Die Autoren danken Ryan Chaplin und Dr. Gregg Rentfrow von der University of Kentucky und Fleisch Lab Abteilung Tier und Lebensmittelwissenschaften für die Bereitstellung von Möglichkeiten zur experimentellen hier verwendeten Gewebe zu sammeln.

Verfahren in dieser Studie verwendeten nicht bedürfen der Zustimmung der Universität von Kentucky Animal Care und Use Committee, weil keine lebenden Tiere verwendet wurden. Vor der Entnahme einer Probe hier verwendet wird, wurden alle Tiere mit einem Bolzenschuss betäubt und ausgeblutet. Dies wurde auf einer staatlich untersuchten Schlachthaus-Anlage an der Universität von Kentucky durchgeführt. Ein offizieller Vertreter der USDA Nahrungsmittelsicherheit und Kontrolle Service beobachtet alle Aktivitäten, die mit dem lebenden Tier und die Handhabung des Schlachtkörpers behandelt. 1. Vorbereitung der Besetzung <ol><li> Um die Menge der Zeit zwischen Sammlungen von Gewebeproben zu Beginn eines Experiments, einzurichten Geräte zu minimieren und vor vorzubereiten Puffer zu sammeln experimentellen Gewebe (oder, wenn zusätzliches Personal zur Verfügung stehen, können diese Aufgaben gleichzeitig auftreten). HINWEIS: Dieser bietet nicht nur die größte Menge an Zeit, die das Gewebe lebensfähig bleibt, Experimente durchzuführen, aber einigeExperimente können für lange Zeitperioden ausgeführt werden (oder es besteht der Wunsch, mehrere Experimente in einem Tag vollständig), daher ist es gewöhnlich wünschenswert, so früh wie möglich zu beginnen. </li><li> Schalten Sie den Computer verbunden, Datenübernahmen Ausrüstung, Wasser-Bad (für Puffer (s)) und Myographions Einheit (en). Legen Sie die Kalibrierungsgeräte auf der Myographions Einheit (en), und schalten Sie Myographions Wärme (voreingestellt auf 37,5 ° C) und lassen Einheiten und Kalibrierungsausrüstung erwärmen Temperaturen eingestellt. <ol><li> Öffnen Sie ein zuvor erstelltes Diagramm Software-Einstellungen-Datei auf dem Computer ein und starten einen Lauf (aber nicht der Datenerfassung). </li></ol></li><li> Aufwärmen der Ausrüstung für 10 min. <ol><li> Datenerfassung beginnen. </li><li> Null alle Kanäle. </li><li> Zu überprüfen, und führen die Kalibrierung (falls erforderlich) auf jedem Kanal (4 Kanäle pro multimyograph), um die von der jeweiligen Kraftaufnehmer mit diesem Kanal zu einem Gewicht von einem zertifizierten geliefert 2-g-Kraft verbunden gelieferte elektrische Signal zu standardisieren. </li><li> Nach Kalibrierung und ein Einheiten Umwandlung abgeschlossen sind, speichern Sie alle nachfolgenden Daten als Gramm. Entsprechend ändern, basierend auf Wünsche jedes einzelnen Labor; Ausrüstung und Software ermöglichen die Verwendung von anderen Einheiten, wie Millinewton und Volt. </li></ol></li><li> Stellen Sie sicher, dass die Gasleitungen sind frei von Blockaden und schalten Sie Gasversorgung (95% O 2/5% CO 2) bis (e) Einheiten Myographions. Gas kontinuierlich alle Puffer (in den Kammern Myographions) während des gesamten Verfahrens. </li><li> Füllen Sie alle Myographions Kammern mit 70% Ethanol und genießen für 10 min, Ethanol entfernen, und wiederholen Sie für eine zweite 10 Minuten einweichen. <ol><li> Nach Entfernen des Ethanols gründlich dreimal mit entionisiertem Wasser, gefolgt von drei Spülungen mit vorbereiteten Puffer (siehe Abschnitt 2 zur Herstellung Puffer), so dass die dritte Zugabe von Puffer in den Kammern. HINWEIS: An dieser Stelle kann das Gerät im Leerlauf in diesem Zustand, bis Puffer und Gewebe hergestellt und Personal steht bereit, um mit den experimen gehent. </li></ol></li></ol> 2. Herstellung von Puffern <ol><li> Eine 1 l Krebs-Henseleit-Pufferlösung zur Verwendung bei Transport und Verarbeitung von Gewebeproben, um Endkonzentrationen von 11,1 mM D-Glucose zu erreichen; 1,2 mM MgSO4; 1,2 mM KH 2 PO 4; 4,7 mM KCl; 118.1 mM NaCl; 3,4 mM CaCl 2; 24,9 mM NaHCO 3. <ol><li> Mischen 9,6 g Krebs Salze in etwa 900 ml VE-Wasser auf einer Rührplatte. </li><li> Mischen in 0.373 g Calciumchlorid-Dihydrat, gefolgt von 2,1 g Natriumhydrogencarbonat pro Liter Puffer gewünscht. </li><li> Gaspufferlösung für 20 Minuten mit 95% O 2/5% CO 2. </li><li> Nach Begasung, pH-Wert auf 7,05 (Filtration von Puffer erhöht pH-Wert; endgültige Ziel pH-Wert sollte 7,4 sein), und stellen Sie die Lautstärke auf 1 L </li><li> Filter sterilisieren Puffer in einem sauberen autoklaviert 1 L Flasche und Medienspeicherpuffer bei 4 ° C bis zur Verwendung. </li></ol></li><li> Bereiten separaten Krebs-HEnseleit Pufferlösung zur Verwendung in Myographions Experimente wie in Schritt 2.1 zum Transport Krebs-Henseleit-Puffer mit zusätzlichen Verbindungen, die an die Kontraktilität Experimente betreffen beschrieben. HINWEIS: In der Regel 2 L wird für die in diesem Artikel beschriebenen Versuche genügen, aber dieses Volumen muss möglicherweise erhöht oder bezogen auf die Länge des Experiments reduziert werden, die Anzahl der Myographions Kammern und die Anzahl Puffer Ersatz (bezogen auf die Behandlung Ergänzungen). <ol><li> Vor der Vergasung (Schritt 2.1.3), fügen Sie 9,1 mg (pro l Puffer in Vorbereitung) von Desipramin-HCl zu puffern. </li><li> Bereiten Sie eine 1,0 uM Lösung von Propranolol-HCl und 1 ml (pro Liter Puffer in Vorbereitung) dieser Lösung in der Krebs-Henseleit-Pufferlösung. Machen Sie diesen Puffer auf dem Tag der Nutzung bringen und Myographions Betriebstemperaturen (eine Temperatur, die mit 37,5 ° C Temperatur im Myographions ergibt). HINWEIS: Die Desipramin wird hinzugefügt, um die Wiederaufnahme-Mechanismen biogenes Amin hemmenund lassen Clearing von experimentellen Zugänge aus dem Puffer Baden der Blutgefäße schneller auftreten. Die Zugabe von Propranolol verhindert die unspezifische Bindung von Behandlungs Verbindungen an Rezeptoren-adrenergen β. </li></ol></li></ol> 3. Sammlung und Herstellung von Gefäßsystem <ol><li> So bald wie möglich, entfernen Sie den Magen-Darm-Trakt von der Karkasse. Sobald das Tier nicht mehr weist jede unfreiwillige Reflex, entfernen Sie den Kopf und verstecken und heben Sie dann den Korpus vertikal. Entfernung des Magen-Darm-Eingeweide (Speiseröhre bis zum Anus) von den Schlachtkörper von zugelassenen Schlachthof Personal (&lt;20 min von der Zeit des Betäubung) durchgeführt werden. HINWEIS: Wie schnell, wird in der Regel durch die Lage / Einrichtung, in der Darmtrakt ist gegen und Standardarbeitsanweisungen oder Bund beauftragt Verfahren, gefolgt von den Anlagenpersonal gesammelt beschränkt. <ol><li> In den meisten Einrichtungen, führen Manipulationen des Magen-Darm-Traktan einem separaten Ort von der Verarbeitung des Tierkörpers, die bestimmt ist, die Nahrungsmittelversorgung ein. Verwenden Sie eine günstige Lage in der Nähe, wo der Magen-Darm-Trakt aufgenommen und kann zur Prüfung verteilt werden. </li></ol></li><li> Sobald der Magen-Darm-Trakt ist ausgebreitet, identifizieren den Dünndarm, die ileozökalen fach Anschluss des Dünndarms zu Blinddarm und die Ileum-Flansch, der sich proximal der Bauhin fache (Abbildung 1A). <ol><li> Mit einem Skalpell oder Messer, sehr leicht einen Einschnitt in der mesenterialen Membran in der Mitte des Ileum-Flansch. Mit beiden Zeigefinger, unverblümt sezieren entfernt die Freilegung der mesenterialen Gefäßsystem (Abbildung 1B) Fett und Bindegewebe. </li></ol></li><li> Von diesem Flansch oder Ausbuchtung in der Darm Gekröse, sezieren mehrere Zweige (~ 2 cm in der Länge) der exponierten A. und V. mesenterica Bündel, die diesen Teil des Ileum (1C) zu unterstützen. <ol><li> Wenn usingen Pinzette, um Gewebe zu erfassen, achten Sie darauf, nicht direkt erfassen oder ziehen auf die Blutgefäße überhaupt beim Entfernen sie wie jede Art von Strecken kann beschädigt werden und negativ beeinflussen Gewebe Leistungs 14. Blutgefäß Entfernung geschieht am besten, indem über jedem Ende des Abschnitts zu entfernen und dann Schneiden neben oder parallel zu der jetzt isoliert Abschnitt. Für eine einfache, entfernen Sie einige der umliegenden Gewebe zusammen mit Gefäßen etwas Gewebe mit einer Pinzette fassen zu schaffen. </li><li> Mit einer Pinzette, tauchen Gewebeprobe in einem Röhrchen mit eiskaltem Krebs-Henseleit-Puffer und Lagerung auf Eis, bis die Verarbeitung kann im Labor erfolgen. </li></ol></li><li> Platzieren Gewebeprobe auf einer Schneidfläche oder in eine Petrischale und teilweise in eiskaltem Krebs-Henseleit einzutauchen. <ol><li> Mit # 5 Juweliere Zangen, Noyes Iris Schere, und Lupenleuchte oder Binokular (2,5 bis 5,0-fache Vergrößerung ist ausreichend), sorgfältig sezieren entfernt die umgebende Fett und connective Gewebe und trennen die Arterie und Vene. Identifizieren des Gefäßöffnung an einem Ende des Abschnitts und sorgfältig erfassen die Blende um den Behälter mit der Zange. </li><li> Machen Sie einen Schnitt mit der Schere auf das Schiff parallel, indem die Spitze der Schere unter der Faszie angehoben. Nach dem anfänglichen Schnitt, das Fett und Bindegewebe kann weiterhin aus dem Gefäß durch eine Senkung auf beiden Seiten mit einer Schere getrennt werden. Sicherzustellen, dass die Behälter auch so rein wie möglich bei gleichzeitiger Minimierung der Menge an Zeit, die Behälter zu verbringen auf der Bank. </li><li> Blutgefäße zurück, um Rohre von frischen Krebs-Henseleit-Puffer und bei 4 ° C (Proben können für bis zu 24 Stunden nach der Sammlung gespeichert bleiben und immer noch gültig Kontraktilität Daten zu erzeugen). </li><li> Mit einer Rasierklinge, um die Schichtbehälter in Myographions in die gewünschte Anzahl der 2-mm-Abschnitte verwendet werden (es ist hilfreich, um eine Gewebeschneidemaschine verwenden, um konsistente Querschnitte zu erhalten). </li><li> Untersuchen Sie jeden Abschnitt unter einem Präparations scope (12,5-fach Vergrößerung), um sicherzustellen, dass jeder Abschnitt hat keine Auffälligkeiten, Äste, Ventile, oder oberflächliche Schäden versehentlich bei der Präparation und Reinigung getan. Ersetzen Sie die Gefäßabschnitt, wenn es irgendeine Anomalie, Zweig, Ventil oder oberflächliche Schäden. </li></ol></li><li> Shop akzeptabel geschnitten Gefäßabschnitte (in Krebs-Henseleit-Puffer eingetaucht) auf Eis oder bei 4 ° C bis bereit für die Montage in Myographions Kammern (meist &lt;30 min). </li><li> Montieren Sie vorsichtig das Schiff auf der Myographions, indem Sie die Stützen durch das Lumen und erhöhen die Spannung (unter Verwendung der auf der Mikropositionierer Myographions) vorsichtig, um die Gefäße über eine 2 bis 3 g Lesung nicht strecken. </li><li> Nachdem alle Kammern abgedeckt sind, saugen den Puffer aus allen Kammern und füllen mit 5,0 ml Puffer und starten Sie eine 15-min-Timer, um die Gleichgewichtsperiode und das Experiment zu beginnen. </li></ol> 4. Experiment <ol><li> Ins Gleichgewicht alle Gefäßabschnitte 1,5 h, um eine stabile res zu erreichenting Spannung von 1,0 g. <ol><li> Ersetzen Sie den Krebs-Henseleit Inkubationspuffer alle 15 min. </li><li> Während der Gleichgewichtseinstellung, ständig die Spannung auf die Blutgefäßabschnitte anpassen bis zu 2 g und lassen Sie sich zu entspannen auf ca. 0,80 g. Versuchen Sie nicht, damit Schiffe zu viel um sich zu entspannen (sie können die Halterungen rutschen). Versuchen Sie, eine stetige Ausgangsspannung, wenn das Schiff hält 1 g Spannung ohne Anpassung erfordern erreichen. </li></ol></li><li> Während der Gleichgewichtseinstellung, bereiten eine wässrige 1,32 M KCl-Lösung als Referenz verwendet werden. </li><li> Nach der Beendigung eines zufriedenstellenden Gleichgewichts, 500 ul des 1,32 M KCl-Lösung in einer 0,12 M Lösung in 5,5 ml Lösung Baden des Gefäßes führen. <ol><li> Nach der Zugabe der 1,32 M KCl, nicht die Spannung manuell einstellen als die maximale Reaktion, die auf dieser Addition wird verwendet, um die Gewebelebensfähigkeit zu bewerten und um eine A verwendet, um Behandlungsdaten normalisiert werden (zB Konzentration Antwortengonist). </li><li> Ersetzen Sie den Puffer in 15-Minuten-Intervallen, bis Spannung wurde auf die Baseline-Wert von 1,0 g zurück. </li></ol></li><li> Sobald Baseline erreicht wird, ändern Sie den Puffer und gleichzeitig beginnt eine 1 min-Timer. Tun Sie dies für alle Kammern gleichzeitig eine Staffelung der Startzeiten zu vermeiden. <ol><li> Mischen Sie den Standard aufgenommen werden und bereiten einen Kommentar für Kammer 1 während der 1 min Countdown. </li><li> Hinzufügen der Standards in 25 ul Aliquots jeder Kammer als Experiment Diktat (somit die Behandlung unter 0,5% des Gesamtvolumens). </li><li> Wenn der letzte Standard hinzugefügt wurde, starten Sie eine 9 min-Timer. </li><li> Am Ende der 9 min Inkubation Standard, entfernen Sie die Behandlung mit Puffer von den Kammern und 5,0 ml frischem Puffer, und starten Sie die 2,5 min-Timer. </li><li> Wiederholen Sie Schritt 4.4.4. </li><li> Am Ende des zweiten 2,5 min Spülen, Saugen, die Kammern und fügen Sie frischen Puffer, und starten Sie einen 1-min-Timer, um den Beginn der SECON CountdownD Standard hinaus. </li></ol></li><li> Wiederholen Sie diesen Zyklus für alle Standard-Ergänzungen des Tages. </li><li> Während der letzten Standardaddition und anschließende 9 min Inkubation bereiten die 1,32 M KCl Referenzverbindung für ein Ende der Laufreferenzdosis Zugabe von 500 ul. </li><li> Nach der 1 min Intervall nach der letzten Behandlung hinaus, fügen Sie die KCl und starten Sie eine 9 min-Timer. HINWEIS: Die KCl hinaus ist die Lebensfähigkeit des Gewebes auf den Abschluss des Experiments bestätigen, und ist hilfreich, wenn die Verwaltung eine Behandlung, die nur in vernachlässigbaren Reaktion führt. </li><li> Zum Abschluss des letzten 9 min Referenzverbindung Inkubation Vakuum oder entfernen Puffer aus allen Kammern. Fügen Sie keine frischen Puffer. Abschluss des Experiments. </li><li> Sparen Diagramm-Datei, entfernen Blutgefäßabschnitte und fachgerecht entsorgen, und folgen Sie den sauberen up-Protokoll (vom Hersteller zur Verfügung gestellt und können spezifisch sein Labor) für Myographions Ausrüstung. </li></ol>

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Die Erwähnung von Handelsnamen, proprietäres Produkt, oder solche Ausrüstung stellt keine Garantie oder Gewährleistung durch die USDA und keine Zustimmung zum Ausschluss von anderen Produkten, die verfügbar sein können.

Die erste Herausforderung in der Entwicklung dieses Bioassay war die Einrichtung einer Sammelstelle für wiederholbare mesenterialen Gefäßsystem. Probenstelle Konsistenz ist wichtig, da einige der Funktionen des Dünndarms Änderung während des Fortschreitens des Jejunums durch die Ileum und folglich das Mesenterium variieren in einem ähnlichen Muster. Die Ileum-Zweige der A. und V. mesenterica waren die leicht durch anatomische Landmarken identifiziert. Durch Anordnen des Blinddarms und folgende ileocecalen fache s...

Veränderungen im Blutfluss zu einem Gewebe Bett kann einen großen Einfluss auf die Organfunktion. Eine primäre Funktion des Dünndarms ist Nährstoffabsorption. Arteriellen Blutfluss in den absorbierenden Oberfläche des Darms erforderlich für die Nährstoffaufnahme und Blutfluss erhöht, um in der Nährstoffabsorption Verdauungs bewegt sich entlang der Oberfläche 1 zu unterstützen. Eine Abnahme des Blutflusses kann eine Verringerung der Nährstoffabsorption aufgrund einer Abnahme in der transepithelialen Gradient 2 verursachen. Neben Nährstoffen kann die Dünndarm auch sekundäre Metaboliten, Medikamenten oder Toxinen, die sich auf lokale Durchblutung im Mesenterium ausüben ausgesetzt werden. In dem Fall des Wiederkäuers können Verbindungen aus einer Futter freigesetzt werden (beispielsweise Nährstoffe, wie Aminosäuren, oder Toxine, wie Mutterkornalkaloide) durch fermentative Prozesse der Vorderdarm. Wenn diese Verbindungen überleben den mikrobiellen Stoffwechsel der Pansenfermentation, sind sie nun für die Absorption verfügbaroder Interaktion während sie sich durch den Magen-Darm-Trakt des Tieres. Es gibt eine Reihe verschiedener Methoden zur Verfügung, um den Blutfluss in vivo zu messen (zum Beispiel Doppler-Ultraschall, Dauerblutflussmesser, radioaktiv markierte Mikrokügelchen und Indikator-Verdünnungsverfahren), die Bewertung der verschiedenen experimentellen Szenarien oder Behandlungen zu ermöglichen. Allerdings sind Angaben zu den mechanischen oder pharmakologischen Eigenschaften der glatten Gefäßmuskulatur zu erhalten, blieb Methoden beschränkt sich auf große Schiffe bis Mulvany und Halpern 3 einen Artikel veröffentlicht, beschreibt eine Technik, mit Draht befestigt Gefäßring Zubereitungen in einer Myographions. Seit der Entwicklung dieser Technik Modifikationen weiterhin den zugehörigen Myographions Systeme, die eine Vielzahl von verschiedenen Anwendungen für die Bewertung der röhrenförmigen Strukturen zulassen werden. Das System wurde angepasst, um feste Stäbe für die Montage größerer Schiffe 4, wo Perfusion nutzenTechniken sind nicht erwünscht. Wegen der Unterschiede in Gefäßen aus verschiedenen anatomischen Ursprung und Auszeichnungen in den gleichen Gefäßen aus verschiedenen Tierarten, Daten aus Tiergefäß und Typ kann nicht einfach über verschiedene Gefäße oder demselben Schiff in verschiedenen Tierarten 5 extrapoliert werden. Folglich müssen getrennte Biotests entwickelt und validiert diese Aspekte jederzeit geändert werden werden. Kürzlich haben mehrere Biotests mit diesen Technologien für den Einsatz in der Rinder Vena saphena und rechten Pansen Arterie und Vene 6,7 entwickelt lateral. Diese Bioassay wurde entwickelt, um speziell zu untersuchen, welche Auswirkungen die Mutterkornalkaloide haben am Gefäßsystem unterstützt den Dünndarm. Es wurde berichtet, dass 50-60% der zugeführten Alkaloide in abomasale Inhalte angezeigt werden, aber nur 5% sind im Kot 8 gewonnen. Strickland et al. 9 erklärte in einer Überprüfung der Mutterkornalkaloide, dass die verfügbaren Daten Suggest, dass der Dünndarm kann der wichtigste Standort für ergopeptine Absorption. Eckert et al. Prüft biopharmazeutisches 10 Aspekte der Mutterkornalkaloide und erklärte, dass, sobald sie die epitheliale Barriere zu überschreiten, Mutterkornalkaloide sind entweder durch Lymphsystem in die V. subclavia oder über mesenterica und in Portal Blut transportiert. Rhodes et al. 11 verzeichnete einen Rückgang des Blutflusses zum Zwölffingerdarm und Dickdarm in Ochsen Verzehr einer hohen endophyteninfizierten (hohe Ergotalkaloid) Ernährung. Mit der rechten Pansen Arterie und Vene-Bioassay, Foote et al. Gezeigt, dass 12 Mutterkornalkaloide sind vasoaktive in Pansengefäßsystem. Foote et al. 13 anschließend in vivo gezeigt, dass die ruminale Einwirkung Mutterkornalkaloide zu einer verringerten Pansen epithelialen Durchblutung. Diese Verringerung des Blutflusses zu der Absorptionsfläche der Pansen gleichzeitig eine Reduzierung der Nährstoff (flüchtige Fettsäure) Fluss. Angesichts der quantity der Mutterkorn-Alkaloide Weitergabe an den Dünndarm aus dem Vorderdarm; es wurde angenommen, daß eine ähnliche Wirkung auf Dünn Vaskulatur und Nährstoffabsorption auftreten würde. Dies erforderte die Entwicklung der Rinder proximalen Ileum A. und V. mesenterica Bioassay.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="611">
	<tbody>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:105px;">Name of the Material/Equipment</td>
			<td style="width:127px;">Company</td>
			<td style="width:120px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:259px;">Comment/Description (optional)</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:105px;">Multi Myograph</td>
			<td style="width:127px;">Danish Myo Technologies</td>
			<td style="width:120px;">610M</td>
			<td style="width:259px;">A myograph is critical to this bioassay, but there are other platforms available for use that will suffice.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:105px;">Powerlab 8/sp</td>
			<td style="width:127px;">ADIntruments</td>
			<td style="width:120px;">ML785</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:105px;">LabChart 7</td>
			<td style="width:127px;">ADInstruments</td>
			<td style="width:120px;">Version 7</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Force Calibration Kit</td>
			<td style="width:127px;">Danish Myo Technologies</td>
			<td style="width:120px;">100055</td>
			<td style="width:259px;">Specific to DMT myographs</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Bottle-top Filter</td>
			<td style="width:127px;">Nalgene</td>
			<td style="width:120px;">595-4520</td>
			<td style="width:259px;">0.22 um pore size; 45 mm neck size</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">#5 Jewler&#8217;s Forceps</td>
			<td style="width:127px;">Miltex</td>
			<td style="width:120px;">555008FT</td>
			<td style="width:259px;">Any brand of forceps can be used</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Noyes Iris Scissors</td>
			<td style="width:127px;">Miltex</td>
			<td style="width:120px;">18-1510</td>
			<td style="width:259px;">Any brand of scissors can be used</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Dissecting Scope</td>
			<td style="width:127px;">Zeiss</td>
			<td style="width:120px;">Stemi 2000-C</td>
			<td style="width:259px;">Any brand of dissecting light microscope will suffice</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:105px;">Adjustable Tissue Matrice</td>
			<td style="width:127px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:120px;">TM C12</td>
			<td style="width:259px;">This is not critical to the assay, but greatly reduces section to section variation in length and speeds up the slicing process greatly</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Krebs-Hensleit Buffer</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">K3753-10x1L</td>
			<td style="width:259px;">It is not necessary to buy Krebs, this can be made in house</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:105px;">Calcium chloride dehydrate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">C7902-500G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">S5761-500G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Desipramine-HCl</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">D3900-5G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:105px;">Propranolol-HCl</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">P0884-1G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:105px;">KCl</td>
			<td style="width:127px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">P9333-500G</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:105px;">95% O2/5% CO2</td>
			<td style="width:127px;">Scott Gross</td>
			<td style="width:120px;">UN3156</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolating and using sections of bovine mesenteric artery and vein as a bioassay to test for vasoactivity in the small intestine

Säugerverdauungssysteme ständig zu Verbindungen (erwünschte und unerwünschte), die eine Wirkung auf den Blutfluss zu und von dem System auswirken können. Veränderungen im Blutfluss in den Dünndarm kann Auswirkungen auf die absorptive Funktion des Organs führen. Besonderes Interesse an der Giftstoffe aus Futtermitteln durch fermentative und Verdauungsprozesse befreit hat bei Wiederkäuern als Bereich, in dem produktive Effizienz verbessert werden könnte entwickelt. Das Video zu diesem Artikel unter beschreibt, um Verbindungen für Vasoaktivität in isolierten Querschnitte von Rindern A. und V. mesenterica mit einem multimyograph entwickelte einen in vitro-Bioassay. Sobald die Blutgefäße angebracht sind und in der Myographions ins Gleichgewicht gebracht, kann der Bioassay selbst verwendet werden: als Screening-Tool, um die Kontraktionsreaktion oder Vasoaktivität von Verbindungen von Interesse zu bewerten; bestimmen das Vorhandensein von Rezeptortypen von pharmakologisch Targeting-Rezeptoren mit spezifischen Agonistens; Bestimmung der Funktion eines Rezeptors mit der Anwesenheit von einem oder mehreren Antagonisten; oder zu bestimmen, mögliche Wechselwirkungen von Verbindungen von Interesse mit Antagonisten. Durch all diese werden Daten in Echtzeit gesammelt werden, kann Gewebe von einem einzigen Tier gesammelt, um eine große Anzahl von verschiedenen experimentellen Behandlungen (ein Vorteil in vitro) ausgesetzt werden, und stellt Gefßsystem zu beiden Seiten des kapillaren Bett eine genaue bereitzustellen Bild dessen, was könnte in der zu-und abführenden Blutversorgung unterstützen den Dünndarm passiert werden.

Die zur Herstellung der enthaltenen Ergebnisse erzeugen Blutgefäße wurden aus 6 Holstein Ochsen (425 ± 8 kg) innerhalb von 3 Wochen-Intervall gesammelt. Ein Beispiel eines typischen mesenterica kontraktilen Reaktion auf KCl und Behandlung Zusätze Erhöhung der Konzentration ist in Abbildung 2 dargestellt. Die Größenordnung der Reaktionen einige mit der Größe des Behälters (mit der Größe des Spendertieres korreliert) zu variieren, kann aber auch durch unsachgemäße Behandlung beeinflusst werd...

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Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Der Dünndarm wird häufig Giftstoffe, die den Blutfluss zu beeinflussen, und kann sich negativ auf die Nährstoffabsorption ausgesetzt. Mit Hilfe eines multimyograph und A. und V. mesenterica isoliert, Verbindungen oder Giftstoffe von Interesse für Vasoaktivität abgeschirmt werden.

Isolierung und Verwendung von Rinder Abschnitte A. und V. mesenterica als Bioassay für Vasoaktivität im Dünndarm Testen

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

9.6K Aufrufe.  USDA-Agricultural Research Service.  Der Dünndarm wird häufig Giftstoffe, die den Blutfluss zu beeinflussen, und kann sich negativ auf die Nährstoffabsorption ausgesetzt. Mit Hilfe eines multimyograph und A. und V. mesenterica isoliert, Verbindungen oder Giftstoffe von Interesse für Vasoaktivität abgeschirmt werden. 

Serie: Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, the de novo mutation rate in humans is relatively high, so new mutations are generated at a high frequency in the population. However, de novo mutations have not been reported in most common diseases. Mutations in genes leading to severe diseases where there is a strong negative selection against the phenotype, such as lethality in embryonic stages or reduced reproductive fitness, will not be transmitted to multiple family members, and therefore will not be detected by linkage gene mapping or association studies. The observation of very high concordance in monozygotic twins and very low concordance in dizygotic twins also strongly supports the hypothesis that a significant fraction of cases may result from new mutations. Such is the case for diseases such as autism and schizophrenia. Second, despite reduced reproductive fitness1 and extremely variable environmental factors, the incidence of some diseases is maintained worldwide at a relatively high and constant rate. This is the case for autism and schizophrenia, with an incidence of approximately 1% worldwide. Mutational load can be thought of as a balance between selection for or against a deleterious mutation and its production by de novo mutation. Lower rates of reproduction constitute a negative selection factor that should reduce the number of mutant alleles in the population, ultimately leading to decreased disease prevalence. These selective pressures tend to be of different intensity in different environments. Nonetheless, these severe mental disorders have been maintained at a constant relatively high prevalence in the worldwide population across a wide range of cultures and countries despite a strong negative selection against them2. This is not what one would predict in diseases with reduced reproductive fitness, unless there was a high new mutation rate. Finally, the effects of paternal age: there is a significantly increased risk of the disease with increasing paternal age, which could result from the age related increase in paternal de novo mutations. This is the case for autism and schizophrenia3. The male-to-female ratio of mutation rate is estimated at about 4&#x2013;6:1, presumably due to a higher number of germ-cell divisions with age in males. Therefore, one would predict that de novo mutations would more frequently come from males, particularly older males4. A high rate of new mutations may in part explain why genetic studies have so far failed to identify many genes predisposing to complexes diseases genes, such as autism and schizophrenia, and why diseases have been identified for a mere 3% of genes in the human genome. Identification for de novo mutations as a cause of a disease requires a targeted molecular approach, which includes studying parents and affected subjects. The process for determining if the genetic basis of a disease may result in part from de novo mutations and the molecular approach to establish this link will be illustrated, using autism and schizophrenia as examples.

Molecular genetic strategy for finding de novo mutations causing common disorders such as autism and schizophrenia.

Eine Strategie, um de novo Mutationen in Common Störungen wie Autismus und Schizophrenie Identifizieren

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Forschung

Medizin

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

A. mesenterica Kontraktion und Entspannung Studies Verwendung automatisierter Draht Myographie

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model creating an artificial fistula between the common carotid artery (CCA) and the external jugular vein (EJV) has been widely described and proved technically feasible. This construct provokes a consistent cerebral venous hypertension (CVH), and therefore has helped studying the contribution of venous hypertension to formation, clinical symptoms, and prognosis of brain AVMs and dural AVFs. Equivalent mice models have been only scarcely described and have shown trouble with stenosis of the fistula. An established murine model would allow the study of not only pathophysiology but also potential genetic therapies for these cerebrovascular diseases.
We present a model of arteriovenous fistula that produces a durable intracranial venous hypertension in the mouse. Microsurgical anastomosis of the murine CCA and EJV can be difficult due to diminutive anatomy and frequently result in a non-patent fistula. In this step-by-step protocol we address all the important challenges encountered during this procedure. Avoiding excessive retraction of the vein during the exposure, using 11-0 sutures instead of 10-0, and making a carefully planned end-to-side anastomosis are some of the critical steps. Although this method requires advanced microsurgical skills and a longer learning curve that the equivalent in the rat, it can be consistently developed.
This novel model has been designed to integrate transgenic mouse techniques with a previously well-established experimental system that has proved useful to study brain AVMs and dural AVFs. By opening the possibility of using transgenic mice, a broader spectrum of valid models can be achieved and genetic treatments can also be tested. The experimental construct could also be further adapted to the study of other cerebrovascular diseases related with venous hypertension such as migraine, transient global amnesia, transient monocular blindness, etc.

We describe a method for creating a reliable model of cerebral venous hypertension in the adult mouse. This model has been widely described and tested in the rat. This new counterpart in the mice opens the possibility of using genetic modified animals and thereby broadens the applications of the model.

Erwachsene Maus venöse Bluthochdruckmodell: A. carotis communis, um äußere Jugularvene Anastomose.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

Beurteilung Myogenic Antwort und Vasoaktivität In Resistance Mesenterialarterien Mit Druck Myographie

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Catheterization of the Carotid Artery and Jugular Vein to Perform Hemodynamic Measures, Infusions and Blood Sampling in a Conscious Rat Model

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. Intra-tracheal inoculation of a known amount of bacteria has been successfully used to reproduce the pathogenesis of pneumonia which then develops into sepsis. Monitoring hemodynamic parameters and providing standard clinical treatment including infusion of antibiotics, fluids and drugs to maintain blood pressure is critical to simulate routine supportive care in this model but to do so requires both arterial and venous vascular access. The video details the surgical technique for implanting carotid artery and common jugular vein catheters in an anesthetized rat. Following a 72 hr recovery period, the animals will be re-anesthetized and connected to a tether and swivel setup attached to the rodent housing which connects the implanted catheters to the hemodynamic monitoring system. This setup allows free movement of the rat during the study while continuously monitoring pressures, infusing fluids and drugs (antibiotics, vasopressors) and performing blood sampling.

Vascular accesses to measure hemodynamics, provide fluids and perform blood sampling are important to any small animal model study. We present a technique for implanting catheters into the carotid artery and the common jugular vein in an anesthetized rat for connecting to a system to perform monitoring, infusions and sampling.

Katheterisierung der Halsschlagader und Vena jugularis zur hämodynamischen Maßnahmen im Conscious Rattenmodell durchführen, Infusionen und Blutentnahme

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

Halsschlagader Infusionen für pharmakokinetischen und pharmakodynamischen Analyse von Taxanen in Mäusen

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe the use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations of superior and uniform quality to that which can be achieved by hand. The device comprises a base that holds 4 stainless steel rods and a top, which acts a cutting guide. The rods are inserted into the lumen of the small intestine [divided into thirds] and the colon. The rods and samples are then placed over a piece of filter paper or card into the holding slots in the base of the device. The top of the device is then positioned and serves as a cutting guide. The two angled sections in the center of the top piece are used to guide a knife or scalpel and cut the intestines longitudinally on the top of the rods. Once the intestinal sections have been cut, the top is removed and the card,&#160;tissue and rods gently removed from the device and placed on the bench. The rods are then gently rolled sideways to flatten and stick the intestinal segments onto the underlying piece of filter paper or card. The final preparation can then be examined or fixed and stored for later analysis. The preparations are invaluable for the study of intestinal changes in normal or genetically modified mouse models. The preparations have been used for the study and quantification of the effects of inflammation (colitis), damage, pre-cancerous lesions (aberrant crypt foci (ACFs) and mucin depleted foci (MDFs)) and polyps or tumors.

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

Eine einfache Vorrichtung, um schnell vorbereiten Whole Mounts des Mausdarm

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie mit Draht Myographie

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, nutrient absorption and distribution, and post-prandial glucose excursions. Understanding the molecular mechanisms that regulate gut hormone secretion is fundamental for understanding and translating gut hormone physiology. Traditionally, the mechanisms underlying gut hormone secretion are either studied in vivo (in experimental animals or humans) or using gut hormone-secreting primary mucosal cell cultures or cell lines. Here, we introduce an isolated perfused rat small intestine as an alternative method for studying gut hormone secretion. The virtues of this model are that it relies on the intact gut, meaning that it recapitulates most of the physiologically important parameters responsible for the secretion in in vivo studies, including mucosal polarization, paracrine relationships and routes of perfusion/stimulus exposure. In addition, and unlike in vivo studies, the isolated perfused rat small intestine allows for almost complete experimental control and direct assessment of secretion. In contrast to in vitro studies, it is possible to study both the magnitude and the dynamics of secretion and to address important questions, such as what stimuli cause secretion of different gut hormones, from which side of the gut (luminal or vascular) is secretion stimulated, and to analyze in detail molecular sensors underlying the secretory response. In addition, the preparation is a powerful model for the study of intestinal absorption and details regarding the dynamics of intestinal absorption including the responsible transporters.

Here, we present a powerful and physiological model to study the molecular mechanisms underlying gut hormone secretion and intestinal absorption &#8212; the isolated perfused rat small intestine.

Mechanismen, die Hormonausschüttung der Darm mit der isolierten durchblutet Ratte Dünndarm

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a promising therapeutic target in many disorders, such as autoimmune diseases, atherosclerosis, and cancer. RNAi-mediated gene silencing is a valuable approach of choice to probe and manipulate macrophage function; however, the transfection of macrophages with siRNA is often considered to be technically challenging, and, at present, few methodologies dedicated to the siRNA transfer to macrophages are available. Here, we present a protocol of using polyethyleneimine-coated superparamagnetic iron oxide nanoparticles (PEI-SPIONs) as a vehicle for the targeted delivery of siRNA to macrophages. PEI-SPIONs are capable of binding and completely condensing siRNA when the Fe:siRNA weight ratio reaches 4 and above. In vitro, these nanoparticles can efficiently deliver siRNA into primary macrophages, as well as into the macrophage-like RAW 264.7 cell line, without compromising cell viability at the optimal dose for transfection, and, ultimately, they induce siRNA-mediated target gene silencing. Apart from being used for in vitro siRNA transfection, PEI-SPIONs are also a promising tool for delivering siRNA to macrophages in vivo. In view of its combined features of magnetic property and gene-silencing ability, systemically administered PEI-SPION/siRNA particles are expected not only to modulate macrophage function but also to enable macrophages to be imaged and tracked. In essence, PEI-SPIONs represent a simple, safe, and effective nonviral platform for siRNA delivery to macrophages both in vitro and in vivo.

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

We describe a method of using polyethyleneimine (PEI)-coated superparamagnetic iron oxide nanoparticles for transfecting macrophages with siRNA. These nanoparticles can efficiently deliver siRNA to macrophages in vitro and in vivo and silence target gene expression.

Polyethyleneimine beschichteten Eisenoxid-Nanopartikeln als Vehikel für die Lieferung von kleinen interferierende RNA an Makrophagen In Vitro und In Vivo

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a ...