Die Autoren danken den Eltern und Jugendlichen, die an der CHAMACOS-Studie teilnahmen. Wir danken den CHAMACOS-Mitarbeitern, die an der Studie, insbesondere Katherine Kogut, MS, für die ganze Arbeit, die sie als Projektleiterin für diese Studie gemacht hat, danken. Die Autoren würden auch gerne das National Institute of Drug Abuse Grant 1R01DA035300 anerkennen.

Diese Studie wurde von der Institutional Review Board von der University of California, Berkeley und der University of California, San Francisco genehmigt. Die Teilnehmer sollten im Labor zwischen 4: 30-5: 00 Uhr ankommen. 1. Mund ausspülen <ol><li> Bitten Sie den Teilnehmer, in die Toilette zu gehen und spülen Sie den Mund nur mit Wasser aus. Haben Sie den Teilnehmer schwelgen mit kaltem Wasser für 5-10 s und spucken in die Spüle. Tu das nur einmal. </li><li> Sagen Sie zum Teilnehmer, &quot;das ist, um sicherzustellen, dass es kein Essen oder Krümel in den Zähnen für Speichel Sammlung.&quot; </li></ol> 2. Ruhezeitraum <ol><li> Usher Teilnehmer in einem einsamen Raum und lassen Sie sie für mindestens 10 min sitzen. Lassen Sie den Teilnehmer nicht-invasive oder nicht-provozierende Fragebögen wie ein Kontakt-Informationsblatt und täglich lebende Fragebögen, sowie beobachten Sie eine 3 min friedliche Video von Meer Leben. </li></ol> 3. Speichelsammlung Nr. 1 (S.Re-stress) <ol><li> Legen Sie eine Linie, um 1 ml Speichel auf einem 2 ml Kryovial anzuzeigen, und sagen Sie dem Teilnehmer, das Kryovial zu dieser Linie zu füllen. Sammeln Sie den Speichel des Teilnehmers über passives Sulfol durch ein Zwei-Zoll-Stroh in das 2 ml Kryovial 36 und frieren Sie sofort ein (-80 ° C). </li><li> Sag dem Teilnehmer, &quot; ich werde Sie bitten, diese Durchstechflasche mit Speichel bis zu dieser Linie zu füllen. Der Weg, es zu tun, ist, dass der Speichel in den Mund sammeln und dann durch das Stroh in die Durchstechflasche laufen lassen wird Nicht spucken, denn das bekommt Blasen in deiner Probe - lass den Speichel durch das Stroh laufen, es wird dir helfen, wenn du nicht redest, während du das tust. Bitte versuch nicht, den Schleim zu husten, wir wollen nur einen normalen Speichel Halten Sie ein Auge auf Ihre Speichel-Durchstechflasche und wie voll ist es.Wenn es Blasen an der Spitze Ihres Speichels gibt, sollten sie über die Linie gehen, also gibt es nur flüssigen Speichel bis an die Linie.Sagen Sie mir, wenn es füllt sich Auf die LinieRe einige Bilder von Essen an der Wand gepostet (PUNKT OUT BILDER), da das Denken von Lieblingsessen macht Völker Mund Wasser. &quot; </li><li> Bieten Sie Wasser an, nachdem der Teilnehmer die Speichelprobe abgeschlossen hat. Erlauben Sie dem Teilnehmer nicht, das Wasser zu halten. Nimm es zurück, wenn er / sie fertig ist. </li></ol> 4. Vorbereitungszeitraum <ol><li> Sagen Sie zum Teilnehmer: &quot;In ein paar Minuten, möchten wir, dass Sie eine fünfminütige Rede darüber geben, wie Sie ein guter Freund sind. Es gibt einen Ausschuss von zwei ausgebildeten Rezensenten, die im Zimmer nebenan sind, die zuhören werden Zu deiner Rede, deine Aufgabe ist es, die Rezensenten zu glauben, dass du ein guter Freund bist. Sie wollen, dass du erklärst, was die Dinge dir einen guten Freund zu anderen machen. Du konkurrierst gegen viele andere Leute, wie gut du bist Ihre Rede und überzeugende Menschen, dass Sie ein guter Freund sind. Die Rezensenten sind Experten in der Beurteilung Gesichtsausdruck und Körper Bewegung, und sie werden zu comPare Ihre Rede an andere Menschen in der Studie. Sie können feststellen, dass die Gutachter Notizen machen. So können wir ihre Notizen zu einem späteren Zeitpunkt überprüfen. Sie werden auch aufgezeichnet, damit wir Ihre Leistung später bewerten können. Du hast noch 3 Minuten, um dich auf deine Rede vorzubereiten. Denken Sie daran, Ihre Rede sollte erklären, was es über Sie ist, die Sie einen guten Freund macht, und Sie sind gegen andere Leute konkurrieren, wie glaubwürdig Sie sind. Danach gehe ich Sie in den nächsten Raum, wo Sie sich den Rezensenten vorstellen und Ihre 5-minütige Rede geben werden. Es wird eine andere Aufgabe geben, die nach der Rede kommt, aber die Rezensenten werden Sie wissen lassen, was die Aufgabe nach der Rede ist. Haben Sie irgendwelche Fragen? Sie können Notizen schreiben, wenn Sie wollen, aber Sie werden nicht in der Lage sein, sie in den Raum mit Ihnen zu nehmen. Ok, bitte bitte vorbereiten. Ich werde in ein paar Minuten zurückkehren. &quot; </li><li> Handteilnehmer Papier, Stift und Zwischenablage, damit sie Notizen machen können. </li><li> Lassen Sie den Teilnehmer allein im Zimmer. </li><li> Warte 3 Minuten und komm dann wieder in den Raum. </li></ol> 5. TSST Einrichten <ol><li> Sag dem Teilnehmer, &quot;Okay, es ist Zeit, nebenan zu gehen und loszulegen.&quot; Wenn der Teilnehmer Notizen gemacht hat, nehmen sie sie vom Teilnehmer. Sprich: &quot; Ich kann das jetzt von dir nehmen. Danke.&quot; </li><li> Gehen Sie den Teilnehmer zum TSST-Raum und geben Sie an, dass sie sich den Konföderierten und der Videokamera stellen sollten. </li><li> Starten Sie die Videoaufnahme, bevor der Teilnehmer den Raum betritt. Aufnehmen der gesamten Sprach- und mathematischen Aufgaben (ca. 10 min gesamt). </li><li> Habe der Jugendinterviewer das Komitee vorgestellt. &quot;Das ist der Name des Teilnehmers. _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ <ol><li> Wenn der Teilnehmer nein antwortet, sagt der Jugendinterviewer: &quot;Okay, du kannst loslegen.&quot; </li><li> Wenn der Teilnehmer ja antwortet, hAve der Teilnehmer zeigt an, wen er / sie weiß, und haben die Jugend-Interviewer sagen: &quot;Okay, _ (verbündeter) __, bitte entschuldigen Sie sich selbst. Die Richter müssen Menschen sein, die Sie nicht kennen. &quot; </li></ol></li></ol> 6. TSST Sprachaufgabe <ol><li> Habe Konföderierte sagen: &quot; Bitte sag uns, warum du ein guter Freund bist . </li><li> Stellen Sie den Timer für 5 min ein. Starten Sie den Timer. </li><li> Nach 30 s der Stille, verwenden Sie eine der folgenden Aufforderungen, um den Teilnehmer zu sprechen. Verwenden Sie Aufforderungen, um jedes Mal, wenn es eine 30 s Pause gibt. <ol><li> Sag &quot;Du hast noch Zeit, bitte weiter.&quot; </li><li> Sag &quot;Warum sonst bist du ein guter Freund?&quot; </li><li> Sagen Sie &quot;Bitte geben Sie ein Beispiel, wann Sie ein guter Freund waren.&quot; </li><li> Sag &quot;Sei so kreativ wie du willst. Warum sonst bist du ein guter Freund?&quot; </li><li> Nachdem alle oben aufgeführten Aufforderungen verwendet wurden,Nachher mit &quot;Du hast noch Zeit, bitte weiter.&quot; </li></ol></li><li> Nach 5 min, sagte Konföderation 1: &quot;Bitte hör auf, deine Zeit ist auf.&quot; (Weiter zur mathematischen Aufgabe). </li></ol> 7. TSST Mathe Aufgabe <ol><li> Habe Konföderierte 1: &quot;Wir werden dich jetzt bitten, laut zu reden, um 423 zurückzukehren und um 7 Uhr zurückzudrehen, und zähle rückwärts um 7&#39;s laut, bis wir dir sagen, dass du aufhörst. Wenn du einen Fehler machst, dann sind wir Wir werden euch so schnell und genau wie möglich anfangen, jetzt wollen wir, dass du anfängst, rückwärts zu zählen - bei 423 zu starten und dich zu subtrahieren. 7. Weiter, indem du 7&#39;s laut lassst, bis wir dir sagen, dass du aufhören sollst. &quot; </li><li> Stellen Sie den Timer für 5 min ein. Starten Sie den Timer. </li><li> Wenn der Teilnehmer verwirrt aussieht, dann haben Konföderierte 1: &quot;Möchtest du mich das wiederholen?&quot; </li><li> Wenn der Teilnehmer einen Fehler macht, haben Konföderierte 1, &quot;das&quot;S falsch Bitte wieder anfangen 423 minus 7. &quot; </li><li> Wenn der Teilnehmer nicht anfängt, laut nach 30 s laut zu zählen, gehe zum nächsten einfacheren mathematischen Problem, mit den gleichen Anweisungen wie oben mit den gleichen Aufforderungen. </li><li> Verwenden Sie die folgenden, da die einfacheren mathematischen Probleme (in dieser Reihenfolge): 423 - 5 = &amp; beta; 95 - 5 = &amp; beta; 66 - 3 =? 6 + 3 =? </li><li> Wenn der Teilnehmer nach jeder korrekten Antwort auf die Bestätigung warten bleibt, dann habe der Konföderierte 1 gesagt, &quot;weiterzählen um 7 zurück. Wir korrigieren Sie nur, wenn Sie einen Fehler machen - sonst geht es weiter. &quot; </li><li> Nach 5 min, habe Konföderation 1 sagen, &quot;Zeit ist auf. Bitte geh bitte nebenan, um deine nächste Speichelprobe zu geben.&quot; </li><li> Escort Teilnehmer zurück zu einsamen Raum. </li></ol> 8. Protokoll stoppen <ol><li> Ermächtigen Sie beide Konföderierten, das Protokoll frühzeitig zu stoppen. Beide Verbündeten sind nicht verpflichtet, sich gegenseitig zu konsultieren, bevor sie dies tun. </li><li> ObTeilnehmer schreit oder erscheint teary-eyed, wird offensichtlich wütend oder aggressiv, oder sonst zeigt sich Not oder wenn der Teilnehmer beginnt, in einer Weise, die aggressiv oder ungerade erscheint, stoppen Protokoll sofort, aber so normal wie möglich. </li><li> Sprich: &quot;Die Zeit ist auf, bitte geh nebenan, um deine nächste Speichelprobe zu geben .&quot; </li><li> Direkter Teilnehmer zum nächsten Raum. </li></ol> 9. Speichelprobe Nr. 2 (15 min Post-Stressor-Beginn) <ol><li> Wenn die Jugend wieder in den nächsten Raum eintritt, stellen Sie den Timer für 15 Minuten ein. </li><li> Sag dem Teilnehmer, &quot;das ist der härteste Teil deines Besuches, danke dafür, und wir werden in einer Sekunde darüber reden. Es ist Zeit, einen anderen Speichel zu sammeln.&quot; </li><li> Wenn der Teilnehmer TSST erwähnt, sagen Sie zu dem Teilnehmer: &quot;Wir können in einer Minute darüber reden, aber bitte machen Sie die Speichelprobe zuerst. </li><li> Legen Sie eine Linie, um 1 ml Speichel auf einem 2 ml Kryovial zu zeigen, und sagen Sie ParAnfangen, die Kryoviale zu dieser Linie zu füllen. Sammeln Sie den Speichel des Teilnehmers über passives Sulfol durch ein Zwei-Zoll-Stroh in das 2 ml Kryovial 36 und frieren Sie sofort ein (-80 ° C). </li><li> Bieten Sie Wasser zu trinken, nachdem der Teilnehmer die Speichelprobe abgeschlossen hat. Erlauben Sie dem Teilnehmer nicht, das Wasser zu halten. Nimm es zurück, wenn er / sie fertig ist. </li></ol> 10. Debrief <ol><li> Sag dem Teilnehmer, &quot;Okay, lasst uns über die Rede und Mathematik-Aktivitäten reden, vielleicht hast du das schon erraten, aber der ganze Zweck dieser Aktivitäten war es, Stress zu schaffen. Vielleicht hast du bemerkt, dass die&quot; Rezensenten &quot;nicht genau das freundlichste waren In der welt, richtig? &quot; &quot;Nun, vor allem möchte ich Ihnen sagen, dass die&quot; Rezensenten &quot;nur wissenschaftliche Mitarbeiter sind. Ihre Aufgabe ist es, Teens die Aktivitäten zu machen, aber kein positives Feedback zu geben, egal wie groß du tustAd nichts mit Ihrer Leistung auf diese Aufgaben zu tun - sie handeln die gleiche Weise mit jedem einzelnen Teilnehmer, den sie treffen. &quot; &quot;Sie haben sich wahrscheinlich gefragt, warum wir das getan haben.Wir hatten einen wissenschaftlichen Grund dafür, dass wir das tun haben.Wir studieren, ob die Menge an Stress, die Sie in Ihrem täglichen Leben erleben, beeinflusst, wie stark Sie auf eine stressige Situation wie diese reagieren Die Studie ist zu verstehen, warum Jugendliche reagieren anders als Stress. Wir messen etwas namens Cortisol in Ihrem Speichel Proben als eine Möglichkeit, um Ihre Stress Antwort zu sehen. &quot; &quot;Wenn du die Rede und Mathe stressig gefunden hast, dann bist du nicht alleine, wir haben uns entschieden, Reden zu machen und Mathe zu machen, weil wir wissen, dass sie, obwohl sie sicher sind, eine Menge Leute nervös machen Brauchten, um diese Aktivitäten selbst zu machen, und wir alle fanden es wirklich hart! Auch die Wissenschaftler aus Berkeley haben die Mathematik verwirrt, und wir alle sagten, das waren die LongesT 10 Minuten meines Lebens! &#39; Hast du dich so gefühlt? &quot; &quot;Noch ein paar Dinge, die ich erwähnen möchte ...&quot; [WENN VIDEOTAPED] &quot;Wir haben dies aus zwei Gründen aufgezeichnet, der Hauptgrund dafür ist, dass unsere Chefs sicherstellen können, dass wir die Aktivität korrekt machen. In Zukunft können wir auch die Videos anschauen, um mehr Informationen über die Gesichtsausdrücke der Menschen zu erhalten. Es ist nur eine andere Art zu betrachten, wie Jugendliche unterschiedlich auf Stress reagieren. &quot; [WENN NICHT VIDEOTAPIERT] &quot;Die Wahrheit ist, dass wir dich nicht wirklich fotografieren konnten, die Kamera war nicht wirklich eingeschaltet, das war ein weiterer Teil der Schauspielerei, um es stressiger zu machen.&quot; &quot;Die Leute dort waren nicht wirklich Notizen über Ihre Leistung. Sie waren nur schriftlich Unsinn Notizen als Teil ihrer Schauspielerei. &quot;Wir möchten Sie bitten, dass Sie diese Aktivität nicht an irgendjemanden weitergeben, der in sein könnteDas Studium, auch wenn sie dein bester Freund sind, Bruder, Schwester, Cousin oder was auch immer. Wenn andere Leute über diese Tätigkeit lernen, bevor sie für den Besuch kommen, können sie ihre Rede zu Hause üben oder nervös werden, bevor sie sogar hierher kommen, und sie werden eine ganz andere Erfahrung haben als du gerade getan hast. Wir wollen nicht, dass das passiert. Macht das Sinn? Aus dem gleichen Grund, wenn du mit deinen Eltern darüber sprichst, bitte bitte sie nicht, Freunde oder Familie in der Studie zu erzählen. &quot; &quot;Haben Sie irgendwelche Fragen?&quot; </li></ol> 11. Speichelprobe # 3 (30 min Post-Stressor-Beginn) <ol><li> Legen Sie eine Linie, um 1 ml Speichel auf einem 2 ml Kryovial anzuzeigen, und erzählen Sie dem Teilnehmer, das Kryovial zu dieser Linie zu füllen. Sammeln Sie den Speichel des Teilnehmers über passives Sulfol durch ein Zwei-Zoll-Stroh in das 2 ml Kryovial 36 und frieren Sie sofort ein (-80 ° C). </li><li> Timer für 15 min einstellen </li><li> Bieten Sie Wasser zu drinK, nachdem der Teilnehmer die Speichelprobe abgeschlossen hat. Erlauben Sie dem Teilnehmer nicht, das Wasser zu halten. Nimm es zurück, wenn er / sie fertig ist. </li></ol> 12. Speichelprobe Nr. 4 (45 min Post-Stressor-Beginn) <ol><li> Legen Sie eine Linie, um 1 ml Speichel auf einem 2 ml Kryovial anzuzeigen, und erzählen Sie dem Teilnehmer, das Kryovial zu dieser Linie zu füllen. Sammeln Sie den Speichel des Teilnehmers über passives Sulfol durch ein Zwei-Zoll-Stroh in das 2 ml Kryovial 36 und frieren Sie sofort ein (-80 ° C). </li><li> Bieten Sie Wasser zu trinken, nachdem der Teilnehmer die Speichelprobe abgeschlossen hat. Erlauben Sie dem Teilnehmer nicht, das Wasser zu halten. Nimm es zurück, wenn er / sie fertig ist. </li></ol>

There are no competing financial interests.

Die aktuelle Studie suchte die Wirksamkeit einer modifizierten Version des TSST mit anfälliger Jugend zu bestätigen. Das CHAMACOS-Projekt präsentierte die optimale Stichprobe, um die Wirksamkeit eines modifizierten, kontextbezogenen TSST zu testen, da es sowohl eindeutig ist (mexikanische amerikanische Proben sind oft aus der Forschung ausgeschlossen) und stellt eine Stichprobe von Jugendlichen dar, die ein erhebliches Leben im Leben verloren haben 37 . Die Ergebnisse bestätigen den Erfolg des modifizierten TSST bei der Erzielung einer signifikanten Zunahme von Cortisol von Pre-Stress zu Post-Stress-Proben sowie eine normale relative Erholung von der TSST, als die letzte Speichelprobe gesammelt wurde. Diese Studie bietet ein wertvolles Werkzeug für das Feld sowohl durch das kontextbezogene Protokoll des TSST als auch durch die Erforschung der Faktoren, die die Modifikationen des ursprünglichen TSST beeinflusst haben. Es gibt mehrere kritische Schritte für die Einrichtung und Verwaltung der TSSTDas muss besucht werden Zuerst müssen beide Konföderierten weiße Laborkittel tragen, hinter einem Tisch sitzen und eine Videokamera aufnehmen und darauf hinweisen, wo der Teilnehmer steht, bevor der Teilnehmer in den Raum geleitet wird. Der Teilnehmer steht während des gesamten TSST, während der Ausschuss sitzt. Zweitens muss es einen Konföderierten jedes Geschlechts geben, und die Konföderierten müssen dem Teilnehmer eine ähnliche Rasse / Ethnizität haben und ein ähnliches Alter wie der Teilnehmer erscheinen (diese Studie benutzte etwas ältere Jugendliche, die im Alter der Teilnehmer ähnlich sahen ). Drittens müssen Konföderierte flache Affekte zeigen, mit leichter Langeweile während des gesamten Protokolls. Die Eidgenossen sollen den Teilnehmer so weit wie möglich ansehen, ohne Interesse während des TSST zu zeigen. Confederate 2 schreibt Notizen, während Confederate 1 für die Verwaltung von Aufforderungen und Anweisungen verantwortlich ist. Es ist zu beachten, dass die Durchführung der TSST in einem emotional &quot;neutralen &amp; #34; Staat nimmt Geschick und Praxis. Manche Personen sind möglicherweise nicht für die verbündete Rolle geeignet, wenn sie nicht in der Lage sind, ein neutrales Gesicht zu erhalten. Die Eidgenossen in dieser Studie wurden von Hand ausgewählt, um die neutrale Haltung während des gesamten TSST beibehalten zu können. Allerdings sollte ein Teilnehmer tränenreich, traurig oder aggressiv sein, müssen diese Mitarbeiter wissen, wie und wann zu intervenieren, um das Protokoll zu stoppen. Die Integrität der TSST muss auch regelmäßig in der gesamten Studie beurteilt werden, um sicherzustellen, dass es keine Drift in der emotionalen Haltung oder Skript gibt. In dieser Studie wurden wöchentliche Check-Ins an die Eidgenossen geliefert, als sie in der Lage waren, ungewöhnliche Ereignisse mit Experten in der TSST-Administration zu beheben und mit Fragen einzugehen. TSST &quot;Refreshers&quot; wurden auch alle paar Monate zur Umschulung von Eidgenossen auf dem TSST zur Verfügung gestellt. Videos wurden während der TSST für Teilnehmer aufgenommen, deren Mütter die Zustimmung erteilt haben, und diese Videos wurden überprüft, um die Wahrheit für das TSST-Skript zu gewährleisten. Schließlich können einige Forscher denken, dass Teilnehmer, die Verrat oder Ärger als Reaktion auf die TSST ausgedrückt haben, hohe Cortisol-Antworten haben. Allerdings hat diese Studie diese Vorstellung in den Daten ausgeschlossen, da sich herausstellte, dass diese Jugendlichen am ehesten Nicht-Responder waren ( dh Personen, deren Cortisol entweder sank oder über die Aufgabe stabil blieb), wie sie über ihre Cortisol-Reaktionen bewertet wurden. So hat die strikte Einhaltung eines sensiblen Protokolls die Gesamtreaktionsraten nicht unterschritten, sondern sichergestellt, dass die Herausforderung des Stressors auf das entsprechende Niveau für diese Jugendlichen titriert wurde. Das Standard-TSST-Protokoll wäre also sowohl ethisch als auch wissenschaftlich unangemessen gewesen, da die Abreibung, die Nichtantwort und das &quot;Aufgeben&quot; eine vorherrschende Antwort waren. Nach dem Ausführen einiger Teilnehmer durch die ursprüngliche TSST, wurde die ursprüngliche TSST modifiziert, um besser auf die Kontext-Faktoren dieser Population aufgrund nicht-optimalen AntwortEs ( dh weinen, aus der Aufgabe losgehen, aggressive Haltung). Studienpersonal konsultiert mit zahlreichen Forschern, die die TSST mit anfälligen Populationen ( z. B. Waisenhäuser, jugendliche Gerechtigkeitseinstellungen, missbräuchliche Populationen) verwendet haben, aber keiner der Modifikationen passt perfekt zu den Bedürfnissen dieser Studie - manche sind zu weit vom Protokoll entfernt und wir waren besorgt darüber, dass diese Änderungen würden keine Cortisol-Antwort 12 , 27 auslösen. So wurden in unserer Studie drei primäre Modifikationen auf den TSST angewendet, und die Modifikationen und Motivationen für diese Modifikationen werden unten beleuchtet. Erstens ist es wichtig, die Teilnehmer nicht zu entfremden. Die Verabreichung einer Stressaufgabe war für diese Studie wichtig, doch war es zwingend erforderlich, dass die Teilnehmer nicht zur Abreibung verloren gingen, da die Jugend in Längsrichtung verfolgt worden war, da ihre Mütter mit ihnen schwanger wurden. In dieser Studie waren die Teilnehmer dUnmittelbar nach dem TSST gequält, um sicherzustellen, dass der Stress nach dem Abschluss des TSST für die Teilnehmer aufgehört hat. Für diese Stichprobe mussten die Mitarbeiter, die das Debriefing verwalteten, jemanden als fremd wie möglich, aber dennoch empathisch, ohne eine emotionale Verbindung mit der Jugend sein. Während das scheinbar kontraintuitiv erscheinen könnte, als die Mitarbeiter, die vertraut waren und emotional mit der Jugend verbunden waren, sie auf dem TSST zeugten, tendierte die Jugend dazu, mehr Neigung zur Gewinnung über die TSST zu haben und mehr darüber zu sprechen, was manchmal mit dem Schreien oder Gefühlen des Ressentiments endete In Richtung &quot;ausgetrickst&quot;. Ungewohnte Mitarbeiter, die das Debriefing verwalteten, sorgten dafür, dass wir die Längsverbindungen, die die Kohorte mit dem vertrauten Personal gemacht hatte, durch die Umsetzung des TSST nicht getrennt hatten. Dies wird in der Latino-Community als wichtig erachtet, aber es ist etwas, das viele Längsschnittstudien, die eine starke Beziehung mit den Teilnehmern entwickeln, berücksichtigen sollten. Mit ungewohnten staFf auch die Wahrscheinlichkeit verringert, dass der Debrief dazu gedient hat, die Jugend weiter zu betonen, angesichts der optimalen Verhaltensreaktionen, die wir mit ungewohnten Mitarbeitern beobachteten. Während die Nachbesprechung vor der Sammlung von zwei weiteren Speichelproben die Forscher, die diese Modifikation verwenden, betreffen kann, ist zu beachten, dass diese Studie das prototypische Cortisol-Antwortmuster nach dem Abschluss des TSST beobachtete (wobei die höchste Konzentration 15 min nach dem Abschluss des Stressors lag , Und Erholung 30 min nach dem Abschluss des Stressors). Diese Modifikation wurde gemacht, um kulturell empfindlicher für die Jugend zu sein, die nach dem TSST aufgrund ihres anfälligen Staates weiterhin eine Stressreaktion haben könnte. Zweitens muss das TSST-Protokoll flexibel auf die einzelnen Faktoren des Teilnehmers abgestimmt sein. Die mexikanische amerikanische Jugend in dieser Studie wohnt in niedrig-resourced und verarmten landwirtschaftlichen Gemeinschaften im Salinas Tal. CHAMACOS-Familien arbeiten unter schwierigenBedingungen, speziell Niedriglohn, intermittierende saisonale Beschäftigung und lange Arbeitszeiten, die Chancen für positive familiäre Interaktionen während einer Zeit der schnellen und herausragenden jugendlichen Entwicklung zu umgehen. Stressoren, die mit einer niedrigen SES / Armut in der Kohorte verbunden sind, tragen zur Nahrungsmittelunsicherheit, überfüllten Wohnungen, unterdurchschnittlichen Lebensbedingungen und unzureichenden medizinischen Dienstleistungen bei, um kognitiven Behinderungen und psychischen Bedürfnissen zu begegnen. Zusammenfassend ist dies, dass die Jugend im Salinertal unverhältnismäßig dem Familienaufruhr und der Jugendgewalt ausgesetzt ist, die in lokale Schulen und Nachbarschaften gleich sind. Diese Risikofaktoren werden zunehmend akzentuiert, da Jugendliche lernen, sich an schnell wechselnde soziale und ökonomische Herausforderungen anzupassen oder allmählich sensibilisiert zu werden (oder in manchen Fällen desensibilisiert) auf die unvorhersehbare Natur ihres täglichen Lebens. Ein Beispiel dafür, dass die TSST für diese Population flexibler wurde, war, die Schwierigkeit der Mathematik zu variieren. Angesichts der Tatsache, dass diese StuDy war privy zu vorherigen kognitiven Tests und hatte Kenntnisse der Umwelt-Pathogen-Exposition, die Auswirkungen auf IQ 38 , war es klar, dass die &quot;one size passt alle&quot; Mathe-Aufgabe in der Regel mit dem TSST verbunden war nicht, um diese Bevölkerung unterzubringen. Nach anderen Stressoren 39 , 40 , Mathe Schwierigkeit wurde daher titriert, um herausfordernd, aber nicht unmöglich für die Jugend. Drittens muss das TSST-Protokoll das hohe Gefühl der Gemeinschaft und der sozialen Verbindung in bestimmten kulturellen Einstellungen erkennen und aufbauen. Es ist wichtig, die Eidgenossen zu gebrauchen, mit denen sich die Jugendlichen verbinden, so dass diese Studie die Konföderierten, die etwas älter waren als die Teilnehmer, so dass sie von ähnlichem Alter und ethnischer Herkunft erscheinen und aus derselben Gemeinde stammten, so dass SET aus &quot;ihren Kollegen&quot; kam. Umgekehrt war zu viel soziale Verbindung problematisch. Es ist wichtig, dafür zu sorgenDie Eidgenossen sind angemessen neutral und die Konföderierten waren den Teilnehmern unbekannt. Dies war für die aktuelle Studie kritisch, denn obwohl das Salinas-Tal eine relativ große Region ist, kann die Jugendgemeinschaft sehr klein und miteinander verbunden sein. So kann es sinnvoll sein, sicherzustellen, bevor die TSST beginnt, dass die Teilnehmer und Konföderierten sich nicht kennen. Wenn der Teilnehmer oder der Konföderierte den anderen in dieser Studie erkannt hat, wurde der TSST mit nur einem Konföderierten geführt. Die Tatsache, dass die Konföderierten dieser Studie aus derselben Gemeinde stammten, ist in diesem Zusammenhang (Salinas) wichtig, was bei einem Universitätseinsatz weit entfernt ist und bei der Suche nach Mitarbeitern, die eine Stunde oder zwei Zeit arbeiten können, weit entfernt ist. Die Außendienstmitarbeiter dieser Studie waren sehr versiert und in hohem Maße in der Forschung ausgebildet, was nicht in Bezug auf die Aufrechterhaltung des Protokolls als selbstverständlich angesehen werden sollte. Während diese Ergebnisse für die Validierung der Verwendung eines modifizierten TSST vielversprechend sindMit anfälligen Jugendlichen, ist mehr Forschung erforderlich, um die Replizierbarkeit dieser Effekte über verschiedene Proben zu bestätigen. Erstens, während dieses Projekt glücklich war, auf eine so einzigartige und anfällige Stichprobe von mexikanischen Jugendlichen zuzugreifen, müssen diese Ergebnisse in anderen gefährdeten Ethnien repliziert werden, um zu bestätigen, dass diese modifizierte TSST stark genug ist, um eine Cortisol-Antwort hervorzurufen Andere Populationen. Zweitens war diese Stichprobe auf 14-Jährige beschränkt. Während die schmalen Stichproben für die Wirkung des Alters auf die TSST-Antwort in dieser Stichprobe kontrolliert wurden, könnte die zukünftige Forschung versuchen, diese Effekte in verschiedenen Jugend- und Kinderalter zu replizieren, und vielleicht über die pubertäre Entwicklung. Schließlich ist anzumerken, dass Daten nicht aus einer Vergleichsgruppe unter Verwendung eines nicht modifizierten TSST gesammelt wurden, da es bei dieser Stichprobe unethisch wäre, da die hohe Rate von schlechten Verhaltens- und emotionalen Reaktionen, die wir am Anfang mit einer weniger modifizierten Erfahrung hatten, Version oDer TSST. Es gibt auch Einschränkungen der TSST-Technik im Allgemeinen. Wie bereits erwähnt, braucht es für die Konföderierten eine bedeutende Praxis, die neutrale Haltung während des gesamten TSST zu behalten. Mindestens 3 Personen sind nötig, um die TSST passend zu führen (2 Konföderierte und 1 Experimentator), und die TSST läuft besser, wenn diese Leute dem Teilnehmer unbekannt sind. So ist dieses Protokoll einfacher in College-Campus-Einstellungen laufen, wo Studenten können im Labor 1-2 h zu einem Zeitpunkt arbeiten, aber weniger einfach in Remote-Einstellungen oder in Einstellungen, wo die Eidgenossen als Job bezahlt werden (wie sie nur bezahlt werden Für ~ 1 h Arbeit pro TSST). Diese Technik könnte auch eine Hürde für Längsschnittstudien mit Personal sein, die im Laufe der Zeit an dem Projekt arbeiten - das bekannte Personal sollte nicht dasjenige sein, das den TSST verwaltet. Auch gibt es erhebliche Overhead in Bezug auf die Aufrechterhaltung der Integrität der TSST im Laufe der Zeit - Experten sind erforderlich, um das Videoband zu überprüfenS des TSST, pflegen wöchentliche Check Ins mit den Konföderierten, und bieten regelmäßige &quot;Auffrischung&quot; Sitzungen, um sicherzustellen, gibt es keine Drift in der Technik. Darüber hinaus ist die TSST schwierig, wiederholt für einen bestimmten Teilnehmer zu tun, da sie auf kleinere Täuschung beruht und die Teilnehmer sich an die Technik gewöhnen können. Die Sprach- und Mathe-Teile sind nicht ausgeglichen, was für andere Methoden, wie das Funktionieren des autonomen Nervensystems, optimaler wäre. Es gibt keine Teile für die TSST, die nicht stressig sind, also erfordert es eine weitere Sitzung ( dh freundliches TSST oder ein Placebo TSST) oder etwas anderes ( dh ein Basal Tag), um einen non-stress Vergleich zu haben. Schließlich könnte ein nicht-laborbasierter Stressor wirksamer ( dh Karaoke, Achterbahnen oder Spukhäuser) oder ökologischer sein. Diese Studie bietet die Grundlage für die zukünftige Forschung, um eine modifizierte TSST mit anfälligen Jugendlichen zu nutzen. Zukunft längsStudien, die versuchen, die Teilnehmer über mehrere Wellen der Datenerfassung zu halten, können auch ihren Ansatz unter Verwendung einiger dieser Modifikationen modifizieren, um so den Abrieb zu begrenzen. Weiterhin zeigt diese Studie, dass es tatsächlich möglich ist, eine modifizierte Version des TSST zu schaffen, die kulturell empfindlich ist, während sie immer noch die Stressreaktivität auf ein geeignetes Niveau titriert, um individuelle Unterschiede in der Cortisol-Ansprechempfindlichkeit zu erfassen.

Der Trier Social Stress Test (TSST) 1 ist zum Goldstandard geworden, um Stress in Laboreinstellungen zu induzieren 2 . Es ist ein gut validierter und weit verbreiteter sozialer Stressor, der gezeigt hat, dass er eine 2-4fache Zunahme des Cortisols, der biologischen Produktion der Hypothalamus-Hypophysen-Adrenal (HPA) -Achse 1 , 3 , induziert. Eine Metaanalyse ergab, dass zwei Schlüsselaspekte integriert sind, um die robusteste HPA-Reaktivität über die Lebensdauer hinweg zu induzieren: Unberechenbarkeit / Unkontrollierbarkeit und soziale Auswertung (SET), die beide den TSST 3 charakterisieren. Die Adoleszenz kann eine Schlüsselperiode sein, in der SET besonders stressig ist, gekennzeichnet durch eine sensible Entwicklungsphase, wobei soziale Interaktionen das Lernen erleichtern 4 . Zum Beispiel in der frühen Pubertät und Adoleszenz, Integration mit Peer Group<html> S wird motivationsorientiert 5 . Schnelle Erhöhungen des Hormonspiegels zu Beginn der Pubertät beeinflussen die Entwicklung von limbischen Schaltkreisen, was zu einer Erhöhung der Verarbeitung von statusrelevanten sozialen Reizen ( dh Bewunderung) führt, da die Motivationsfähigkeit 6 erhöht wird. Diese Zunahme des sozialen affektiven Engagements beeinflusst nicht nur Motivationen und Verhaltensweisen im Moment, sondern beeinflusst auch Verhaltensmuster und Motivations Lernen über lange Intervalle. Im Laufe der Zeit kann diese Veränderung bei der Priorisierung sozialer Anreize zu Gesundheits-Exploration und Risikobereitschaft führen, die soziale und affektive Lern- und Fähigkeiten fördern können, die das soziale Funktionieren von Erwachsenen untermauern. So ist es nicht verwunderlich, dass Aspekte des sozialen Funktionierens, die an der TSST-Sprachphase beteiligt sind, eine starke Form von Stress für Jugendliche sind, dh das &quot;gute Freund&quot; Thema 7 , 8 ,Ref &quot;&gt; 9. Allerdings können Individuen, die durch eine Geschichte von Trauma oder stressigen Lebensereignissen sensibilisiert werden, primed auf soziale Evaluation oder unvorhersehbare Situationen aufgrund einer schlechten emotionalen Kontrolle oder erhöhter Empfindlichkeit gegenüber Stress reagieren, und dieses Muster der negativen Antwort könnte dazu beitragen Negative gesunde Ergebnisse, wie Drogenkonsum oder gefährliche Nervenkitzel suchen. So ist das Verständnis der biologischen Reaktionen auf SET von größter Bedeutung für gefährdete Jugendliche. Eine Handvoll Studien haben untersucht, wie Variationen von SET und Unkontrollierbarkeit die Stressreaktion beeinflussen. SET kann aufgrund der Anzahl der konföderierten Richter erhöht oder verringert werden. Die TSST fordert 2 Konföderierte, aber es ist effektiver mit vier 10 und weniger effektiv mit 1 - 2 Konföderierten 11 , 12 , 13 oder mit einem virtuellen oder entfernten Publikum 14 , , 16 . Hinzufügen von negativem Kommentar erhöht die SET- und Responderraten 11 , 17 , während der positive Kommentar die SET- und Responderraten reduziert. Die Rate der Ansprechempfindlichkeit wird durch die Änderung der Unkontrollierbarkeit beeinflusst durch (a) die Modifikation der Zeitdauer, in der die Teilnehmer die Rede vorbereiten müssen 14 (b) die psychosozialen Ressourcen der Teilnehmer 19 , 20 , 21 erhöhen oder (c) das Selbstvertrauen der Teilnehmer zu erhöhen Der TSST 22 Modifikationen, die Emotionsunterdrückung 23 , Vigilanz oder Aufmerksamkeit auf den Stressor 24 , 25 oder Gedanken über das Selbst 26 erhöhen, erhöhen die TSST-Ansprechempfindlichkeit. Schließlich ist das Geschlecht und Alter des Kon-Föderation kann die Stressreaktivität auf SET 27 , 28 beeinflussen . Diese Studien zeigen, dass die Ansprechrate experimentell erhöht oder verringert werden kann. In der aktuellen Studie wurde die TSST durch die Einbeziehung zeitgesteuerter Aufforderungen, alternative mathematische Aufgaben, die Verwendung von gleich-ethnischen Gleichaltrigen als Konföderierten, Nachbesprechung unmittelbar nach dem Abschluss des TSST, und mit einem unbekannten Jugend-Prüfer, um den Debrief zu verwalten modifiziert. Eine neuere Überprüfung der Stress-Paradigmen zeigte besonders robuste Effekte der sozial-evaluativen Bedrohung auf die Cortisol-Erhöhung (HPA-Antwort) während der mittleren Adoleszenz 29 . Allerdings gibt es gültige Bedenken über die Verwendung der TSST mit anfälligen Jugendlichen. Insbesondere können die Schutzbedenken der menschlichen Gegenstände angehoben werden, um sicherzustellen, dass die Vorteile die Risiken überwiegen, da das potenzielle Trauma mit der Ausübung der TSST verbunden ist, wenn die Jugend bereits anfällig ist ( z </Em&gt;, die aus Umgebungen von Armut und frühen Leben Widrigkeiten kommen). So gibt es die Notwendigkeit, sicherzustellen, dass die Jugend nicht in einem Zustand der erhöhten Angst oder Aufregung zu verlassen. Allerdings dürfen Änderungen an der TSST, um einige dieser Bedenken zu lindern / zu mildern, nicht die Gesamtwirksamkeit oder Gültigkeit des Stressors verringern. Zum Beispiel haben frühere Studien die Auswirkungen von modifizierten Versionen des TSST für gefährdete Jugendliche dokumentiert, hatten aber nur begrenzten Erfolg, um einen Anstieg von Cortisol 30 , 31 zu provozieren. Weiterhin müssen Modifikationen vorgenommen werden, um das TSST kultursensibler und angemessener zu machen. Zum Beispiel gibt es Literatur, die darauf hindeutet, dass die Interaktion mit Individuen verschiedener Rassen Stress und Bedrohungsreaktionen hervorrufen kann 32 . Abweichend von der Rassenverfassung des Teilnehmers und des TSST-Komitees wurde gezeigt, dass sie die Cortisol-Reaktivität gegenüber dem TSST 33 nicht beeinflussen würdeHandeln cortisol Erholung aus dem TSST 34 . So kann die Verwendung von gleich-Rasse / ethnischen Konföderierten für die TSST jede unnötige Verwechslung der Rasse der Konföderierten auf die wahrgenommene Stereotyp-Bedrohung und Cortisol-Erholung von der TSST beseitigen. Die vorliegende Studie fand im Rahmen einer langjährigen Geburtskohorte Studie der mexikanischen amerikanischen Familien in Kalifornien das Zentrum für die Gesundheits-Bewertung von Müttern und Kindern von Salinas (CHAMACOS). Diese Stichprobe zeichnet sich durch hohe Armutsraten (76% der Familien auf oder unterhalb des Bundesarmuts) und eine hohe Anzahl von unerwünschten frühen Lebensereignissen (mittlere Anzahl von Lebenszeitereignissen = 4,5 für die Stichprobe, SD = 3.3). Im Vergleich dazu ergab eine große retrospektive Studie, die von einer Partnerschaft zwischen den US-Zentren für Krankheitsbekämpfung und Prävention und Kaiser Permanente auf der Grundlage von Tausenden oder Befragten durchgeführt wurde, nur 13%, um 4 oder mehr ungünstige chi gemeldet zu habenLdhood events 35 Die TSST wurde der Jugend in dieser Studie als Teil eines großen NIH-Stipendiums verliehen, der darauf abzielte, den Zusammenhang zwischen unerwünschten frühen Lebenereignissen, biologischer Reaktivität auf soziale Auswertung im Alter von 14 Jahren (bei der Verabreichung des TSST) und Risikobewegungen zu erforschen (Im Alter von 16 Jahren, die Datenerhebung ist noch nicht abgeschlossen, grant1R01DA035300). Während der frühen Stadien der Pilotierung der TSST beobachteten wir, dass der Ansatz verlagert werden musste, um kontextuell empfindlich auf die einzigartigen Bedürfnisse dieser Population zu reagieren und schlechte Reaktionen zu mildern ( dh zu weinen, sich wütend zu machen und sich von der TSST zu lösen). Um genau zu sein, hatten wir eine 20% ige Rate von schlechten Verhaltensreaktionen auf die TSST vor Modifikationen ( dh 4 von 20 TSST Teilnehmer entweder gerufen oder reagiert mit Wut), während nur 5% reagierten mit schlechten Antworten nach der Änderung wurden umgesetzt. Das Studiumpersonal war sich auch der Bedeutung von Reta sehr bewusstJugend in dieser Längsschnittstudie. Es ist anzumerken, dass während der Pilotphase Personen, die auf die TSST mit extremen Stressreaktionen gehorsam während des Debriefs reagierten, auf biologischer Ebene &quot;Nicht-Responder&quot; waren, dh sie zeigten keinen Cortisol-Anstieg. Diese emotionale / biologische Nebeneinanderstellung aus diesen ersten Ergebnissen zeigte auch die Notwendigkeit, die TSST zu modifizieren, um die optimalen Bedingungen zu schaffen, um eine geeignete biologische Antwort auf die TSST zu induzieren. So gibt diese Studie vorläufige Beweise aus einer Subsample der Jugend der Wirksamkeit der modifizierten TSST, um Cortisol Reaktivität zu induzieren.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="651">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:199px;">TSST</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:196px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2 white lab coats</td>
			<td>Dickies</td>
			<td>83403</td>
			<td>For confederates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2 clip boards</td>
			<td>Staples</td>
			<td>21423</td>
			<td>For confederates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2 pens</td>
			<td>BIC</td>
			<td>GSM609-Blk</td>
			<td>For confederates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Table</td>
			<td>Ikea</td>
			<td>B00EYU3E7I</td>
			<td>For confederates to sit behind</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Video Camera &#38; Tripod</td>
			<td>Sony</td>
			<td>K-86674-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paper&#160;</td>
			<td>Generic</td>
			<td></td>
			<td>For participant&#39;s preparation period</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Saliva samples</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Latex gloves</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>19041171C</td>
			<td>To collect saliva samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2 mL cryovials</td>
			<td>Wheaton</td>
			<td>W985872-100</td>
			<td>4 per participant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">80 C freezer</td>
			<td>So-Low</td>
			<td>U85-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2&#39;&#39; straws&#160;</td>
			<td>Genuine Joe</td>
			<td>GJO58925</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified trier social stress test for vulnerable mexican american adolescents

Der Trier Social Stress Test (TSST) ist ein gut validierter und weit verbreiteter sozialer Stressor, der gezeigt hat, dass er eine 2-4fache Zunahme von Cortisol induziert, die biologische Produktion, die von der Hypothalamus-Hypophyse-Adrenal (HPA) -Achse beim Menschen produziert wird. Während Studien untersucht haben, wie Modifikationen an der TSST die Stressreaktion beeinflussen, haben wenige Studien ein modifiziertes TSST geschaffen, das für gefährdete Jugendliche geeignet ist, die eine signifikante Cortisol-Stressreaktion hervorruft. So suchte die aktuelle Studie die TSST kulturell sensibel für eine anfällige Stichprobe von 14-jährigen Jugendlichen zu modifizieren oder anzupassen. Die vorliegende Studie fand im Rahmen einer langjährigen Geburtskohorte Studie der mexikanischen amerikanischen Familien in Kalifornien das Zentrum für die Gesundheits-Bewertung von Müttern und Kindern von Salinas (CHAMACOS). Die CHAMACOS-Probe war optimal, um die Wirksamkeit eines modifizierten kulturell geeigneten TSST zu testen, da es sich um mexikanische amerikanische Jugendliche handelt,Zehn aus der Forschung ausgeschlossen. Diese Jugendlichen haben auch erhebliche frühe Leben Widrigkeiten erlebt. Beispiel-Modifikationen beinhalten zeitgesteuerte Aufforderungen, alternative mathematische Aufgaben, die Verwendung von gleich-ethnischen Gleichen als Konföderierten, die Nachbesprechung unmittelbar nach dem Abschluss des TSST und die Verwendung eines unbekannten Jugendprüfers, um den Debrief zu verwalten. Speichelproben wurden nach der Ruhephase (nach einer Ruhephase) gesammelt und dann wieder bei 15, 30 und 45 min nach der TSST-Beginn, um die Cortisol-Konzentration zu bestimmen. Eine Pilotstudie von 50 Teilnehmern (50% weiblich) wurde auf Cortisol-Reaktion auf den TSST analysiert. Die Ergebnisse bestätigten, dass diese modifizierte Version des TSST erfolgreich war, eine signifikante Cortisol-Reaktion hervorzurufen, mit einer breiten Variabilität, die aufgrund individueller Unterschiede wahrscheinlich war. Ziele für Änderungen und ethnische Überlegungen werden diskutiert. Diese Studie bietet die Grundlage für die zukünftige Forschung, um eine modifizierte TSST mit anfälligen Jugendlichen zu nutzen.

Die Stichprobe bestand aus 14-Jährigen, die Teil einer reichhaltigen, etablierten Kohortenstudie waren, dem Zentrum für die Gesundheitsanalyse von Müttern und Kindern von Salinas (CHAMACOS). Diese Studie besteht aus der ersten Kohorte von 325 mexikanischen amerikanischen Familien, die in einer Landarbeitergemeinschaft in Kalifornien leben und folgten prospektiv, da sie in utero waren. Die TSST wurde nicht an die zweite CHAMACOS-Kohorte von 300 Kindern verliehen, die seit dem Alter von 9 Jahren alt waren. Jugendliche wurden von der Teilnahme an der TSST abgeschirmt, wenn ihr umfangreiches IQ &lt;70 von einem vorherigen Besuch (Alter 12) war, wenn der Jugendliche jemals mit Autismus pro mütterlichen Bericht diagnostiziert wurde, wenn extreme atypische Verhaltensweisen in der Klinik bei vergangenen Besuchen gezeigt wurden ( dh ausgeprägt Misstrauen / Paranoia über das Studium, Dinge oder Menschen, die nicht da sind - pro mütterlichen Bericht), wenn ihre Depression Screener Score war ≥3 SDs über dem Mittel für Alter und Geschlecht, und wenn tEr Jugendliche berichtete über die Beteiligung an einem Bandenkampf im Vorjahr. Diese Ausschlusskriterien wurden auf der Grundlage der Überempfindung zunächst auf die TSST hinzugefügt, aber es ist unklar, ob diese Ausschlusskriterien einen Unterschied in den endgültigen Ergebnissen gemacht haben. Abgesehen von diesen Ausschlusskriterien wurden die Teilnehmer unabhängig von ihrer psychischen und körperlichen Gesundheit eingeschrieben. Am Ende haben 264 Jugendliche die TSST in vollem Umfang mit entweder keine gemeldeten Probleme oder keine Probleme bis zum Debrief abgeschlossen. Tabelle 1 listet die Anzahl der Teilnehmer auf, die ausgeschlossen wurden und warum sie ausgeschlossen wurden. Es gab keine demographischen Unterschiede zwischen denen, die versus nicht abgeschlossen die TSST. Speichelproben wurden bei -80 ° C gelagert, bis sie auf Trockeneis an Kollegen an der Iowa State University ( dh Biosafety Level II Labor) versandt wurden. Bei der Ankunft wurden gefrorene Speichelproben katalogisiert und wieder in einen Gefrierschrank von -80 ° C gestellt. AufDer Tag des Assays wurde jede Speichelprobe aufgetaut und innerhalb von 24 h in doppelter Menge unter Verwendung gut etablierter hochempfindlicher Enzym-Immunoassay-Kits untersucht. Die mittleren Intra-Assay-Variationskoeffizienten (CVs) betrugen weniger als 2,25% und der mittlere Inter-Assay-CV betrug 5,13% für Cortisol. Die Probe wurde erneut analysiert, wenn der CV für die doppelten Messungen größer als 7% war. Beschreibende Statistiken für die Cortisol-Messungen zusammen mit Standardabweichungen über jede Probe sind in Tabelle 2 angegeben und in Abbildung 1 dargestellt . A 2 x 4 wiederholte Maßnahmen ANOVA wurde durchgeführt, um die Auswirkungen des Geschlechts auf die vier Speichelproben zu testen. Es gab einen Haupteffekt für die Cortisol-Antwort auf den TSST ( F = 9,09, p &lt;0,001), aber der Sex war kein signifikanter Prädiktor für die Cortisol-Antwort auf Stress ( F = 1,03, p = 0,39). Der durchschnittliche Körpermassenindex betrug 23,53 und war auch kein signifikanter Prädiktor für die Wiederholung( C = 1,03, p = 0,38). Wie zu erwarten war, zeigten gepaarte Proben-t-Tests (wie in Tabelle 3 angegeben ) signifikante Veränderungen in Cortisol von der Vorspannung bis zu 15 min nach dem Stressor-Beginn, von 15 min nach dem Stressor-Beginn bis zu 30 min nach dem Stressor-Beginn und von 30 min post-stressor zu 45 min post-stressor. Die grösste Veränderung des Cortisols erfolgte beim Vergleich der Vorstress-Cortisol-Konzentration mit der 30-minütigen Nach-Stressor-Konzentration im Einklang mit der vorherigen Forschung (Cohens d = 0,80) 1 , 3 . Einzelpersonen, die mit einer schwierigen Zeit mit dem TSST markiert wurden, tendierten dazu, eine erhöhte Stressreaktivität gegenüber dem Stressor zu melden, aber berichteten, dass sie vor dem Ende der Studie wieder in einen normalen Zustand zurückkehrten. Während die 30-minütige Post-Stressor-Konzentration die höchste Konzentration aus diesen Proben war, deutet die 45-minütige Post-Stressor-Cortisol-Konzentration darauf hin, dass Individuen begannenUm sich von dem Stressor zu erholen, da die 45-minütige Nach-Stressor-Konzentration signifikant niedriger war als die Konzentration von 30 min (siehe Tabelle 3 ). <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/55393/55393fig1.jpg" /> Abbildung 1: Cortisol-Reaktivität gegenüber dem TSST. Cortisol-Reaktivität bedeutet mit Standardabweichungen. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55393/55393fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Tabelle 1" src="/files/ftp_upload/55393/55393table1.jpg" /> Tabelle 1: Gründe für Ausschluss. Die Teilnehmer wurden von der Studie ausgeschlossen, wenn sie die TSST begannen, aber frühzeitig anfingen, sich weigerten, teilzunehmen, wurden aus dem Projekt herausgeschoben oder wurden aufgrund von projektbezogenen Fragen übersprungen. Tabelle 2: Mittlere Cortisol-Konzentrationen und Standardabweichungen. Cortisol erhöhte sich von den Proben 1-3 und ging dann durch Probe 4 ab. <img alt="Tisch 3" src="/files/ftp_upload/55393/55393table3.jpg" /> Tabelle 3: Paired Samples t-Tests. Vergleiche Proben in Cortisol-Konzentration (μg / dL) und Standardabweichungen (SD) für Cortisol-Veränderung. Signifikante Zunahmen von Cortisol wurden von der Baseline-Probe zu Nach-Stress-Proben beobachtet.

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A Modified Trier Social Stress Test for Vulnerable Mexican American Adolescents

Hier präsentieren wir ein Protokoll, das die Cortisol-Reaktivität in einer anfälligen jugendlichen mexikanischen amerikanischen Probe mit einer modifizierten Version des Trier Social Stress Test (TSST) hervorrief. Speichelproben wurden zu Beginn, 15, 30 und 45 min nach dem TSST-Beginn gesammelt. Zukünftige Forschung könnte diese modifizierte TSST mit anfälliger Jugend nutzen.

Ein Modified Trier Social Stress Test für anfällige mexikanische amerikanische Jugendliche

The Trier Social Stress Test (TSST) is a well validated and widely used social stressor that has been shown to induce a 2-4 fold increase in cortisol, the ...

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Developmental Biology

Unit 1

Stress and Lifestyle

SCIENTISTS IN ACTION

12.7K Aufrufe.  University of California, Berkeley.  Hier präsentieren wir ein Protokoll, das die Cortisol-Reaktivität in einer anfälligen jugendlichen mexikanischen amerikanischen Probe mit einer modifizierten Version des Trier Social Stress Test (TSST) hervorrief. Speichelproben wurden zu Beginn, 15, 30 und 45 min nach dem TSST-Beginn gesammelt. Zukünftige Forschung könnte diese modifizierte TSST mit anfälliger Jugend nutzen. 

Serie: A Modified Trier Social Stress Test for Vulnerable Mexican American Adolescents

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. However, the analysis and quantification of cellular localization is difficult, as in many cases it relies on manual counting, thus bearing the risk of introducing a rater-dependent bias and reducing interrater reliability. Moreover, it is often difficult to judge whether the co-localization between two cells results from random positioning, especially when cell types differ strongly in the frequency of their occurrence. Here, a method for unbiased quantification of cellular co-localization in the bone marrow is introduced. The protocol describes the sample preparation used to obtain histological sections of whole murine long bones including the bone marrow, as well as the staining protocol and the acquisition of high-resolution images. An analysis workflow spanning from the recognition of hematopoietic and non-hematopoietic cell types in 2-dimensional (2D) bone marrow images to the quantification of the direct contacts between those cells is presented. This also includes a neighborhood analysis, to obtain information about the cellular microenvironment surrounding a certain cell type. In order to evaluate whether co-localization of two cell types is the mere result of random cell positioning or reflects preferential associations between the cells, a simulation tool which is suitable for testing this hypothesis in the case of hematopoietic as well as stromal cells, is used. This approach is not limited to the bone marrow, and can be extended to other tissues to permit reproducible, quantitative analysis of histological data.

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &amp;#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

A strategy to quantitatively analyze histological data in the bone marrow is presented. Confocal microscopy of fluorescently labeled cells in tissue sections results in 2-dimensional images, which are automatically analyzed. Co-localization analyses of different cell types are compared to data from simulated images, giving quantitative information about cellular interactions.

Automatisierte Quantifizierung Hämatopoetische Zell - Stromal Cell Interactions in histologische Bilder unentkalkte Knochen

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Capturing Tissue Repair in Zebrafish Larvae with Time-lapse Brightfield Stereomicroscopy

The zebrafish larval tail fin is ideal for studying tissue regeneration due to the simple architecture of the larval fin-fold, which comprises of two layers of skin that enclose undifferentiated mesenchyme, and because the larval tail fin regenerates rapidly within 2-3 days. Using this system, we demonstrate a method for capturing the repair dynamics of the amputated tail fin with time-lapse video brightfield stereomicroscopy. We demonstrate that fin amputation triggers a contraction of the amputation wound and extrusion of cells around the wound margin, leading to their subsequent clearance. Fin regeneration proceeds from proximal to distal direction after a short delay. In addition, developmental growth of the larva can be observed during all stages. The presented method provides an opportunity for observing and analyzing whole tissue-scale behaviors such as fin development and growth in a simple microscope setting, which is easily adaptable to any stereomicroscope with time-lapse capabilities.

We present a protocol for capturing the dynamics of zebrafish larval tail fin regeneration on a whole-tissue scale using brightfield-based stereomicroscopy. This technique enables capturing the regeneration dynamics with single cell resolution. This methodology can be adapted to any stereomicroscope equipped with a CCD camera and time-lapse software.

Erfassen von Gewebereparatur in Zebrafisch-Larven mit Zeitrafferhellstereomikroskopie

The zebrafish larval tail fin is ideal for studying tissue regeneration due to the simple architecture of the larval fin-fold, which comprises of two ...

Forward Genetic Approach to Uncover Stress Resistance Genes in Mice &#8212; A High-throughput Screen in ES Cells

Phenotype-driven genetic screens in mice is a powerful technique to uncover gene functions, but are often hampered by extremely high costs, which severely limits its potential. We describe here the use of mouse embryonic stem (ES) cells as surrogate cells to screen for a phenotype of interest and subsequently introduce these cells into a host embryo to develop into a living mouse carrying the phenotype. This method provides (1) a cost effective, high-throughput platform for genetic screen in mammalian cells; (2) a rapid way to identify the mutated genes and verify causality; and (3) a short-cut to develop mouse mutants directly from these selected ES cells for whole animal studies. We demonstrated the use of paraquat (PQ) to select resistant mutants and identify mutations that confer oxidative stress resistance. Other stressors or cytotoxic compounds may also be used to screen for resistant mutants to uncover novel genetic determinants of a variety of cellular stress resistance.

Forward Genetic Approach to Uncover Stress Resistance Genes in Mice &amp;#8212; A High-throughput Screen in ES Cells

Stress resistance is one of the hallmarks for longevity and is known to be genetically governed. Here, we developed an unbiased high-throughput method to screen for mutations that confer stress resistance in ES cells with which to develop mouse models for longevity studies.

Vorwärts genetische Ansatz zur Stressresistenz-Gene in Mäuse Entdecken - Hochdurchsatz-Bildschirm in ES-Zellen

Phenotype-driven genetic screens in mice is a powerful technique to uncover gene functions, but are often hampered by extremely high costs, which severely ...

Generation of Genetically Modified Organotypic Skin Cultures Using Devitalized Human Dermis

Organotypic cultures allow the reconstitution of a 3D environment critical for cell-cell contact and cell-matrix interactions which mimics the function and physiology of their in vivo tissue counterparts. This is exemplified by organotypic skin cultures which faithfully recapitulates the epidermal differentiation and stratification program. Primary human epidermal keratinocytes are genetically manipulable through retroviruses where genes can be easily overexpressed or knocked down. These genetically modified keratinocytes can then be used to regenerate human epidermis in organotypic skin cultures providing a powerful model to study genetic pathways impacting epidermal growth, differentiation, and disease progression. The protocols presented here describe methods to prepare devitalized human dermis as well as to genetically manipulate primary human keratinocytes in order to generate organotypic skin cultures. Regenerated human skin can be used in downstream applications such as gene expression profiling, immunostaining, and chromatin immunoprecipitations followed by high throughput sequencing. Thus, generation of these genetically modified organotypic skin cultures will allow the determination of genes that are critical for maintaining skin homeostasis.

The goal of this paper is to provide a comprehensive and detailed protocol on how to generate genetically modified human organotypic skin from epidermal keratinocytes and devitalized human dermis.

Herstellung von genetisch veränderten Organotypische Hautkulturen Mit devitalisierten Menschen Dermis

Organotypic cultures allow the reconstitution of a 3D environment critical for cell-cell contact and cell-matrix interactions which mimics the function ...

Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks

The threespine stickleback fish has emerged as a powerful system to study the genetic basis of a wide variety of morphological, physiological, and behavioral phenotypes. The remarkably diverse phenotypes that have evolved as marine populations adapt to countless freshwater environments, combined with the ability to cross marine and freshwater forms, provide a rare vertebrate system in which genetics can be used to map genomic regions controlling evolved traits. Excellent genomic resources are now available, facilitating molecular genetic dissection of evolved changes. While mapping experiments generate lists of interesting candidate genes, functional genetic manipulations are required to test the roles of these genes. Gene regulation can be studied with transgenic reporter plasmids and BACs integrated into the genome using the Tol2 transposase system. Functions of specific candidate genes and cis-regulatory elements can be assessed by inducing targeted mutations with TALEN and CRISPR/Cas9 genome editing reagents. All methods require introducing nucleic acids into fertilized one-cell stickleback embryos, a task made challenging by the thick chorion of stickleback embryos and the relatively small and thin blastomere. Here, a detailed protocol for microinjection of nucleic acids into stickleback embryos is described for transgenic and genome editing applications to study gene expression and function, as well as techniques to assess the success of transgenesis and recover stable lines.

Transgenic manipulations and genome editing are critical for functionally testing the roles of genes and cis-regulatory elements. Here a detailed microinjection protocol for the generation of genomic modifications (including Tol2-mediated fluorescent reporter transgene constructs, TALENs, and CRISPRs) is presented for the emergent model fish, the threespine stickleback.

Mikroinjektions für Transgenese und Genome Editing in Threespine Stichlinge

The threespine stickleback fish has emerged as a powerful system to study the genetic basis of a wide variety of morphological, physiological, and ...

Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts

Clinical embryo vitrification evolved with the development of unique vitrification devices in the 21st century and with the misconception that ultra-rapid cooling in an &#34;open&#34; system (i.e., direct LN2 contact) was a necessity to optimize vitrification success. The dogma surrounding the importance of cooling rates led to unsafe practices subject to technical variation and to the creation of vitrification devices that disregarded important quality-control factors (e.g., ease of use, repeatability, reliability, labeling security, and storage safety). Understanding the quality-control flaws of other devices allowed for the development of a safe, secure, repeatable, and reliable &#181;S-VTF method aimed to minimize intra- and inter-technician variation. Equally important, it combined the availability of two existing FDA-compliant devices: 1) a 0.3-mL ionomeric resin embryo straw with internalized, dual-colored, tamper-proof labeling with repeatable weld seal potential; and 2) shortened, commonly-used, 300-&#181;m ID sterile flexipettes to directly load the embryo(s) in order to create a highly-effective global vitrification device. Like other aseptic, closed vitrification systems (e.g., High Security Vitrification (HSV), Rapid-i, and VitriSafe) effectively used in reproductive medicine, microSecure Vitrification (&#181;S-VTF) has proven that it can achieve high post-warming survival and pregnancy outcomes with its attention to simplicity, and reduced technical variation. Although the 0.3-mL embryo straw containing an internal hydrophobic plug was commercially replaced with a standard semen straw possessing cotton-polyvinyl pyrrolidone (PVP) plugs, it maintained its ionomeric resin composition to ensure weld sealing. However, the cotton plugs can wick out the fluid-embryo contents of the flexipettes upon contact. A modified &#181;S-VTF method was adapted to include an additional internal weld seal before the plug on the device loading side. The added technical step to the &#181;S-VTF procedure has not affected its successful application, as high survival rates (&#62; 95%) and pregnancy rates continue today.

MicroSecure Vitrification was developed as a non-commercial, aseptic closed vitrification device system that is compliant with FDA good manufacturing and tissue-handling practices. Due to the withdrawal of hydrophobic plugged embryo straws from the industry, the vitrification procedure was modified to include an inner seal before the standard internal cotton plug.

Modifizierte MicroSecure Vitrifikation: Eine sichere, einfache und sehr effektive Kryokonservierung Verfahren für Human Blastozysten

Clinical embryo vitrification evolved with the development of unique vitrification devices in the 21st century and with the misconception that ultra-rapid ...

Generation of Genetically Modified Mice through the Microinjection of Oocytes

The use of genetically modified mice has significantly contributed to studies on both physiological and pathological in vivo processes. The pronuclear injection of DNA expression constructs into fertilized oocytes remains the most commonly used technique to generate transgenic mice for overexpression. With the introduction of CRISPR technology for gene targeting, pronuclear injection into fertilized oocytes has been extended to the generation of both knockout and knockin mice. This work describes the preparation of DNA for injection and the generation of CRISPR guides for gene targeting, with a particular emphasis on quality control. The genotyping procedures required for the identification of potential founders are critical. Innovative genotyping strategies that take advantage of the "multiplexing" capabilities of CRISPR are presented herein. Surgical procedures are also outlined. Together, the steps of the protocol will allow for the generation of genetically modified mice and for the subsequent establishment of mouse colonies for a plethora of research fields, including immunology, neuroscience, cancer, physiology, development, and others.

The microinjection of mouse oocytes is commonly used for both classic transgenesis (i.e., the random integration of transgenes) and CRISPR-mediated gene targeting. This protocol reviews the latest developments in microinjection, with a particular emphasis on quality control and genotyping strategies.

Erzeugung von genetisch modifizierten Mäusen durch die Mikroinjektion von Oozyten

The use of genetically modified mice has significantly contributed to studies on both physiological and pathological in vivo processes. The pronuclear ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to manipulate gene expression in organoids have made limited progress in this arena. While CRISPR/Cas9 technology allows for precise genome editing of cells for organoid generation, this strategy requires extensive selection and screening by sequence analysis, which is both time-consuming and costly. Here, we provide a detailed protocol for efficient viral transduction of intestinal organoids. This approach is rapid and highly efficient, thus decreasing the time and expense inherent in CRISPR/Cas9 technology. We also present a protocol to generate frozen sections from intact organoid cultures for further analysis with immunohistochemical or immunofluorescent staining, which can be used to confirm gene expression or silencing. After successful transduction of viral vectors for gene expression or silencing is achieved, intestinal stem cell and crypt function can be rapidly assessed. Although most organoid studies employ in vitro assays, organoids can also be delivered to mice for in vivo functional analyses. Moreover, our approaches are advantageous for predicting therapeutic responses to drugs because currently available therapies generally function by modulating gene expression or protein function rather than altering the genome.

We describe step-by-step instructions to: 1) efficiently engineer intestinal organoids using magnetic nanoparticles for lenti- or retroviral transduction, and, 2) generate frozen sections from engineered organoids. This approach provides a powerful tool to efficiently alter gene expression in organoids for investigation of downstream effects.

Genetische Technik der primären Maus-Darm-Organoide mit magnetischen Nanopartikel-Transduktion virale Vektoren für gefrorene Schnitte

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is the formation of the transient organizers, the node and notochordal plate, from cells that have passed through the primitive streak. The proper formation of these signaling centers is essential for the development of the body plan and techniques to visualize them are of high interest to mouse developmental biologists. The node and notochordal plate lie on the ventral surface of gastrulating mouse embryos around embryonic day (E) 7.5 of development. The node is a cup-shaped structure whose cells possess a single slender cilium each. The proper subcellular localization and rotation of the cilia in the node pit determines left-right asymmetry. The notochordal plate cells also possess single cilia albeit shorter than those of the node cells. The notochordal plate forms the notochord which acts as an important signaling organizer for somitogenesis and neural patterning. Because the cells of the node and notochordal plate are transiently present on the surface and possess cilia, they can be visualized using scanning electron microscopy (SEM). Among other techniques used to visualize these structures at the cellular level is whole mount immunofluorescence (WMIF) using the antibodies against the proteins that are highly expressed in the node and notochordal plate. In this report, we describe our optimized protocols to perform SEM and WMIF of the node and notochordal plate in developing mouse embryos to help in the assessment of tissue shape and cellular organization in wild-type and gastrulation mutant embryos.

The node and notochordal plate are transient signaling organizers in developing mouse embryos that can be visualized using several techniques. Here, we describe in detail how to perform two of the techniques to study their structure and morphogenesis: 1) scanning electron microscopy (SEM); and 2) whole mount immunofluorescence (WMIF).

Visualisierung der Knoten und Notochordal Platte In Gastrulating Maus-Embryonen mittels Rasterelektronenmikroskopie und ganze Mount Immunfluoreszenz

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans (C. elegans), a free-living nematode, has emerged as an attractive model to study host-pathogen interactions. The presented protocol uses this model to determine the pathogenicity caused by the mitis group streptococci via the production of H2O2. The mitis group streptococci are an emerging threat that cause many human diseases such as bacteremia, endocarditis, and orbital cellulitis. Described here is a protocol to determine the survival of these worms in response to H2O2 produced by this group of pathogens. Using the gene skn-1 encoding for an oxidative stress response transcription factor, it is shown that this model is important for identifying host genes that are essential against streptococcal infection. Furthermore, it is shown that activation of the oxidative stress response can be monitored in the presence of these pathogens using a transgenic reporter worm strain, in which SKN-1 is fused to green fluorescent protein (GFP). These assays provide the opportunity to study the oxidative stress response to H2O2 derived by a biological source as opposed to exogenously added reactive oxygen species (ROS) sources.

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

The nematode Caenorhabditis elegans is an excellent model to dissect host-pathogen interactions. Described here is a protocol to infect the worm with members of the mitis group streptococci and determine activation of the oxidative stress response against H2O2 produced by this group of organisms.