Yöntem, yetişkinlerin ve larvaların kaydedilen videodan uçma davranışlarını izlemek için yerel motor aktivitelerini sistematik olarak değerlendirmek için açık kaynaklı yazılıma dayanmaktadır. Bu yöntem, davranışı kaydetmek ve analiz etmek için düşük maliyetli cihaz entegrasyonu gerektirir, bu da onu sinek hareketini taramak için uygun fiyatlı ve etkili bir yaklaşım haline getirir. Bu teknoloji, yerel hareket bozukluğu olan bir insan hastalığı sinek modelinde davranış modifikasyonunu tanımlamak için kullanılır, ancak hastalığın, sakatlıkların veya zorlukların tedavisi için uygun değildir.
Analiz işlemi sırasında ilgili video penceresini, yani orijinal ve işleme video penceresini temizlemek önemlidir. Başlamak için, drosophila hareket takibi için açık alan arenasını hazırlamak için, üreticinin talimatlarına göre, silika kitinin reaktifi A ve reaktif B'yi bir ila 10 oranında karıştırın. Ardından, HD kamerayı bir tripod üzerine yerleştirin ve kamera lensi silika arenanın yüzeyine dik olacak şekilde ayarlayın.
Ardından videoyu Fiji ile açın. İlerleme çubuğunu ilk kareye sürükleyin ve zımnen onaylayın. Serbest seçim aracını kullanarak sineğin tüm vücudunu seçin.
Seçilen alanın gri değeri geniş arka plana yaklaşana kadar beyaz dengesini ayarlamak için görüntü, ayarlama, parlaklık ve kontrast üzerine tıklayın. Anestezi altındaki sineği açık alan arenasına aktarın. Sinek anesteziden kurtulduktan sonra, arena tabağını sinek ile kameranın altına koyun ve kayıt başladığında sineğin hareket halinde olduğundan emin olmak için hızlıca bir yandan diğer yana sallayın.
Video kaydını başlatmak için kamera uygulamasındaki kayıt düğmesine basın. Kaydın tamamlanmasının ardından, video kaydını sonlandırmak için durdur düğmesine basın. Kaydedilen videoları M-J pagan kodlamasıyla AVI formatına dönüştürün, böylece Fiji kullanılarak açılabilir ve analiz edilebilirler.
Ayrıca videonun saniyedeki kare sayısını yetişkin sinekler için 15 fps'ye ve larvalar için 12 fps'ye ayarlayın. Videoyu Fiji ile açmak için açılır pencerede iki seçeneği belirleyin, sanal yığını kullanın ve gri ölçeğe dönüştürün. Hayvan izleyici eklentisinin etkin görüntü ayarlama aracını kullanarak bir işleme penceresi edinin ve oval aracı kullanarak orijinal video penceresinde arenayı çevreleyen bir izleme alanı oluşturun.
İşleme penceresindeki ilk boş çerçeve için filtreleri ve iki filtrenin parametrelerini ayarlayın. Ardından orijinal video penceresinde bir sonraki kareyi seçin ve işleme penceresinin filtrelenmiş yüzeyini seçin. Filtrelenmiş bir işleme penceresi seçildikten sonra, işleme penceresinde kaplanan kırmızı bir profille yolu uçurmak için eşik ayarlama aracını kullanın.
Ardından, bilgisayarın işleme penceresinde örtülü kırmızı bir profille sineği tanımasını sağlamak için set blob algılayıcısını kullanın. Metin makalesinde açıklandığı gibi yetişkin sinek veya larvalar için son kareyi ayarlayın. Orijinal video penceresinde bir izleme dikdörtgeni sunmak için blobları göster aracını kullanın.
İzlemeyi başlatın ve izleme tamamlandıktan sonra izleme dosyasını dışa aktarın. Hayvan izleyici ve izleme analizörü eklentisini kullanarak parça ve bölge dosyalarını yükleyin. Bölge ayarlarını kullanarak istediğiniz dizini seçin ve parametre ayarlarını değiştirin.
Kare hızını kullanarak kare aralığının süresini hesaplayın. İzleme analizöründe analiz edildikten sonra elektronik tablo yazılımı ve grafik pedi prizması kullanarak nicel analiz çizelgeleri oluşturun. İzleme dosyasını açın.
Tüm koordinatları Microsoft Office Excel'e kopyalayın ve boşluk tuşunu kullanarak hücreleri bölün. Kare aralığı başına hareketsizlik süresini hesaplamak için, hesaplanan tüm sonuçları seçin ve hareketsizlik süresini tüm sütun grafiğinin kenar boşluğuna göre görsel olarak görüntülemek üzere bir sütun grafiği ekleyin. Yön açısındaki değişiklikleri göstermek için, hesaplanan tüm sonuçları seçin ve bir dağılım diyagramı ekleyin.
Rotenone ile tedavi edilen yetişkin sinekler ve üçüncü Instar larvaları, çözücü DMSO ile beslenen kontrol sineklerine kıyasla önemli lokomotor eksikliklere sahipti. Yetişkin sineklerde Rotenone tedavisinin kantitatif analizi, kat edilen mesafe ve ortalama hızda önemli bir azalma olduğunu göstermiştir. Ve hareketsizlik süresinde önemli bir artış.
Temsili grafikler, Rotenone ile beslenen sineklerde kare aralığı başına hareket hızı için kontroldekilere kıyasla daha az tepe noktası gösterdi ve bu da lokomotor aktivite açığının ciddiyetini gösterdi. Kare başına hareket eden piksellerin kurumsal-istik hareketsizlik sütunu, kontrol sineklerine kıyasla, Rotenone ile beslenen sinekler için bir dakika içinde önemli ölçüde daha az hareket gösterdi. Rotenone besleme ve kontrol hayvanlarındaki yön değişikliklerinin hareket açısını gösteren temsili grafikler de sinekler tarafından seçilen yöndeki değişiklikleri ortaya çıkardı.
Üçüncü Instar larvaları için de benzer sonuçlar gözlenmiştir. Sonuçlar, Rotenone ile beslenen larvaları izlemenin davranışsal hareketinin kontrole kıyasla önemli ölçüde bozulduğunu ortaya koymuştur. Analiz sürecindeki en önemli adım, yazılımın etkili bir şekilde kontrol edip edemeyeceğini kanıtladığı için boş çerçevenin ilkini oluşturmaktır.
Bu teknoloji, araştırmacıların sinir veya kas hasarı gibi çoklu kusurların altında yatan mekanizmayı daha derinlemesine incelemelerine izin verebilir.
