This work has been supported by Elizabeth E. Kennedy Research Award.

1. Vorbereitung der Produzentenstammes <ol><li> Streak eine Pneumokokken-Stamm für Bakteriozin Produktion auf einem 5% Schafblut CASO-Agar Platte von -80 ° C Gefrierschrank Aktien getestet werden. HINWEIS: Die Verwendung von Blut-Platten für das anfängliche Wachstum des Stammes zu Inhibitionstest erhöht die Reproduzierbarkeit des Tests. Zusätzlich können andere nicht-Pneumokokken-Stämme, die Bakteriozine verwendet werden, obwohl die Wachstumsbedingungen müssen für einen bestimmten Organismus verändert werden. Wir haben Streptococcus mitis und Lactococcus lactis in der Overlay-Assay erfolgreich eingesetzt. </li><li> Inkubieren der Platte über Nacht (O / N) bei 37 ° C mit 5% CO 2. </li><li> Nach der Inkubation des Produzentenstammes, bereiten Sie die CASO-Agar (TSA) Platte durch Pipettieren von 3.000 bis 4.000 Einheiten Katalase auf Platten mit 25 ml TSA und die Ausbreitung der Katalase-Lösung mit sterilen Glasperlen. Lassen Sie die Platte trocken für etwa 10 min untereinem biologischen Sicherheitsschrank. </li><li> Sammeln Sie eine sichtbare Menge von Bakterien auf einer Pipettenspitze. Stechen die Pipettenspitze in die getrocknet TSA Platte. HINWEIS: Mehr als ein Produktionsstamm können in einem einzigen TSA Platte erstochen werden. Es ist wichtig, Raum aus, so dass die Stichverletzungen resultierenden Halos nicht überlappen. <ol><li> Wenn möglich, Bakteriozin Produzent bekannt als eine positive Kontrolle und der Stamm in der Überlagerung als Negativkontrolle verwendet werden. HINWEIS: Positive und negative Kontrollen sind zuvor veröffentlicht und sind auf Anfrage erhältlich 10. </li></ol></li><li> Inkubieren TSA-Platte, die mehrere Stichverletzungen bei 37 ° C mit 5% CO 2 für 6 Stunden. </li></ol> 2. Erstellen Glycerol Stocks des Overlay Dehnungs <ol><li> Glycerin-Stammlösungen herzustellen (Kulturen mittleren exponentiellen Phase nach Zugabe von Glycerin gezüchtet und dann bei -80 ° C gelagert) vor dem Tag des Overlay-Assay. Impfen 5-10 Kolonien von Pneumokokken-strain für Empfindlichkeit oder Pheromon-Sekretion in Todd-Hewitt-Medium mit 0,5% Hefeextrakt (THY) getestet werden. HINWEIS: Der Bau der BLPC induzierbaren Reporter ist bereits beschrieben worden und 2 Stämme sind auf Anfrage erhältlich. </li><li> Mit 5 ml THY mit fest geschlossenen Deckel in einem 37 ° C Wasserbad inkubieren 5-10 Kolonien in Glasröhrchen ohne Schütteln. </li><li> Kulturen bei 37 ° C inkubieren, bis sie eine OD 620 zu erreichen von 0,3 bis 0,5. HINWEIS: Diese wird ca. 4-5 Stunden dauern, abhängig von der Belastung eingesetzt. <ol><li> Invertieren Sie das Röhrchen vorsichtig ein paar Mal vor der Messung der OD. </li></ol></li><li> Wenn das Experiment kann nicht am selben Tag durchgeführt werden, oder die Belastung wird mehrfach in der Zukunft genutzt werden, stellen Glycerin Aktien und wieder den Versuch zu einem späteren Zeitpunkt. Für Glycerinstamm Fügen Glycerin Kulturen bis zu einer Endkonzentration von 20%. Aliquoten Kulturen in 1,5 ml Reaktionsgefäße und bei -80 ° C. HINWEIS: Die Proben können sMonate bei -80 ° C überwacht. Wenn nicht machen Glycerin Aktien, verwenden Proben direkt für Overlay-Assay. </li></ol> 3. Overlay Assay <ol><li> Kurz vor der Anwendung zu überlagern, mischen Sie die Overlay-Komponenten. In einem 15 ml konischen Röhrchen, 5 ml THY, 3.000-4.000 U Katalase und 200 ul der Overlay-Stamm Bouillonkultur, die entweder gewachsen war, wurde an diesem Tag oder ein Glycerin Lager der Kultur, die bei Raumtemperatur aufgetaut wurde. Bei Verwendung der Reporter-Stamm, werden 50 ul X-Gal (40 mg / ml) zu dem Überlagerungsmischung. Verwenden Sie eine konische Röhrchen pro Platte. </li><li> Äquilibrieren Overlay Mischung bei Raumtemperatur vor der Zugabe des geschmolzenen TSA. </li><li> Entfernen TSA-Platte mit erstochen Belastung von Inkubator. Schmelzen festen TSA in Mikrowelle und halten bei 55 ° C Wasserbad bis zur Verwendung. 3 ml geschmolzenem TSA mit 1,5% Agar und 55 ° C abgekühlt, um Mischung zu überlagern. <ol><li> Bereiten Sie die Overlay-Gemisch unmittelbar vor dem Pipettieren wird die Mischung beginnt zu sehr verfestigenschnell. HINWEIS: Wenn die Überlagerung beginnt vor Beschichtung verfestigt, werden die Ergebnisse nicht interpretierbar sein. </li></ol></li><li> Mischen Sie die Mischung durch Overlay-und Abpipettieren mehrmals mit einer 5 ml Pipette man aufpassen, nicht zu Blasen in die Mischung einführen. Langsam pipettieren Overlay Mischung direkt auf die Platte TSA erstochen. Halten Sie die Platte auf dem Labortisch für wenige Minuten und ermöglicht es der Agar zu verhärten. <ol><li> Die Platte, um die Overlay-Mischung verteilen nicht drehen, wird dieses Wachstum von der erstochen Kultur in den Überlagerungs ziehen. </li></ol></li><li> Vorsichtig TSA-Platte mit Overlay in 37 ° C-Inkubator mit 5% CO 2 O / N (ca. 16-18 h). </li><li> Beachten Sie die Platten nach Wachstum über Nacht. Die Platten sollten nur in Bereichen, in denen die Hemmung oder Pheromonsignal aufgetreten undurchsichtig vom Wachstum des Overlay-Belastung angezeigt. Diese werden als entweder klar oder blau Zonen rund um den Stamm erscheinen erstochen auf. HINWEIS: Obwohl Messements der Durchmesser der blau oder Clearing zur quantitativen Beurteilung bestimmt werden kann, Unterschiede in der Durchmesser kann auch in Abhängigkeit von der Menge der Bakterien, die in die Platte gestochen wurde, abhängig. Die Overlay-Assay ist ein qualitativer Test, jede quantitative Bewertung sollte mit Vorsicht interpretiert werden. Jede sichtbare Lichtung im Vergleich zur Negativkontrolle wird als Aktivität angesehen. </li></ol>

<ol>
	<li>Dawid, S., Roche, A. M., Weiser, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blp+bacteriocins+of+Streptococcus+pneumoniae+mediate+intraspecies+competition+both+in+vitro+and+in+vivo.">The blp bacteriocins of Streptococcus pneumoniae mediate intraspecies competition both in vitro and in vivo.</a> Infect Immun. 75 (1), 443-451 (2007).</li><li>Sawa, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+enterocin+W,+a+novel+two-peptide+lantibiotic+produced+by+Enterococcus+faecalis+NKR-4-1.">Isolation and characterization of enterocin W, a novel two-peptide lantibiotic produced by Enterococcus faecalis NKR-4-1.</a> Appl Environ Microbiol. 78 (3), 900-903 (2012).</li><li>Kochan, T. J., Dawid, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+HtrA+protease+of+Streptococcus+pneumoniae+controls+density-dependent+stimulation+of+the+bacteriocin+blp+locus+via+disruption+of+pheromone+secretion.">The HtrA protease of Streptococcus pneumoniae controls density-dependent stimulation of the bacteriocin blp locus via disruption of pheromone secretion.</a> J Bacteriol. 195 (7), 1561-1572 (2013).</li><li>Lux, T., Nuhn, M., Hakenbeck, R., Reichmann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+of+bacteriocins+and+activity+spectrum+in+Streptococcus+pneumoniae.">Diversity of bacteriocins and activity spectrum in Streptococcus pneumoniae.</a> J Bacteriol. 189 (21), 7741-7751 (2007).</li><li>Reichmann, P., Hakenbeck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allelic+variation+in+a+peptide-inducible+two-component+system+of+Streptococcus+pneumoniae.">Allelic variation in a peptide-inducible two-component system of Streptococcus pneumoniae.</a> FEMS Microbiol Lett. 190 (2), 231-236 (2000).</li><li>Saizieu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarray-based+identification+of+a+novel+Streptococcus+pneumoniae+regulon+controlled+by+an+autoinduced+peptide.">Microarray-based identification of a novel Streptococcus pneumoniae regulon controlled by an autoinduced peptide.</a> J Bacteriol. 182 (17), 4696-4703 (2000).</li><li>Barbour, A., Philip, K., Muniandy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+production,+purification,+characterization+and+mechanism+of+action+of+salivaricin+9+lantibiotic+produced+by+Streptococcus+salivarius+NU10.">Enhanced production, purification, characterization and mechanism of action of salivaricin 9 lantibiotic produced by Streptococcus salivarius NU10.</a> PLoS One. 8 (10), 77751 (2013).</li><li>Wladyka, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+biochemical+characterization,+and+cloning+of+a+bacteriocin+from+the+poultry-associated+Staphylococcus+aureus+strain+CH-91.">Isolation, biochemical characterization, and cloning of a bacteriocin from the poultry-associated Staphylococcus aureus strain CH-91.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 97 (16), 7229-7239 (2013).</li><li>Shea, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bactofencin+a,+a+new+type+of+cationic+bacteriocin+with+unusual+immunity.">Bactofencin a, a new type of cationic bacteriocin with unusual immunity.</a> 4 (6), 00498-00413 (2013).</li><li>Son, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+mutations+in+the+pneumococcal+bacteriocin+transporter+gene,+blpA,+result+in+a+complex+population+consisting+of+producers+and+cheaters.">Conserved mutations in the pneumococcal bacteriocin transporter gene, blpA, result in a complex population consisting of producers and cheaters.</a> MBio. 2 (5), (2011).</li><li>Kochan, T. J., Dawid, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+HtrA+protease+of+Streptococcus+pneumoniae+controls+density-dependent+stimulation+of+the+bacteriocin+blp+locus+via+disruption+of+pheromone+secretion.">The HtrA protease of Streptococcus pneumoniae controls density-dependent stimulation of the bacteriocin blp locus via disruption of pheromone secretion.</a> J Bacteriol. 195, 1561-1572 (2013).</li><li>Widdick, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+engineering+of+the+cinnamycin+biosynthetic+gene+cluster+from+Streptomyces+cinnamoneus+cinnamoneus+DSM+40005.">Cloning and engineering of the cinnamycin biosynthetic gene cluster from Streptomyces cinnamoneus cinnamoneus DSM 40005.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (7), 4316-4321 (2003).</li><li>Begley, M., Cotter, P. D., Hill, C., Ross, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+two-peptide+lantibiotic,+lichenicidin,+following+rational+genome+mining+for+LanM+proteins.">Identification of a novel two-peptide lantibiotic, lichenicidin, following rational genome mining for LanM proteins.</a> Appl Environ Microbiol. 75 (17), 5451-5460 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Das Overlay-Assay ist ein schneller Weg, um den Bereich der Tätigkeit für Bakteriozin Hersteller zu ermitteln und Wettbewerbs Wechselwirkungen, die unter Pneumokokken-Stämme auftreten können, zu demonstrieren. Die Overlay-Assay lässt sich an für das Screening mehrere Stämme für Bakteriozin Produktion auf einer einzigen Platte zu verwenden. Wir haben erfolgreich große Stammsammlungen mit diesem Test mit Hilfe eines 48-Pin-Replikator an SBA-Platten von einer Hälfte einer 96-Well-Platte zu impfen gescreent. Nach ...

Streptococcus pneumoniae, eine gemeinsame Kolonisator des polymikrobiellen Gemeinschaft des Nasenrachenraums, ist in der Lage, mit anderen Pneumokokken und eng verwandten Arten durch die Produktion von bakteriell produzierten antimikrobiellen Peptide (Bacteriocine) konkurrieren. Jeder vollständig sequenzierten Pneumokokken-Stamm bis heute untersucht enthält eine Version des b acteriocin- l ike p eptide Ort, BLP. Bacteriocin-Produktion durch Pneumokokken nachgewiesen wurde im Ergebnis der in vitro und in vivo Konkurrenz 1-4 wichtig. Wettbewerbsdynamik werden durch die Expression von verschiedenen Bakteriozine zusammen mit verwandten Proteinen Immunität in Reaktion auf eine spezifische Peptid-Pheromon beeinflusst. Induktion der BLP-Locus durch ein Quorum Sensing System, bei dem ein Peptid-Pheromon, BLPC, bindet an das Sensorkinase, BlpH gesteuert und löst eine Signalkaskade, was zu derTranskription des BLP Locus 5,6. Es gibt vier allelische Variationen BLPC dass jede Bindung an seinen zugehörigen BlpH 6. Für die Zelle, die Auswirkungen seiner eigenen Bakteriocin überleben, werden die Gene, die Proteine ​​kodieren verwandten Immunität auf der gleichen Operon wie jede der Bakteriocin-Genen transkribiert. Tötung tritt auf, wenn ein Teilnehmer-Stamm ist nicht in der Lage, die BLP-Locus in Antwort auf exogene Pheromon hochregulieren oder, wenn der Stamm fehlt die spezifische Immunität Gen zum Schutz benötigt. Der Transporter-Komplex, BlpAB ist für die Sekretion und Prozessierung des Peptids Pheromon und Bakteriocin-Peptide 2,4 erforderlich. Kürzlich wurde gezeigt, dass ein signifikanter Anteil der Pneumokokken-Stämme &quot;Betrüger&quot; bedeutet, dass sie eine Mutation im konservierten blpA Gen, das sie nicht in der Lage Pheromone und Bakteriozine 1,2 sezer macht haben. Diese Stämme sind in der Lage, auf exogene BLPC 2 durch Wiehern sezerniert reagierenBohren Stämme so dass für die Herstellung von Proteinen Immunität. Obwohl rohe Zubereitungen von Bakteriozine aus Überständen aus Produktionsstämme mit biochemischen Methoden vor, um Reinheit zu erzielen, hergestellt werden, ist dieser Ansatz nicht nützlich für das Screening von großen Sammlungen von Isolaten und wenn der Pegel des Bakteriocin Expression niedrig in Brühe gewachsenen Kulturen 2,7 9. Die Overlay-Assay ist als schnelle Möglichkeit, die Wettbewerbsdynamik zwischen den Stämmen, die in vitro zu untersuchen existieren können verwendet. Um dies zu tun, ist eine Pneumokokken-Stamm vorgeimpft auf einer Agar-Platte und erlaubt, zu wachsen, um lokale Bakterienkonzentrationen ausreichend für die Induktion des BLP Ort zu erreichen. Ein zweiter Stamm wird dann in einem geschmolzenen weichen Agar-Lösung, die dann über die vorgeimpft Stamm zur Empfindlichkeitstest wird angewendet, inokuliert. Um die Aktivität der BLP-Locus (unabhängig von der Inhibitoraktivität) zu bewerten, können Stämme mit einer Reihe von th lagert werdenree zuvor beschriebenen BLPC Reporter-Stämme. Diese Stämme wurden konstruiert, um eine von drei verschiedenen blpH Allele, die zu den drei häufigsten BLPC Pheromone vom Pneumokokken sezerniert antworten enthalten. Die Reporterstämme haben einen integrierten lacZ-Gen, das unter der Kontrolle eines BlpH abhängigen Promotor ist und tragen eine Deletion im Gen, das BLPC Selbststimulation 10,11 verhindert.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="753">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:71px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:351px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood</td>
			<td style="width:71px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">B21261X&#160;</td>
			<td>For growth from freezer cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:212px;">Catalase</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C100-500mg</td>
			<td>4,741 Units per plate</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">Todd Hewitt Broth + Yeast Extract (THY)</td>
			<td style="width:71px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">DF0492-17-6&#160;</td>
			<td>30 g of THB, 5 g yeast extract, 1 L ddH20 autoclave</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">Trypticase Soy Broth + Agar plates (TSA)</td>
			<td style="width:71px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">B11768&#160;</td>
			<td>30 g of TS, 15 g agar, 1 L ddH20 autoclave</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">5-Bromo-4-chloro-3-indolyl &#946;-D-galactopyranoside (X-gal)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">B4252-50MG</td>
			<td>Dissolve in dimethylformamide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:212px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:71px;">Fisher</td>
			<td>FB0875712</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:212px;">Spectrophometer</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Measures the OD620 of cultures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:212px;">37 &#176;C water bath</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:212px;">37 &#176;C incubator with 5% CO2</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:212px;">15 ml conical tube</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the overlay assay to qualitatively measure bacterial production of and sensitivity to pneumococcal bacteriocins

Streptococcus pneumoniae colonizes the highly diverse polymicrobial community of the nasopharynx where it must compete with resident organisms. We have shown that bacterially produced antimicrobial peptides (bacteriocins) dictate the outcome of these competitive interactions. All fully-sequenced pneumococcal strains harbor a bacteriocin-like peptide (blp) locus. The blp locus encodes for a range of diverse bacteriocins and all of the highly conserved components needed for their regulation, processing, and secretion. The diversity of the bacteriocins found in the bacteriocin immunity region (BIR) of the locus is a major contributor of pneumococcal competition. Along with the bacteriocins, immunity genes are found in the BIR and are needed to protect the producer cell from the effects of its own bacteriocin. The overlay assay is a quick method for examining a large number of strains for competitive interactions mediated by bacteriocins. The overlay assay also allows for the characterization of bacteriocin-specific immunity, and detection of secreted quorum sensing peptides. The assay is performed by pre-inoculating an agar plate with a strain to be tested for bacteriocin production followed by application of a soft agar overlay containing a strain to be tested for bacteriocin sensitivity. A zone of clearance surrounding the stab indicates that the overlay strain is sensitive to the bacteriocins produced by the pre-inoculated strain. If no zone of clearance is observed, either the overlay strain is immune to the bacteriocins being produced or the pre-inoculated strain does not produce bacteriocins. To determine if the blp locus is functional in a given strain, the overlay assay can be adapted to evaluate for peptide pheromone secretion by the pre-inoculated strain. In this case, a series of four lacZ-reporter strains with different pheromone specificity are used in the overlay.

Es gibt zwei mögliche Ergebnisse in der Overlay-Assay. Es sollte möglich sein, das Wachstum des Stammes erstochen nach Inkubation über Nacht zu sehen. In 1A ist die Overlay-Stamm empfindlich für die Bakteriocine produziert. Ein Freiraum visualisiert die Belastung erstochen Umgebung werden. Zusätzlich ist Verwirbelung der gestochen Belastung in den Überlagerungsmischung möglich ist und in der Figur 1A zu sehen ist. In 1B ist die Overlay-Stamm immun gegen die Bakte...

Watch this Scientific Journal Video about Using the Overlay Assay to Qualitatively Measure Bacterial Production of and Sensitivity to Pneumococcal Bacteriocins at JoVE.com

Using the Overlay Assay to Qualitatively Measure Bacterial Production of and Sensitivity to Pneumococcal Bacteriocins

Competition in Streptococcus pneumoniae is mediated by bacteriocins, small antimicrobial peptides with inhibitory activity towards pneumococcus and other related species.&#160; Here we describe an optimized bacterial overlay assay that allows for the characterization of bacteriocin activity and inhibitory spectrum, bacteriocin-specific immunity, and detection of secreted quorum sensing peptides.

Verwendung des Overlay-Assay zur qualitativen Messung bakterielle Produktion und die Sensibilität für Pneumokokken Bacteriocine

Streptococcus pneumoniae colonizes the highly diverse polymicrobial community of the nasopharynx where it must compete with resident organisms.  We have ...

using-overlay-assay-to-qualitatively-measure-bacterial-production

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

13.4K Aufrufe.  University of Michigan. Competition in Streptococcus pneumoniae is mediated by bacteriocins, small antimicrobial peptides with inhibitory activity towards pneumococcus and other related species.  Here we describe an optimized bacterial overlay assay that allows for the characterization of bacteriocin activity and inhibitory spectrum, bacteriocin-specific immunity, and detection of secreted quorum sensing peptides. 