마우스에서 종양 억제인자 Arid1a 및 Pten 의 Pax8 지시 결실에서 자궁내막암 진행의 비침습적 초음파 평가

이 연구는 수동 유도 초음파가 자궁내막암의 유도 마우스 모델에서 자궁 병리의 발달을 모니터링하는 데 매우 적합하다는 것을 보여줍니다. 초음파 영상은 비침습적이므로 며칠과 몇 주에 걸쳐 개별 마우스에 대한 종단 연구가 가능합니다. 이를 통해 개인차를 포착할 수 있고 궁극적으로 연구에 사용할 동물 수를 줄일 수 있습니다.

이 방법은 병리학적 변화 및 비뇨기 및 소화관의 신생물 및 만성 질환에 대한 것을 포함한 기타 미러링 모델을 모니터링하는 데 쉽게 적용할 수 있습니다. 32-56 메가 헤르츠 범위의 변환기 또는 프로브를 선택하여 자궁 또는 난소 이미징을위한 초음파 기계 설정을 시작하십시오. 홈 화면에서 Applications(응용 프로그램) 탭으로 이동하여 Mouse Small Abdomen Mode(마우스 작은 복부 모드)를 선택합니다.

그런 다음 스캔을 클릭하여 홈 화면으로 돌아가 라이브 이미지가 표시될 때까지 기다립니다. 그런 다음 추가 컨트롤 옵션을 클릭하기 전에 왼쪽 도구 모음의 옵션에서 B 모드를 선택하여 이미지 게인 및 깊이와 같은 이미지 미세 조정을 위한 추가 도구를 보거나 초당 프레임 수와 같은 클립 획득 설정을 조정합니다. 이미지 설정이 선택되면 B 모드를 클릭하여 홈 화면으로 돌아갑니다.

가열 패드와 흡수 패드 사이에 멸균 등장 유체 용액으로 채워진 3-10 밀리리터 주사기를 몇 분 동안 놓고 섭씨 35-40 도로 예열합니다. 기계에 워머가 없으면 가열 패드에 초음파 젤 한 병을 놓습니다. 마우스의 복강에 1-2 밀리리터의 용액을 주입하려면 한 손으로 스크러프를 잡고 복부를 노출시킵니다.

그런 다음 코가 바닥을 향하도록 마우스를 약 20도 각도로 잡습니다. 복부의 꼬리 오른쪽 사분면의 피부와 복벽을 통해 25게이지 투베르쿨린 주사기 바늘을 삽입합니다. 맥관 구조나 위장관으로의 주입을 피하려면 혈액을 찾기 위해 최소한의 압력으로 주사기 플런저를 뒤로 당깁니다.

마우스의 코와 위에 설치류 노즈 콘을 단단히 놓기 전에 가열 패드 위의 흡수 패드에 마우스를 복부 누운 상태로 놓습니다. 마지막 갈비뼈와 골반 사이에 마취된 마우스의 양쪽에 있는 척추에 소량의 예열 초음파 젤을 축으로 놓습니다. 초음파 프로브에 소량의 젤을 넣으십시오.

다음으로, 프로브의 전면이 두개골 쪽에 오도록 프로브를 척추와 평행하게 놓습니다. 복부 누운 상태에서 마우스를 사용하여 신장 랜드마크를 찾기 위해 해당 부위를 천천히 스캔합니다. 신장이 보이는 상태에서 탐침 꼬리를 당겨 난소를 찾습니다.이 난소는 매우 고 에코 성 난소 지방 패드 내에서 약간 고 에코 타원형에서 둥근 구조로, 신장에 의해 두개골-복부로, 등쪽 복벽에 의해 등쪽-측면으로 경계를 이룹니다.

제어 화면 하단의 슬라이더를 사용하여 신호 게인을 조정하여 이미지 대비를 개선합니다. 신장의 영상을 개선하려면 손가락을 사용하여 반대쪽 복부에 압력을 가하십시오. 압력과 각도를 척추와 평행한 것에서 복부 약 20도까지 변경합니다.

관심 기관이 보이면 클립 저장 또는 녹화 시작을 클릭하여 비디오를 캡처합니다. 완료되면 기록 중지 미리 설정된 프레임 수로 이미지를 유지합니다. 난소가 시야의 가장 두개골 측면에 올 때까지 프로브를 꼬리쪽으로 잡습니다.

프로브 압력과 각도를 변경하여 자궁을 보고 이미지화합니다. 관심 있는 각 기관에 대해 비디오 및 프레임 수집을 반복합니다. 옆다리 근육이 보이는 상태에서 등쪽 복벽을 따라 세로로 달리는 자궁을 찾으십시오.

장 루프와 자궁 고정 뿔을 구별하기 위해 연동 운동에 대해 조직을 모니터링합니다. 마우스를 등쪽 누운 자세로 놓아 복부 접근에서 이미지를 수집합니다. 눈 윤활이 충분하고 주둥이가 코 콘에 고정되어 있는지 확인하십시오.

치골의 정중선과 두개골에 프로브를 적용하기 전에 소량의 예열 초음파 젤을 복부 복부에 바르고 방광을 저에코 랜드마크로 찾습니다. 자궁 뿔을 찾으려면 탐침을 방광 옆으로 당깁니다. 마우스의 한쪽 또는 양쪽에서 가벼운 디지털 압력을 적용합니다.

자궁 뿔이 시야에 들어오면 프로브를 마우스에 수직으로 잡고 복부의 양쪽을 스캔하여 양쪽 뿔의 가로 모습을 캡처합니다. 프로브를 돌려 시상 뷰를 캡처합니다. 초음파 검사 후 종이 타월로 마우스를 닦은 후 케이지로 돌려 보내 회복하십시오.

마우스가 2-5 분 후에 완전히 깨어 나면 마우스를 동물 방으로 되돌려 보냅니다. 식염수 주입 전후의 마우스 복강의 초음파 영상 비교는 식염수 주사 후 자궁과 난소를 포함한 복부 장기의 향상된 시각화를 보여주었습니다. 복부 접근법은 저 에코 방광에 인접한 자궁 뿔의 단면을 연구하는 데 사용되었습니다.

Arid1a 및 Pten에 대한 항체를 사용한 면역조직화학을 사용하여 인접한 기질 조직과 비교하여 자궁 상피 세포에서 달성된 적절한 종양 억제 단백질 손실을 연구했습니다. 초기 병리학 적 변화가있는 마우스 자궁의 초음파 이미지는 독시사이클린 치료 3 주 후에 검출되어 자궁의 저 에코 및 확장 된 내강을 보여줍니다. 동일한 자궁에 대한 육안적 병리학 및 조직병리학 연구에서, 더 작지만 확장된 얇은 벽 자궁과 뚜렷한 내강의 보존을 갖는 초기 자궁내막 증식이 각각 관찰되었다.

나중에 안락사된 마우스는 더 작은 내강과 두꺼워진 벽을 가진 더 큰 자궁을 보여주었습니다. 프로브를 수동으로 배치하는 방법을 배울 때 과도한 압력이나 빠른 움직임으로 인해 장기 식별이 어려울 수 있습니다. 부드럽고 신중한 동작을 사용하고 먼저 랜드 마크 인 기관을 식별하는 데 집중하십시오.

연구 종점에서, 마우스를 희생시키고 조직을 수집하여 유전자 녹다운을 확인하고 조직 변화를 특성화합니다. 이 기술을 통해 조사관은 시간 경과에 따른 복강 내 병변을 모니터링할 수 있습니다. 그리고 우리의 경우 iPad 모델에서 자궁암 진행을 모니터링하는 데 사용했으며, 조직 병리학으로 확인했습니다.