Quelle: Labor von Dr. B. Jill Venton - University of Virginia

Sichtbare Ultraviolett (UV-Vis) Spektroskopie ist eines der beliebtesten analytische Techniken, weil es sehr vielseitig und in der Lage, nahezu jedes Molekül zu erkennen ist. Mit UV-Vis-Spektroskopie die UV-Vis-Licht wird durch eine Probe bestanden und die Durchlässigkeit von Licht durch eine Probe gemessen. Aus der Transmission (T) kann die Extinktion als eine =-Log (T) berechnet werden. Ein Absorptionsspektrum erhält, die die Extinktion einer Verbindung bei unterschiedlichen Wellenlängen zeigt. Die Höhe der Extinktion bei beliebiger Wellenlänge ist aufgrund der chemischen Struktur des Moleküls.

UV-Vis einsetzbar auf qualitative Weise zu identifizieren funktionelle Gruppen oder bestätigen die Identität einer Verbindung durch den Abgleich der Absorptionsspektrum. Es kann auch in einer quantitativen Weise verwendet werden, als Konzentration des Analyten im Zusammenhang mit der Extinktion mit der Beerschen Gesetz. UV-Vis Spektroskopie wird verwendet, um die Menge an DNA oder Protein in einer Probe für die Wasseranalyse und als Detektor für viele Arten der Chromatographie zu quantifizieren. Kinetik chemischer Reaktionen durch wiederholte UV-Vis Messungen im Laufe der Zeit auch mit UV-Vis Spektroskopie gemessen. UV-Vis sind in der Regel mit einem Spektrophotometer Messungen. UV-Vis ist auch ein sehr beliebtes Detektor für andere analytische Techniken, wie Chromatographie, weil es viele Verbindungen zu erkennen.

UV-Vis ist normalerweise nicht die empfindlichsten Spektroskopie-Technik, weil über einen kurzen Pfadlänge nicht viel Licht absorbiert wird. Ndere Spektroskopie wie Fluoreszenz haben höheren Empfindlichkeit, aber sie sind nicht als allgemein anwendbar, wie die meisten Moleküle nicht fluoreszierende. UV-Vis hat eine ähnliche Empfindlichkeit mit anderen Extinktion Messungen, wie Infrarot-Spektroskopie.

1. kalibrieren Sie das Spektrometer

1. Schalten Sie die UV-Vis-Spektrometer und lassen Sie die Lampen zum Aufwärmen für einen angemessenen Zeitraum (ca. 20 min) um sie zu stabilisieren.
2. Füllen Sie eine Küvette mit dem Lösungsmittel für die Probe und stellen Sie sicher, dass außen sauber ist. Dies wird als eine leere dienen und helfen, leichte Verluste durch Streuung und Absorption durch das Lösungsmittel entfallen.
3. Legen Sie die Küvette in das Spektrometer. Achten Sie darauf, die Küvette rich

UV-Vis kann verwendet werden, um ein Spektrum von farbigen Verbindungen zu erhalten. In Figur 1Azeigt das Absorptionsspektrum von einem blauen Farbstoff. Der Hintergrund zeigt die Farben des Lichtes im sichtbaren Spektrum. Die blaue Farbe hat ein λ_Max. Extinktion in Orange/rot. Abbildung 1 b zeigt ein Spektrum an einen roten Farbstoff, mit λ_Max. im Grünen.

Kinetik kann von einem Grundstück von Extinkti...

UV-Vis wird in vielen chemischen Analysen verwendet. Es wird verwendet, um die Menge an Protein in einer Lösung quantitate, wie die meisten Proteine stark bei 280 absorbieren nm. Abbildung 3 zeigt ein Beispiel Spektren von Cytochrom C, hat eine hohe Absorption bei 280 und auch bei 450 wegen eine Häm-Gruppe. UV-Vis dient auch als Standardtechnik zur Quantifizierung der Menge an DNA in einer Probe, wie alle Grundlagen stark bei 260 absorbieren nm. RNA und Proteine absorbieren auch bei 260 nm, so dass die..