Extraktion von DNA aus humanen Sputumproben zum schnellen Nachweis bakterieller Krankheitserreger mittels eines mikrofluidischen Chips

Reinigen Sie zunächst die Mundhöhle und die Zähne mit sauberem Wasser. Bitten Sie die Patienten mit Zahnersatz, diese zu entfernen. Weisen Sie den Patienten an, kräftig zu husten, um tiefen Atemwegsauswurf in einen Sputumbehälter auszustoßen.

Um die DNA zu extrahieren, fügen Sie der Probe ein geeignetes Volumen von 10 % Natriumhydroxid hinzu, basierend auf ihrer Viskosität. Die Suspension 15 Sekunden lang vortexen und dann 30 Minuten lang bei 37 Grad Celsius inkubieren, um die Probe zu verflüssigen. Pipettieren Sie anschließend einen Milliliter der verflüssigten Probe in ein 1,5-Milliliter-Zentrifugenröhrchen.

Die Probe wird bei 15.777 g fünf Minuten lang bei zwei bis sechs Grad Celsius zentrifugiert. Pipettieren Sie dann den Überstand heraus, um ihn zu entsorgen. Geben Sie nun einen Milliliter der Waschlösung in die Tube und wirbeln Sie sie ein, um den Niederschlag vom Boden der Tube zu heben.

Nachdem Sie den Überstand wie zuvor zentrifiert und verworfen haben, pipettieren Sie 100 Mikroliter Nukleinsäure-Extraktionslösung auf die Palette. Mit einer Pipette den Niederschlag ansaugen und gründlich mit der Lösung vermischen. Übertragen Sie die Flüssigkeit und den Niederschlag zusammen in ein Nukleinsäure-Extraktionsröhrchen.

Legen Sie das Rohr fünf Minuten lang bei mittlerer Geschwindigkeit in einen Wirbelmischer. Übertragen Sie dann das Rohr fünf Minuten lang in ein Metallbad bei einer konstanten Temperatur von 100 Grad Celsius. Zum Schluss zentrifugieren Sie die Proben bei 15.777 g fünf Minuten lang bei zwei bis sechs Grad Celsius, bevor Sie weitere Experimente durchführen.