基于细胞的电阻抗平台，用于实时评估寨卡病毒抑制剂

病毒感染是高度动态的，病毒学中的传统终点测定有一个局限性，即所选终点可能导致信息遗漏。该技术的主要优点是，使用基于细胞的电阻抗，可以实时跟踪病毒感染和抗病毒化合物的活性。演示该程序的将是Eef Meyen，我们实验室的实验室技术员。

首先，通过采用指叉电极的96孔板来制备CEI板。向每个孔中加入100微升生长培养基，并用DPBS填充孔之间的空间。然后，将板在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育四小时。

要接种A549细胞，请按照手稿中的说明将它们从培养瓶中分离出来，并将它们重悬于新鲜的生长培养基中。将细胞悬液转移到50毫升管中。计数活细胞并将其稀释在新鲜生长培养基中以获得所需的细胞密度。

孵育后，用多通道移液器从96孔板中取出生长培养基。每孔分配100微升细胞悬液。细胞平衡后，将板放入CEI装置中以设置和进行CEI测定。

打开设备的软件，然后在“收集数据”窗格中，单击“设置”以设置新实验。将笔记本电脑连接到 ECIS 设备。通过检查孔的阻抗来配置板，如绿色所示。

在“孔配置”窗格中，根据使用的文化器皿选择阵列类型，然后单击“多频率时间模式”。然后，按开始开始测量。将化合物放在冰上。

在5毫升聚丙烯管中用平衡的测定介质进行10倍浓缩稀释，然后加入化合物。在“数据收集设置”窗格中，单击“暂停”，完成当前时间点后，取出 96 孔板。在光学显微镜下观察细胞的粘附和单层形成。

接下来，使用多通道移液器从每个孔中吸出20微升培养基，并在所需孔中加入20微升复合溶液或载体。将板在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育 15 分钟。要制备病毒溶液，请解冻一瓶病毒原液。

在15毫升聚丙烯管中用测定培养基以所需的MOI稀释后，加入病毒原液。在指定的孔中加入病毒稀释液后，向细胞对照孔中加入100微升测定培养基。然后，对所使用的病毒容器进行净化。

将板放回CEI设备中，然后单击“恢复”以连续六天继续测量。要分析数据，请单击“完成”以结束实验并添加“输入实验摘要”。数据收集完成后，选择“确定”。在“图形”窗格中选择所需的频率。

确保在“井配置”窗格中选择了所有孔，然后单击“文件”，然后单击“导出数据”，然后单击“图形数据”以电子表格格式导出数据。CEI测定表明，感染动力学高度依赖于细胞类型，U87细胞仅在高MOI下对寨卡病毒感染敏感。CEI测定还显示出在高细胞接种下完全生长的细胞单层，并且不能进一步扩散到CEI电极上，导致细胞对照和病毒对照之间存在细微差异。

对于较大的细胞类型U87，过于密集的接种细胞可能导致细胞单层完全分离。亚洲谱系PRVABC59中具有代表性的非洲MR766寨卡病毒株表现出类似的CEI模式。然而，PRVABC59具有稍慢的细胞病变效应诱导特性，这也反映在CIT50值上。

两种寨卡病毒株的三种不同MOI的阻抗曲线表明，特定的化合物浓度延缓了寨卡病毒感染引起的阻抗下降。CEI测定显示，抗病毒活性取决于MOI和AUCN计算确定的IC50值。评估的CIT50值显示了细胞生长和感染动力学中的化合物效力。

CEI是一种强大的技术，可实时、无标记和非侵入性地评估和表征针对寨卡病毒复制的化合物。