Cette étude montre que l’échographie guidée manuelle est bien adaptée pour surveiller le développement de la pathologie utérine dans un modèle murin induit de cancer de l’endomètre. L’imagerie par ultrasons est non invasive et permet donc des études longitudinales de souris individuelles sur plusieurs jours et semaines. Cela permet de capturer les variations individuelles et, en fin de compte, d’utiliser moins d’animaux pour l’étude.
Cette méthode peut être facilement appliquée pour surveiller les changements pathologiques et d’autres modèles miroirs, y compris ceux pour la néoplasie et les maladies chroniques du tube urinaire et digestif. Commencez à configurer l’appareil à ultrasons pour l’imagerie de l’utérus ou de l’ovaire en sélectionnant un transducteur ou une sonde avec une plage de 32 à 56 mégahertz. Accédez à l’onglet Applications de l’écran d’accueil et sélectionnez Mode Petit abdomen de la souris.
Cliquez ensuite sur Numériser pour revenir à l’écran d’accueil et attendez qu’une image en direct s’affiche. Ensuite, sélectionnez Mode B dans les options de la barre d’outils de gauche avant de cliquer sur l’option Plus de contrôles pour afficher des outils supplémentaires pour affiner l’image, tels que le gain et la profondeur de l’image ou pour ajuster les paramètres d’acquisition de clip, tels que le nombre d’images par seconde. Une fois les paramètres d’image sélectionnés, revenez à l’écran d’accueil en cliquant sur Mode B.
Placez une seringue de trois à 10 millilitres remplie d’une solution de liquide isotonique stérile entre un coussin chauffant et un tampon absorbant pendant plusieurs minutes pour le préchauffer à 35 à 40 degrés Celsius. Si la machine n’a pas de chauffe-eau, placez un flacon de gel à ultrasons sur le coussin chauffant. Pour injecter un à deux millilitres de solution dans la cavité péritonéale d’une souris, fixez la souris par la peau dans une main, exposant le ventre.
Tenez ensuite la souris à un angle d’environ 20 degrés, le nez pointé vers le sol. Insérez une aiguille de seringue tuberculine de calibre 25 dans la peau et la paroi abdominale du quadrant caudale droit de l’abdomen. Pour éviter l’injection dans le système vasculaire ou le tractus gastro-intestinal, tirez sur le piston de la seringue avec une pression minimale pour rechercher du sang.
Placez la souris en position couchée ventrale sur le coussin absorbant au-dessus d’un coussin chauffant avant de placer solidement un cône de nez de rongeur sur le nez et le museau de la souris. Placez une petite quantité de gel à ultrasons préchauffé abaxial à la colonne vertébrale de chaque côté de la souris anesthésiée entre la dernière côte et le bassin. Mettez une petite quantité de gel sur la sonde à ultrasons.
Ensuite, placez la sonde parallèle aux vertèbres avec l’avant de la sonde du côté crânien. Avec une souris en position couchée ventrale, balayez lentement la zone à la recherche du repère rénal. Avec le rein en vue, tirez la sonde caudale pour trouver l’ovaire, qui est une structure ovale à ronde légèrement hyperéchogène dans un coussinet adipeux ovarien très hyperéchogénique, bordé crânien-ventralement par le rein et dorsal-latéralement par la paroi abdominale dorsale.
Améliorez le contraste de l’image en ajustant le gain du signal à l’aide du curseur situé en bas de l’écran de contrôle. Pour améliorer l’imagerie du rein, appliquez une pression sur l’abdomen controlatéral à l’aide d’un doigt. Faites varier la pression et l’angle de parallèle à la colonne vertébrale à environ 20 degrés ventral.
Une fois que l’organe d’intérêt est en vue, capturez une vidéo en cliquant sur Enregistrer le clip ou Démarrer l’enregistrement. Une fois terminé, cliquez sur Arrêter l’enregistrement pour conserver les images à un nombre prédéfini d’images. Tenez la sonde caudale jusqu’à ce que l’ovaire soit dans l’aspect le plus crânien du champ de vision.
Variez la pression et l’angle de la sonde pour voir et imager l’utérus. Répétez la collecte de vidéos et d’images pour chaque organe d’intérêt. Trouvez l’utérus longeant longitudinalement la paroi abdominale dorsale avec la musculature latérale de la jambe en vue.
Surveillez le tissu pour un mouvement péristaltique afin de différencier les anses intestinales des cornes stationnaires utérines. Placez la souris en position couchée dorsale pour recueillir les images à partir d’une approche ventrale. Assurez-vous que la lubrification des yeux est suffisante et que le museau est fixé dans le cône nasal.
Appliquez une petite quantité de gel à ultrasons préchauffé sur l’abdomen ventral avant d’appliquer la sonde à la ligne médiane et crânienne du pubis pour localiser la vessie comme point de repère hypoéchologique. Pour trouver les cornes utérines, tirez la sonde latéralement à la vessie. Appliquez une légère pression numérique de l’un ou des deux côtés de la souris.
Une fois que les cornes utérines sont dans le champ de vision, tenez la sonde perpendiculairement à la souris et balayez les deux côtés de l’abdomen pour capturer des vues transversales des deux cornes. Faites pivoter la sonde pour capturer des vues sagittales. Après l’échographie, essuyez la souris avec une serviette en papier avant de la remettre dans sa cage pour récupérer.
Une fois que la souris est complètement réveillée après deux à cinq minutes, retournez la souris dans la salle des animaux. La comparaison par ultrasons de la cavité abdominale de la souris avant et après l’injection de solution saline a montré une meilleure visualisation des organes abdominaux, y compris l’utérus et les ovaires après l’injection de solution saline. Une approche ventrale a été utilisée pour étudier les coupes transversales des cornes utérines adjacentes à la vessie hypoéchogénique.
L’immunohistochimie avec des anticorps dirigés contre Arid1a et Pten a été utilisée pour étudier la perte adéquate de protéines suppresseurs de tumeurs accomplie dans les cellules épithéliales utérines par rapport au tissu stromal voisin. Des images échographiques d’un utérus de souris présentant des changements pathologiques précoces ont été détectées après trois semaines de traitement à la doxycycline, montrant la lumière hypoéchogène et dilatée de l’utérus. Dans l’étude de pathologie macroscopique et d’histopathologie du même utérus, un utérus à paroi mince plus petit mais dilaté et une hyperplasie endométriale précoce avec préservation de la lumière distincte ont été observés respectivement.
Les souris euthanasiées à des moments ultérieurs ont montré un utérus plus grand avec une lumière plus petite et une paroi épaissie. Lors de l’apprentissage de l’utilisation du placement manuel des sondes, une pression excessive ou un mouvement rapide peut rendre difficile l’identification des organes. Utilisez des mouvements doux et délibérés et concentrez-vous d’abord sur l’identification des organes qui sont des points de repère.
À la fin de l’étude, les souris sont sacrifiées et les tissus sont prélevés pour confirmer l’élimination des gènes et caractériser les changements tissulaires. Cette technique permet aux investigateurs de surveiller les lésions intraabdominales au fil du temps. Et dans notre cas, nous l’avons utilisé pour suivre la progression du cancer de l’utérus dans le modèle iPad, ce que nous avons ensuite confirmé par histopathologie.
