1. Herstellung von Lösungen und Materialien Diese Schritte sollten durchgeführt werden, mehrere Tage im Voraus. <ol><li> Deckgläser. Wasser, bei einer 1 gemischt: Die Deckgläser wurden durch Untertauchen für 10 Minuten in eine Lösung von Linbro 7X Reinigungsmittel gesäubert 3-Verhältnis und unter Rühren erhitzt, bis klar. Deckgläser wurden ausgiebig mit deionisiertem Wasser gespült und anschließend bei 450 ° C für 6 Stunden gebacken. Loading Deckgläser in keramische Färbegestelle (siehe Reagenzien) vereinfacht diesen Prozess. </li><li> Protein-Lösung für Stanz. Rekonstituieren Fibronektin folgenden Anweisungen des Herstellers, um eine Stammlösung von 1 mg / ml Konzentration. </li></ol> 2. Cast Briefmarken aus der topologischen Meister Diese Schritte können durchgeführt werden, mehrere Tage im Voraus. Shop Briefmarken Muster-up in einer Schale mit Deckel, wie ein Gewebe Kulturschale. <ol><li> Entfernen Sie den Staub vom Meister mit einem Strom von Druckluft, gefilterte Luft oder Inertgas. </li><li> Setzen Sie den Meister, gemusterten Seite nach oben in den Boden einer Plastikschale nur größer als der Meister. 60 - oder 100-mm Gewebekulturschalen sind für diesen Zweck gut geeignet. </li><li> In einem Polystyrol 50 ml Zentrifugenröhrchen, kombinieren die Sylgard Komponenten in einem Verhältnis von Härter: Elastomer Basis von 1: 10 nach Gewicht. Nach gründlichem Mischen mit einem Kunststoff-Gerät, wie ein Einweg-Pipette. Bereiten Sie mindestens 0,2 ml aus Elastomer pro Quadratzentimeter Gericht Bereich. </li><li> Zentrifugieren Sie die 50 ml Tube mit 300 g für 5 min, um Luftblasen zu entfernen. </li><li> Gießen Sie das Elastomer über den Master, dann in einem Exsikkator Platz unter Vakuum für 30 Minuten. </li><li> Cure das Elastomer in einem Ofen bei 65 ° C für mindestens 2 Stunden. Aushärtung bei höheren Temperaturen und längeren Zeiten Ergebnisse in steifer Elastomer. Lassen Sie auf Raumtemperatur abkühlen. </li><li> Separate das Blatt Briefmarken aus dem Master. </li></ol> 3. Mikrokontaktdruck von Fibronektin auf Glas <ol><li> Schneiden Sie einen einzigen Stempel. Briefmarken von 4 mm x 4 mm bis 1 cm x 1 cm groß und 1 bis 2 mm dick sind am einfachsten zu starten. Legen Sie Muster nach oben auf eine Glasplatte oder kleine Plastikschale. </li><li> Ort Stempel in einen Plasma-Reiniger und Verfahren unter Vakuum für 30 Sekunden. Ein Harrick Scientific Plasma-Reiniger (siehe Ausstattung), am höchsten Output Einstellung gesetzt wird machen die PDMS-Oberfläche hydrophil. Längere Zeiten führen zu Rissen des Elastomers. </li><li> Verdünnen Sie die Fibronektin-Lösung mit deionisiertem Wasser auf eine Stanz-Konzentration von 50 ug / ml. </li><li> Legen Sie einen kleinen Tropfen (10 bis 50 ul) von Stanz-Lösung auf den Stempel. Es wird über die hydrophile Oberfläche verteilt. Fügen Sie nur soviel Lösung, dass der Rückgang der Stempel deckt, aber nicht über die Kanten laufen. Lassen Protein adsorbieren für 5 Minuten zu stempeln. </li><li> Mit einem Kimwipe ® oder anderen sauberen Papiertuch, Docht aus die meisten der Protein-Lösung aus dem Stempel, ohne die strukturierten Gebiet. </li><li> Trocknen Sie die restliche Lösung aus der Stempel unter einem Strom von sauberen, trockenen, inerten Gas wie Stickstoff. </li><li> Mit Pinzette, entfernen Sie den Stempel aus der Glas-Objektträger, umzukehren, und in Kontakt mit dem gereinigten Deckglas (die Oberfläche strukturiert werden). Legen Sie ein Gewicht auf einen guten Kontakt zu fördern. Das spezifische Gewicht, dass die besten Strukturierung bietet, ist abhängig von den Stempel Größe und Muster; beginnen mit einem 5 g Gewicht und passen zwischen Stanzteile. Lassen Sie Stempel in Kontakt mit der Oberfläche für 1 Minute. </li><li> Vorsichtig zerlegen den Stack und separaten Stempel aus Deckglas. </li><li> Kräftig spülen gemusterten Deckglas in PBS, durch deionisiertes Wasser gefolgt, um Protein, das nicht an der Oberfläche adsorbiert ist zu entfernen. Dry Deckglas unter Stickstoffstrom. </li></ol> Repräsentative Ergebnisse Mikrokontaktdruck ist ein leistungsfähiges Verfahren zur Strukturierung Molekülen auf Oberflächen. Dieser Prozess hat die Fähigkeit, Funktionen mit Abmessungen von zehn Mikrometern bis einigen hundert Nanometern zu schaffen; in Abb.. 1A, sind die Logos auf der linken Seite jeweils 200 pm in der Höhe, während die grünen Flecken in Abb. dargestellt. 1B 1 ​​um Durchmesser und Abstand bei 4 um Intervalle, gemessen von Mitte zu Mitte. Abb.. 1B zeigt auch eine leistungsfähige Immobilien Mikrokontaktprägen, nämlich, dass es ist und additiven Prozess. Mehrere Runden von Mikrokontaktdrucken kann eine einzelne Fläche in Mehrkomponenten-Systeme 3 erstellen angewendet werden. <img src="/files/ftp_upload/old/1065_2008_11_24_3/Figure_a.jpg" alt="Abbildung A" /><img src="/files/ftp_upload/old/1065_2008_11_24_4/FIGURE_B.jpg" alt="Abbildung B" />

<ol>
	<li>Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometric+control+of+cell+life+and+death.">Geometric control of cell life and death.</a> Science. 276, 1425-1425 (1997).</li><li>Kumar, A., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Features+of+Gold+Having+Micrometer+to+Centimeter+Dimensions+can+be+Formed+Through+a+Combination+of+Stamping+with+an+Elastomeric+Stamp+and+an+Alkanethiol+"Ink"+Followed+by+Chemical+Etching.">Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol "Ink" Followed by Chemical Etching.</a> Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).</li><li>St. John, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+Glial+Cell+Attachment+to+Microcontact-printed+Surfaces.">Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces.</a> Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).</li><li>Kam, L., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+to+protein-micropatterned-supported+lipid+bilayer+membranes.">Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).</li><li>Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterning+Hybrid+Surfaces+of+Proteins+and+Supported+Lipid+Bilayers.">Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers.</a> Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).</li><li>Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micropatterning+of+costimulatory+ligands+enhances+CD4++T+cell+function.">Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).</li><li>Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+presentation+of+L1+and+N-cadherin+in+multicomponent,+microscale+patterns+differentially+direct+neuron+function+in+vitro.">Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro.</a> Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Die Mikrokontaktdrucken Prozess ist konzeptionell einfach und sehr robust, dass die Strukturierung einer Vielzahl von Molekülen auf einer Vielzahl von Substraten aufgebracht. Allerdings bleibt dieser Prozess etwas wie eine Kunst. Die spezielle Geometrie des Musters erstellt werden soll, Eiweiß zu strukturierende, Auflagegewicht und Beschichtung / Stanzen Bedingungen wirken sich auf die Prägequalität. Zum Beispiel, zu wenig Gewicht, auf große Features, führt oft zu Lücken in der Muster wie in der oberen rechten Logo ersichtlich ist. 1...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Plasma Cleaner</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harrick Scientific Products, Inc.</td>
<td>PDC-32G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Desiccator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>5315-0150</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10010-072</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protein labeling kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A30006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fibronectin </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F2006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Staining rack</td>
<td>Reagent</td>
<td>Thomas Scientific</td>
<td>8542E40</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-544-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ellsworth Adhesives</td>
<td>184 Sil Elast Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diffraction Grating</td>
<td>Reagent</td>
<td>Edmund Scientific</td>
<td>3040267</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

microcontact printing of proteins for cell biology

Die Fähigkeit, Muster Proteinen und anderen Biomolekülen auf Substrate ist für die Erfassung der räumlichen Komplexität der extrazellulären Umgebung wichtig. Entwicklung von Mikrokontaktdrucken durch die Whitesides Gruppe (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"&gt; Http://gmwgroup.harvard.edu/</a&gt;) In der Mitte der 1990er Jahre revolutioniert diesem Bereich, indem Mikroelektronik / Mikrofabrikationstechniken zugänglich Labors auf dem Gebiet Life Sciences fokussiert. Erste Implementierungen dieser Methode verwendet Polydimethylsiloxan (PDMS) Briefmarken, um Muster von funktionalisierten Chemikalien auf Materialoberflächen erstellen<sup&gt; 1</sup&gt;. Seitdem haben eine Reihe von innovativen Ansätzen, um Muster anderer Moleküle entwickelt worden, einschließlich Proteinen<sup&gt; 2</sup&gt;. Dieses Video zeigt den grundlegenden Prozess der Erstellung PDMS-Stempel und nutzt sie, um Muster Proteine, wie diese Schritte schwierig, genau in Worte zu fassen sind. Wir konzentrieren uns auf die Strukturierung der extrazellulären Matrix-Protein Fibronektin auf Deckgläschen als ein konkretes Beispiel der Musterung. Ein wichtiger Bestandteil des Mikrokontaktdrucken Prozess ist eine topologische Meister, von denen die Briefmarken abgegeben werden; das Heben und Senken Regionen der Meister in die Stempel gespiegelt und definieren die endgültige Muster. Typischerweise wird ein Kapitän eines Silizium-Wafers mit Fotolack beschichtet und dann strukturiert durch Photolithographie besteht, wie hier geschehen. Erstellung von Meistern, die ein bestimmtes Muster erfordert spezielle Ausrüstung und wird am besten in Absprache mit einem Fertigungszentrum oder Anlage angefahren. Allerdings kann fast jedes Substrat mit Topologie wie ein Meister, wie Kunststoff-Beugungsgitter (siehe Reagenzien für ein Beispiel) verwendet werden, und solche glückliche Meister geben leicht zugänglich, einfache Muster. Dieses Protokoll beginnt mit dem Punkt, der mit einem Master in der Hand.

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Microcontact Printing of Proteins for Cell Biology

Mikrokontaktdruck ausgiebig in die Muster von Proteinen und anderen Molekülen auf Materialoberflächen eingesetzt. Wir zeigen die wichtigsten Schritte dieses Prozesses, Stanz-Muster von Fibronektin auf Glas.

Mikrokontaktdrucken von Proteinen für Zellbiologie

The ability to pattern proteins and other biomolecules onto substrates is important for capturing the spatial complexity of the extracellular environment. ...

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Biology

19.9K Aufrufe.  Columbia University. Mikrokontaktdruck ausgiebig in die Muster von Proteinen und anderen Molekülen auf Materialoberflächen eingesetzt. Wir zeigen die wichtigsten Schritte dieses Prozesses, Stanz-Muster von Fibronektin auf Glas.