Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die chirurgische Entfernung von murinen Hoden und Eierstöcken auf schnelle, sichere und effektive Weise zu demonstrieren. Die murine Orchiektomie wird durch einen ventralen Mittellinienschnitt in den Hodensack durchgeführt, bei dem die Hoden isoliert und entfernt werden, gefolgt von einem Verschluss des Hautschnitts. Die murine Ovariektomie wird durch einen dorsolateralen Schnitt in den Bauch durchgeführt, bei dem der Eierstock isoliert und entfernt wird, gefolgt von einem Verschluss des Hautschnitts, mit der Möglichkeit, dieses Verfahren auf der anderen Seite zu wiederholen, um eine bilaterale Ovariektomie durchzuführen.
Um mit der murinen Orchiektomie zu beginnen, beginnen Sie zunächst mit der Aufzeichnung des Gewichts einer männlichen Maus und bereiten Sie sich darauf vor, die entsprechenden Schmerzmittel und Anästhetika gemäß Ihren institutionellen Richtlinien zu verabreichen. Sobald die Maus unter Narkose steht, bedecken Sie die Augen mit einem befeuchtenden Augengel, um sie während des Eingriffs vor dem Austrocknen zu schützen. Bevor Sie fortfahren, stellen Sie sicher, dass sich die Maus auf einer geeigneten Anästhesieebene befindet, indem Sie einen Zehenkneiftest durchführen.
Als nächstes rasieren Sie die Leisten- und Hodensackbereiche der Maus. Tragen Sie mit einem Applikator mit Wattespitze eine dünne Schicht enthaarender Haarentfernungscreme auf die Operationsstelle und die umliegenden Bereiche auf. Nach 30 Sekunden entfernen Sie die Enthaarungscreme mit dem sauberen Mullschwamm.
Bringen Sie die Maus in einen Operationsbereich und stellen Sie sicher, dass eine Wärmequelle zur Verfügung steht. Verwenden Sie weiches Klebeband, um die Füße der Maus auf die OP-Matte zu kleben. Wenn die Hoden in den Bauch aufgestiegen sind, üben Sie sanften Druck auf den Bauch aus, um ihnen beim Abstieg zu helfen.
Schrubben Sie die Haut mit Betadin-Lösung, beginnend in der Mitte über der Operationsstelle und arbeiten Sie sich leicht nach außen zum Rand des rasierten Bereichs vor. Lassen Sie dem Betadine-Peeling ein Alkohol-Peeling folgen, das auf ähnliche Weise durchgeführt wird. Wiederholen Sie diesen Vorgang dreimal, um eine ordnungsgemäße Hautdesinfektion zu gewährleisten.
Decken Sie die Maus mit dem OP-Tuch ab. Fassen Sie die Haut an und machen Sie einen etwa 1 bis 1 1/2 Zentimeter langen Mittellinienschnitt. Fassen Sie den Schnittrand der Haut und trennen Sie die Haut mit einem stumpfen Instrument vom darunter liegenden Gewebe.
Nehmen Sie sich Zeit, um dies an den lateralen, oberen und unteren Rändern des Einschnitts zu tun. Als nächstes isolieren Sie einen Hoden, indem Sie den Hautschnitt so verschieben, dass er direkt darauf liegt. Greife mit einer Pinzette den dünnen, durchsichtigen Cremaster-Muskel, der den Hoden umgibt.
Die Identifizierung des richtigen Gewebes kann durch seine Transparenz und seine Fähigkeit, sich unabhängig von den darunter liegenden Geweben zu bewegen, bestätigt werden. Als nächstes schneiden Sie den Cremaster-Muskel ein, indem Sie einen Schnitt in die Spitze des Gewebes machen. Platzieren Sie eine Verriegelungsklemme am hinteren Rand des geschnittenen Cremaster-Muskels, um die Spannung auf dem Gewebe zu halten.
Greife den Hoden mit einer Pinzette und ziehe ihn aus seiner Cremaster-Hülle heraus. Sobald der Hoden heraus ist, rollen Sie das Gewebe seitlich und lokalisieren Sie den Cremaster-Einstichpunkt, der den Cremaster-Muskel mit dem Hoden und den Nebenhoden auf der hinteren Seite des Hodens verbindet. Klemme und reiße dieses Gewebe, um diese Verbindung zu durchtrennen.
Äußere das Leistenfettpolster, indem du es langsam herausziehst. Achten Sie dabei auf Anzeichen von Blutungen und achten Sie darauf, dass Sie dabei keines der Blutgefäße beschädigen. Verwenden Sie als Nächstes ein Paar verriegelnde Hämostaten, um den Samenstrang und die Blutgefäße zu klemmen.
Halten Sie eine leichte Spannung auf dem Hoden aufrecht und kauterisieren Sie den Samenstrang und die Blutgefäße distal der Hämosteklemme. Lassen Sie das Hämostat langsam los und stellen Sie sicher, dass der Gewebestumpf eine gute Blutstillung hat und nicht weiter blutet. Wenn Sie einen leichten Druck nach außen auf den Cremaster-Muskel ausüben, kann sich dieser Gewebestumpf in die Körperhöhle zurückziehen.
Bringe die beiden Seiten des Cremaster-Muskels zusammen. Platzieren Sie mit resorbierbaren 4-0- oder 5-0-Nähten eine Naht, um die beiden Enden des Cremaster-Muskels zu verbinden. Sobald die Naht fertig ist, schneiden Sie die Enden des Nahtmaterials auf eine Länge von 1/2 Zentimeter ab.
Wiederholen Sie diesen Vorgang für den anderen Hoden, indem Sie den Hautschnitt auf die andere Seite schieben, und befolgen Sie die gleichen Schritte, die zum Entfernen des ersten Hodens verwendet wurden. Sobald beide Hoden entfernt und beide Seiten des Cremasters vernäht sind, klappen Sie die Haut nach oben und bereiten Sie sich darauf vor, eine Wundklammer an der Stelle anzubringen. Achten Sie darauf, dass sich die Nahtenden nicht in der Wundklammer verfangen.
Die Maus ist nun bereit, mit der postoperativen Überwachung fortzufahren. Um sich auf die Maus-Ovariektomie vorzubereiten, wiegen Sie eine weibliche Maus und verabreichen Sie Schmerzmittel und Anästhesie gemäß Ihren institutionellen Richtlinien. Verabreichen Sie befeuchtendes Augengel und prüfen Sie, ob die Maus nicht auf das Einklemmen der Zehen reagiert.
Rasieren Sie die dorsolateralen Regionen des Rückens der Maus, um die Operationsstelle vorzubereiten. Tragen Sie mit einem Applikator mit Wattespitze eine Schicht enthaarende Haarentfernungscreme auf die rasierte Stelle auf. Nach 30 Sekunden die Creme mit einem sauberen Mullschwamm entfernen.
Legen Sie die Maus auf eine OP-Matte und stellen Sie sicher, dass eine Wärmequelle zur Verfügung steht. Schrubben Sie die Haut mit Betadin-Lösung, beginnen Sie in der Mitte und arbeiten Sie sich leicht nach außen zum Rand des rasierten Bereichs vor. Schrubben Sie anschließend die Haut mit einer 70%igen Alkohollösung, die auf ähnliche Weise aufgetragen wurde.
Wiederholen Sie diesen Vorgang insgesamt dreimal, um eine ordnungsgemäße Hautdesinfektion zu gewährleisten. Planen Sie den chirurgischen Schnitt wie im schriftlichen Protokoll beschrieben. Legen Sie ein OP-Tuch über die Operationsstelle der Maus.
Fassen Sie die Haut mit einer Pinzette an und schneiden Sie die Haut mit einem Ein-Zentimeter-Schnitt ein. Verwenden Sie ein Instrument mit stumpfer Spitze oder ein einfaches Paar Hämostate, um die Haut vom darunter liegenden Gewebe zu trennen. Nehmen Sie sich Zeit, um dies an den lateralen, oberen und unteren Rändern des Einschnitts zu tun.
Fassen Sie die Bauchdecke und schneiden Sie sie mit einem 1/2 Zentimeter langen Schnitt ein. Verwenden Sie eine Pinzette, um den Eierstock innerhalb des Einschnitts zu lokalisieren, und ziehen Sie, um ihn nach außen zu drücken. Sobald das Gewebe identifiziert wurde, verwenden Sie ein Paar Hämostaten, um das distale Gebärmutterhorn zu klemmen und zu zerquetschen.
Verwenden Sie ein zweites Paar Hämostate oder eine Pinzette, um direkt distal der ersten Klemme zu klemmen. Halten Sie den unteren Hämostat ruhig und ziehen Sie die obere Klemme nach oben und vom Körper weg, um das distale Gebärmutterhorn zu zerquetschen und zu reißen. Lassen Sie das Hämostat langsam los und achten Sie darauf, dass keine übermäßigen Blutungen aus der Operationsstelle kommen.
Bringen Sie die beiden Seiten der Bauchdecke zusammen und vernähen Sie den Schnitt mit einer einzigen Naht mit 4-0 resorbierbarem Nahtmaterial. Sobald die Naht befestigt ist, schneiden Sie die Enden des Nahtmaterials auf eine Länge von 1/2 Zentimeter ab. Bringen Sie die beiden Hautseiten wieder zusammen und bereiten Sie sich darauf vor, eine Wundklammer zu platzieren.
Während Sie die Haut umdrehen, legen Sie eine Wundklammer über die Einschnittsstelle. Die Maus ist nun bereit, mit der postoperativen Überwachung fortzufahren. Dokumentieren Sie das Datum und die Uhrzeit des Eingriffs sowie die Verabreichung von Analgetika gemäß Ihren institutionellen Richtlinien.
Sobald sich eine Maus einer chirurgischen Orchiektomie oder Ovariektomie unterzogen hat, setzen Sie sie in einen sauberen, beheizten Käfig. Sobald eine Maus wieder im Brustbein liegt, setzen Sie sie in einen sauberen Käfig und versorgen Sie sie mit feuchtem Futter und Wasser. Kontrollieren Sie während der Genesung häufig die Operationsstelle der Maus und achten Sie auf Anzeichen einer Infektion oder Blutung.
Um eine Beschädigung der Wundklammer zu vermeiden, entfernen Sie nach der Operation eine Woche lang alle Nagetier-Iglu-Habitate aus dem Käfig einer Ovariektomie-Maus. Entfernen Sie nach 14 Tagen die Wundklammern von der Haut der Maus. Das demonstrierte Protokoll beschreibt, wie eine Orchiektomie und Ovariektomie in einer Maus durchgeführt wird, um ein Modell mit Sexualhormonmangel zu erstellen.
Dabei werden die Hoden durch einen Mittellinienschnitt im Hodensack entfernt, gefolgt von der Exteriorisierung der Hoden und dem Durchtrennen des Samenstrangs in den Blutgefäßen, was zur Entfernung des Hodens, der Nebenhoden und der Leistenfettpolster führt. Die chirurgische Ovariektomie kann durch einen dorsolateralen Schnitt in den Rücken und eine Exteriorisierung des Eierstocks, des Eileiters und des distalen Gebärmutterhorns durchgeführt werden. Anschließend wird das distale Gebärmutterhorn durchtrennt, was zur Entfernung des Eierstocks und des Eileiters führt.
Eine sorgfältige Operationstechnik und die richtige postoperative Versorgung führen zu gut verheilten Operationsstellen. Diese chirurgischen Eingriffe können durch die Analyse des Hormonspiegels in Mäuseserumproben eine Woche nach der Orchiektomie weiter validiert werden. Die Ovariektomie kann durch die Beobachtung einer Uterusatrophie nach Entfernung der Eierstöcke bestätigt werden.
Dieses Protokoll ermöglicht die schnelle und effektive chirurgische Entfernung von Eierstöcken und Hoden von Mäusen, um ein Sexualhormon-armes Modell zu erstellen. Dies kann viele Anwendungen haben, um zu untersuchen, wie sich der Abbau dieser Hormone auf verschiedene Organe und physiologische Prozesse auswirkt.
