazik, kasıtlı hareketler kullanın ve önce yer işaretleri olan organları tanımlamaya odaklanın.
Çalışma sonunda, fareler kurban edilir ve gen yıkımını doğrulamak ve doku değişikliklerini karakterize etmek için doku toplanır. Bu teknik, araştırmacıların zaman içinde intraabdominal lezyonları izlemelerini sağlar. Ve bizim durumumuzda, iPad modelinde rahim kanseri ilerlemesini izlemek için kullandık, daha sonra histopatoloji ile doğruladık.
