一种测定果蝇运动活性的简单技术

该方法基于开源软件，从录制的视频中系统评估成虫和幼虫苍蝇的跟踪行为的局部运动活动。这种方法需要低成本的设备集成来记录和分析行为，使其成为筛选苍蝇运动的一种经济有效的方法。该技术用于识别具有局部运动障碍的人类疾病的苍蝇模型中的行为改变，但不适用于治疗疾病，残疾或困难。

在分析过程中必须清除相关的视频窗口，即原始视频窗口和处理视频窗口。首先，根据制造商的说明，以1比1的比例混合二氧化硅试剂盒的试剂A和试剂B，以准备用于果蝇运动跟踪的开放场地竞技场。接下来，将高清摄像机放在三脚架上，对其进行调整，使摄像机镜头垂直于二氧化硅竞技场的表面。

然后打开斐济的视频。将进度条拖动到初始帧并默认批准。使用手绘选择工具选择苍蝇的整个身体。

单击图像、调整以及亮度和对比度以调整白平衡，直到所选区域的灰度值接近宽背景。将麻醉的苍蝇转移到空旷的竞技场。一旦苍蝇从麻醉中恢复过来，将带有苍蝇的竞技场盘放在相机下方，并快速左右摇晃，以确保记录开始时苍蝇在运动。

按相机应用程序上的录制按钮开始视频录制。录制完成后，按停止按钮终止视频录制。使用 M-J 异教徒编码将录制的视频转换为 AVI 格式，以便可以使用斐济打开和分析它们。

此外，将视频的每秒帧数设置为成年苍蝇的 15 fps 和幼虫的 12 fps。要使用斐济打开视频，请在弹出窗口中选择两个选项，使用虚拟堆栈和转换为灰度。使用动物追踪器插件的设置活动图像工具获取处理窗口，并使用椭圆形工具在原始视频窗口中创建一个环绕竞技场的跟踪区域。

为处理窗口中的第一个空白帧设置滤镜和两个滤镜的参数。然后选择原始视频窗口中的下一帧，并选择处理窗口的过滤表面。选择过滤后的处理窗口后，使用设置阈值工具将带有红色轮廓的 Tract Fly 转弯，该轮廓在处理窗口中覆盖。

然后使用设置的斑点检测器让计算机识别具有红色配置文件的苍蝇，该配置文件覆盖在处理窗口中。为成蝇或幼虫设置最后一帧，如文本手稿中所述。使用显示斑点工具在原始视频窗口中显示跟踪矩形。

启动跟踪，并在监视完成后导出跟踪文件。使用动物追踪器和追踪分析器插件加载轨迹和区域文件。使用区域设置选择所需的索引，并更改参数设置。

使用帧速率计算帧间隔的时间。在跟踪分析仪中进行分析后，使用电子表格软件和图形板棱镜生成定量分析图表。打开曲目文件。

将所有坐标复制到Microsoft Office Excel，并使用空格键拆分单元格。要计算每帧间隔的不动时间，请选择所有计算结果并插入柱形图，以按整个柱形图的边距直观地显示不动时间。为了说明方向角度的变化，请选择所有计算结果并插入散点图。

用鱼藤酮处理的成蝇和第三龄幼虫与用溶剂DMSO喂养的对照苍蝇相比，具有显着的运动缺陷。对成蝇鱼藤酮处理的定量分析显示，行进距离和平均速度显着降低。并且不动时间显着增加。

代表性图显示，与对照组相比，喂食鱼藤酮的苍蝇每帧间隔的运动速度峰值较少，表明运动活动缺陷的严重程度。与对照苍蝇相比，每帧移动像素的机构主义不动列也显示，鱼藤酮喂养的苍蝇在一分钟内的运动明显减少。代表性图表说明了鱼藤酮喂养的方向变化的移动角度，对照动物也揭示了苍蝇选择方向的变化。

在第三龄幼虫中也观察到了类似的结果。结果表明，与对照组相比，喂食鱼藤酮的跟踪幼虫的行为运动明显受损。分析过程中最关键的一步是形成第一个空白帧，因为它证明了软件是否可以有效检查。

这项技术可以让研究人员更深入地研究多种缺陷的潜在机制，如神经或肌肉损伤。