Spülen Sie zunächst den extrahierten Zahn mit einer sterilen Kochsalzlösung aus, um jegliches Blut zu entfernen. Schneiden Sie den Zahn vorsichtig in Längsrichtung mit einem Hartmetall-Fissurenfräser in zwei Teile, während Sie mit steriler Kochsalzlösung spülen. Anschließend transportieren Sie den Zahn und seine intakte Pulpa in sterilen alpha-MEM-Medien auf Eis in das Zell- und Gewebekulturlabor.
Geben Sie dann die extrahierte Zahnprobe in eine sterile Kultur-Petrischale und spülen Sie sie drei- bis viermal gründlich mit sterilem PBS aus. Entfernen Sie mit einem scharfen Bagger und einer Pinzette vorsichtig das Pulpagewebe und reinigen Sie es gründlich mit sterilem PBS, um Blutspuren zu entfernen. Teilen Sie nun die Oberfläche der Schale in vier Teile, indem Sie in jeden Teil 1 bis 2 Milliliter steriles PBS geben.
Legen Sie die Pulpagewebeprobe in einen Bereich und schneiden Sie sie mit einer chirurgischen Klinge in kleine Stücke. Übertragen Sie die Gewebestücke, indem Sie sie mit PBS in aufeinanderfolgende Bereiche heben. In der Zwischenzeit fügen Sie etwa 0,8 bis 1 Milliliter Alpha-MEM mit nicht-essentiellen Aminosäuren mit 10 % FBS und einen Antibiotika-Cocktail in einer Sechs-Well-Platte hinzu.
Und bewegen Sie es, um die Medien gleichmäßig zu verbreiten. Es werden verschiedene Stadien der Primärkulturentwicklung von Stammzellen der Zahnpulpa gezeigt. Am zweiten Tag der Aussaat wurden abgerundete blasenartige Zellen aus Zahngewebe beobachtet.
Am vierten Tag wurde ein chaotischartiges Netzwerk von Zellen beobachtet, die aus dem Gewebe austraten. Am 13. Tag stieg jedoch die Anzahl der Zellen, die aus dem Explantat hervorgingen. Und am Ende der zweiten Woche waren die meisten Explantate von vielen anhaftenden Zellen mit spindelförmiger Morphologie umgeben.
