Generalitat Valenciana, PROMETEOII / 2014/063; Ministerium für Gesundheit, soziale Dienste und Gleichheit. Delegation der Regierung für den nationalen Plan auf Drogen, Forschungsprojekte zur Drogenabhängigkeit, 2014I007; Ministerium für Wirtschaft und Wettbewerbsfähigkeit (MINECO), Health Institute Carlos III, Netzwerk der süchtig machende Störungen (RTA) RD12 / 0028/0005 und RD16 / 17.07.00 und der Europäischen Union, der FEDER Mittel "Una Manera de Hacer Europa" und der PSI2014-51847-R.

Alle Verfahren, die Mäuse und deren Pflege erfüllt mit nationalen, regionalen und lokalen Gesetze und Verordnungen, die gemäß Richtlinie 2010/63/EG des Europäischen Parlaments und des Rates vom 22. September 2010 über den Schutz von Tieren, die für verwendet werden wissenschaftliche Zwecke. Der Einsatz von Tieren und Pflege Ausschuss der Universität Valencia genehmigt dieses Protokolls.
(1) Materialien und Set-up für konditionierte Ort Präferenz:
<ol><li>3 Tage vor dem Test für 1 – 2 min. Mäuse zu behandeln. Die Schwanzwurzel sollten erfasst werden. Der Körper sollte wenn möglich unterstützt werden. Dies geschieht, Schmerzen und Leiden zu minimieren, beim Umgang mit einem Tier und störende Variablen, wie zum Beispiel Stress zu verhindern. Hinweis: 1 männliche Mäuse waren 60 Tage alt (junge Erwachsene) mit einem Gewicht von 35-40 g in die heutigen Experimenten beschäftigt. Arzneimittel-induzierter Wiedereinsetzung kann bei Mäusen beiderlei Geschlechts durchgeführt werden. Jedoch über Stress-induzierte Wiedereinstellung soziale Niederlage Paradigma richtet sich nur für männliche Nager wie Weibchen keine aggressive Reaktion bei den ansässigen Mäusen zu induzieren.</li>
	<li>Statt Klimaanlage verwenden Sie identische Kästen mit zwei identischen Fächern (30,7 cm langen × 31,5 cm Breite × 34,5 cm hoch) durch eine kleinere zentrale Grauzone (13,8 lange × 31,5 cm Breite × 34,5 hohe) getrennt. Hinweis: Fächer haben unterschiedliche Texturen und Wandfarben (einen glatten Boden im schwarzen Fach und einen rauen Boden in der weißen). Jedes Fach der CPP-Box enthält vier Infrarot-Lichtstrahlen und sechs in der zentralen Fach. Dies ermöglicht die Aufnahme von Kreuzungen zwischen Fächern und die Position des Tieres.</li>
	<li>Legen Sie oben die Raumbeleuchtung (off oder gesenkt) jeden Tag. Verwenden Sie rote Ampeln (empfohlen), wie Tiere es nicht wahr nehmen und es ist für den Experimentator (ca. 40 Lux bei 1 m über dem Boden gemessen) gedämpft.</li>
	<li>Richten Sie das Programm registrieren 15 min für Pre- und Post-Klimaanlage test (siehe die Tabelle der Materialien für Software) (Abbildung 2)</li>
	<li>Bereiten Sie die Kokain-Lösung für das ganze Experiment benötigt. Auflösen von Kokain-Hydrochlorid in 0,9 % NaCl (Kochsalzlösung) in einem Volumen von 0,1 mL/10 g Körpergewicht. Vortex-Mischung und Store bei 4 ° C am Ende des Tages. Hinweis: Kokain Konzentrationen variieren je nach Zweck der Studie. Wenn das Ziel ist es, die Eingangssignale Dosen von Kokain zu bewerten, könnte eine Konzentration von 1 mg/kg verwendet werden, das heißt unwirksam bei Kontrolltieren, wie in früheren Studien24,35zu sehen. Wenn eine wirksame Dosis der Zweck ist, kann eine Konzentration von 6 mg/kg, gewählt, die ist wirksam, aber nicht dazu veranlassen, Wiedereinstellung24, oder eine 25 mg/kg-Konzentration, die effektive und Wiedereinstellung der Präferenz19induziert.</li>
	<li>Testen Sie die Tiere während ihrer dunklen Phase und verwenden Sie das gleiche Feld für jedes Tier über Tage hinweg.</li>
	<li>Bringen Sie Tiere täglich zu den Prüfraum in ihren Käfigen zu Hause und lassen sie ungestört für 15 min als kurzer Gewöhnung an all die Test-Geräusche.</li>
</ol>2. test
<ol><li>Erwerb Hinweis: Das Verfahren der Ort Konditionierung, unvoreingenommene in Bezug auf die erste spontane Präferenz besteht aus drei Phasen: Pre-Klimaanlage, Klimaanlage und Post-Klimaanlage (Abbildung 1).<ol>
<li>
Vorbehandlung (Pre-C) (3 Tage) (Abbildung 2, Abbildung 3 Abbildung 4( ) Hinweis: Hier wird der neutrale Wert der Fächer im Feld CPP ausgewertet. Messen Sie die Zeit in jedem Fach und später damit verbracht in dasselbe Fach in der Post-Klimaanlage Test zu vergleichen.<ol>
<li>Bringen Sie die Tiere in den Testraum und lassen für 15 min gewöhnt.</li>
			<li>Überprüfen Sie, dass Guillotines aus dem Käfig entfernt werden.</li>
			<li>Richten Sie den Computer und das Programm. Geben Sie Tier ID ein und drücken Sie den Befehl "Trial" und "Start" (Abbildung 2).</li>
			<li>Platzieren Sie den Mauszeiger sanft in die mittlere Kammer (graue Fach) und verlassen Sie den Prüfraum mit minimalem Rauschen.</li>
			<li>Bringen Sie alle Tiere zurück in ihre Heimat Käfige und sichern Sie Ihre Daten, wenn der Prozess abgeschlossen ist.</li>
			<li>Mäuse auf beide Fächer des Apparates für 15 min zugreifen können (900 s) pro Tag an 3 aufeinanderfolgenden Tagen.</li>
			<li>Am 3. Tag notieren Sie sich die Zeit in jedem Fach über einen Zeitraum von 900 s, und speichern Sie sie für die Zuordnung der Fächer in der nächsten Phase (Abbildung 3).</li>
			<li>Weisen Sie die Hälfte der Tiere in jeder Gruppe, das Medikament oder das Fahrzeug in ein Fach (z.B.schwarz) und die andere Hälfte in das andere Fach (z.B.weiß) (Abbildung 4) zu empfangen. Hinweis: Die endgültige Verteilung der Tiere muss sicherstellen, dass die Hälfte der Tiere zunächst bevorzugte Fach und die andere Hälfte in das Fach nicht bevorzugten zugeordnet sind. Darüber hinaus erhielt die Hälfte der Tiere das Medikament in ein Fach (z. B. eine schwarze) und die andere Hälfte in die andere (in diesem Fall, weißen).</li>
			<li>Balance-Resultate in der Gruppe in beiden Fächern sowie in Gruppen (Test gruppenunterschiede mit einer Varianzanalyse (ANOVA)). Als ungefähre Orientierung sollte Werte um 360-370 s in der Pre-C-Test (Abbildung 4). Hinweis: keine signifikanten Unterschiede sollten zwischen den Zeitaufwand in der Droge gepaart und Fahrzeug gepaart Fächer während der Pre-C-Test erkannt werden.</li>
			<li>Schließen Sie Tiere, die eine starke Abneigung oder Vorliebe für jedes Fach aufweisen. Halte Abneigung als weniger Zeit als 33 % im Abteil, und bevorzugt zu berücksichtigen, wenn das Tier mehr als 67 % der Gesamtzeit in diesem Fach ausgegeben.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
(4 Tage) Klimaanlage (Abbildung 5( )
		<ol>
<li>Wiegen Sie die Tiere und verwenden Sie diese Gewichte für Kokain Dosen während der Aufbereitung.</li>
			<li>Bereiten Sie Spritzen mit Kokain oder Kochsalzlösung basierend auf Körpergewicht.</li>
			<li>Eine Maus zu einem Zeitpunkt zu injizieren, intraperitoneal (Ip) und legen Sie es sofort sanft in den zugewiesenen schwarzen oder weißen Innenraum ihrer Box.</li>
			<li>Injizieren Sie nach einem Intervall von 4 h die Medikamentendosis unmittelbar vor die Maus auf das Medikament gepaart Fach für 30 min (Abbildung 5) beschränkt ist.</li>
			<li>Wechseln Sie diese Prozedur jeden Tag beginnend mit Kokain an den Tagen 1 und 3 und saline an den Tagen 2 und 4.</li>
			<li>Kontrollieren Sie die Entbindung in beiden Fällen erfolgt durch die Guillotine Tür, die trennt die beiden Fächer macht den zentralen Bereich unzugänglich. Hinweis: In dieser Phase gibt es keine Notwendigkeit, das PC-Programm einrichten.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Post-Klimaanlage (Post-C) (1 Tag)
		<ol>
<li>Bringen Sie die Tiere in den Testraum und lassen für 15 min gewöhnt.</li>
			<li>Entfernen Sie die Guillotine Tür trennt die beiden Fächer.</li>
			<li>Richten Sie den Computer und das Programm. Geben Sie Tier IDs und drücken Sie den Befehl "Start".</li>
			<li>Notieren Sie die Verweildauer der unbehandelten Mäuse in jedem Fach einen Zeitraum 900 s Beobachtung.</li>
			<li>Wenn der Prozess abgeschlossen ist, bringen Sie die Tiere zurück in ihre Heimat Käfige und sichern Sie Ihre Daten.</li>
			<li>Der Auffassung, dass das Medikament Ort Präferenz induziert hat, wenn die Verweildauer in der Droge gepaart Fach während der Post-C deutlich größer als in der Pre-C-Test ist. Sollten Sie das Gegenteil der Fall ist, eine Abneigung gegen das Fach Medikament gepaart.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Vom Aussterben bedroht
	<ol>
<li>Führen Sie eine wöchentliche Aussterben-Sitzung in allen Gruppen/Tiere, die eine Vorliebe für das Medikament gepaart Fach entwickelt.</li>
		<li>Legen Sie das Tier in der Vorrichtung (ohne Guillotines) für 15 min (identisch mit der Pre- und Post-C-Tests) (Abbildung 1). Hinweis: Wenn die Dosis in beschäftigt die CPP ist hoch (25 mg/kg), 1 vom Aussterben bedroht-Sitzung pro Woche durchführen. Wenn eine Eingangssignale Dosis (1 mg/kg) ist, führen Sie 2 Aussterben Sitzungen pro Woche (z.B. Montag und Donnerstag).</li>
		<li>Betrachten Sie die Präferenz ausgelöscht, wenn Daten aus dem Aussterben Test keine Unterschiede in Bezug auf die Pre-C-Test zeigen, aber sie Unterschiede in Bezug auf die Post-C-Test zeigen.</li>
		<li>Wiederholen Sie den Test 24 h später um die Löschung zu bestätigen.</li>
	</ol></li>
	<li>Wiedereinführung der CPP
	<ol>
<li>
Priming-induzierte Wiedereinstellung
		<ol>
<li>Bewerten Sie die Auswirkungen einer Grundierung Dosis Kokain 24 h nach der Bestätigung vom Aussterben bedroht. Hinweis: Priming-Dosen sind die Hälfte der vorherigen Dosis, die das Tier während der Aufbereitung erhalten hat. Die Wiedereinstellung Test durchläuft das gleiche Protokoll wie Pre-C und Post-C-Tests, mit der Ausnahme, dass Tiere die Dosis von Kokain in einem nicht-Kontingent erhalten Platz 15 min vor dem Test. Die Wirksamkeit des Medikaments Priming bei der Induktion von Wiedereinsetzung kann gesteigert werden, nach wiederholter Aussterben/Wiedereinsetzung23, Erfahrungen, obwohl die Reihenfolge der Dosen nicht scheint, um eine Rolle in den Ergebnissen36erhalten.</li>
			<li>Bringen die Tiere in einem anderen Raum aus den Prüfraum (nicht-Kontingent Platz) (Abbildung 6).</li>
			<li>Injizieren sie mit Hälfte der vorherigen Dosis Kokain (wärez.B., wenn Tiere mit einer Grundierung-Dosis 25 mg/kg Kokain konditioniert wurden 12,5 mg/kg).</li>
			<li>Bringen sie zurück zu ihrer Vivarium für 15 Minuten.</li>
			<li>Nehmen sie in den Prüfraum und legen Sie die Tiere in den Apparat sofort (ohne die Guillotine Türen trennen die Fächer) für 15 min (identisch mit der Pre- und Post-C-Tests).</li>
			<li>Betrachten Sie die Differenz in Sekunden die Zeit in das Medikament gepaart Fach während der letzten Sitzung vom Aussterben bedroht und die Wiedereinsetzung-Test als Maß für den Grad der Wiedereinstellung der Voreinstellung durch das Medikament verursacht.</li>
			<li>Wiederholen Sie vom Aussterben bedroht-Wiedereinstellung jedesmal mit abnehmender Dosen bis es bestätigt wird, unwirksam. Hinweis: Eine Kochsalzlösung Einspritzregelung kann verwendet werden, um die Kapazität von Kokain Priming (und nicht der Injektion selbst) zu steuern, Wiedereinstellung zu induzieren.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Stress-induzierte Wiedereinstellung
		<ol>
<li>Bewerten Sie die Auswirkungen der eine Stress-induzierte Wiedereinsetzung 24 h nach der Bestätigung vom Aussterben bedroht Hinweis: Wiedereinsetzung Tests sind identisch mit denen in Post-C (freie Gehfähigkeit für 15 min), durchgeführt, mit der Ausnahme, dass Tiere 15 min getestet werden, nachdem die soziale Niederlage in eine agonistische auftreten (Abbildung 6)</li>
			<li>Nehmen Sie die Tiere in einen anderen Raum aus der CPP-Zimmer.</li>
			<li>Platzieren Sie die experimentelle Maus mit einer aggressiven Gegner Sex gleich Alter und Körpergewicht in den Kunststoffkäfig (Abbildung 6) abgestimmt. Hinweis: Die agonistische Begegnung besteht aus einem 10 min. Test in einem neutralen transparent Kunststoffkäfig (23x13.5x13cm) mit einer Niederlage für die experimentelle Maus. Zur Vorbereitung des aggressiven Gegners zuerst isolieren Sie verschiedene Tiere, die in Alter und Körpergewicht als die experimentellen Mäuse für 3 Wochen zu entsprechen. Trainieren sie kämpfen Erfahrungen sammeln und testen, um hohe aggressives territoriale Verhalten haben. Um aggressive Artgenossen zu erhalten, Mäuse müssen mindestens 3 Wochen lang isoliert und dann ausgebildet in aggressiven Verhaltensweisen angreifen. Tiere werden in einer neutralen Umgebung, vor denen sie paarweise ausgebildet. Wir lassen Sie sie beißen die Gegner 2 oder 3 Mal und sie aus dem Käfig immer das Training beenden, bevor einer der beiden Mäuse Unterwerfung, zeigt so, dass die Erfahrung der Begegnung aggressives Verhalten verstärkt. Nach Aggression (Bedrohung und Angriff der aggressiven Artgenosse) leiden, sollten experimentellen Mäuse Vermeidung/fliehen und Defensive/submissive Verhalten präsentieren. Das Kriterium besteht darin, eine bestimmte Haltung der Niederlage, gekennzeichnet durch eine aufrechte unterwürfige Position, limp Vorderpfoten nach oben abgewinkelten Kopf und Ohren (Abbildung 6) eingefahren. Nach Burke Et Al., 2016, man bedenkt, dass die sozialen Begegnung früher beendet wird, wenn der Eindringling eine devote gleichgültige Haltung zeigt > 8 s oder 13 Angriff Bisse aufgetreten ist. Eine andere Möglichkeit zum Bildschirm Tiere ohne erhebliche Verletzungsgefahr wäre das Tier in einem Netz-Gehäuse mit einem Loch, nicht groß genug, um jedem Tier übergeben Tempo.  Aggression konnte nachgewiesen werden, ohne Unterwerfung Tiere, aggressives Verhalten zu lenken.  Wenn ein Tier eine Verletzung mit einer Wunde 1 cm im Durchmesser und/oder direkte Einwirkung des Muskels trägt, ist aus der Studie ausgeschlossen und sollte eingeschläfert werden.</li>
			<li>Nehmen Sie nach 10 min der agonistischen Begegnung die Mäuse in den Testraum und die Tiere in der CPP-Apparat sofort (ohne die Guillotine Türen trennen die Fächer) für 15 min (identisch mit der Pre- und Post-C-Tests).</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>3. statistische Analyse
Hinweis: Optimale Stichprobengröße sollte mindestens 15 Tiere pro Gruppe.
<ol><li>Analysieren der Zwischenzeit verbrachte in dem Medikament gepaart Fach der Gruppe durch eine gemischte ANOVA mit einem zwischen Variablen, Behandlung, mit zwei Ebenen (Kontrollgruppe, Versuchsgruppe, Beispiel für zwei Gruppen ist in Abbildung 7 c), und in Variable-Tage, mit 2 Ebenen (Pre-C und Post-C). Hinweis: In der Kontrollgruppe Tiere erhalten das Medikament aber haben keine Umwelt Manipulationen. Auf der anderen Seite sind Tiere in der experimentellen Gruppe unterschiedliche Umweltbedingungen ausgesetzt. Vergleichen Sie die Zeit in der Droge gepaart Fach am Post-C Tag mit Respekt die Pre-C zu testen, um festzustellen, ob es gibt keine signifikanten Unterschiede in der Empfindlichkeit auf das Medikament.</li>
	<li>Darüber hinaus führen Sie Bonferroni Post-hoc-Analysen, um entweder die wesentlichen Punkte zu überprüfen.</li>
	<li>Analysieren von Daten im Zusammenhang mit vom Aussterben bedroht und Wiedereinstellung Werte in den Gruppen, dass entwickelten Präferenz durch Zugewinn t-Tests weiterhin mit dem Aussterben-Wiedereinsetzung-Verfahren im Laufe des Experiments, aber im letzten Moment, sie zu analysieren mit einer ANOVA mit einem in Variablen (Tage) mit der Anzahl der Ebenen je nach jeder Gruppe. Hinweis: Wenn die Anzahl der Vergleiche erhöht wird, stieg die Zahl derjenigen, die erheblich sein wird durch Zufall auch. Als solche korrigieren"um zu vermeiden Fehlalarme (Typ-1-Fehler), wir" den p-Wert, wodurch des Tests eher konservativen mit der Bonferroni-Korrektur für mehrere t-Tests. Für die Wiedereinstellung Test sollte der Vergleich zwischen der Wiedereinstellung-Test und der letzte vom Aussterben bedroht-Test erfolgen. Daher besteht keine Notwendigkeit zur Korrektur.</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Der entscheidende Punkt der Droge Suchtforschung ist die Entwicklung von Behandlungen, die Begierde zu verringern und folglich reduzieren die Anfälligkeit für Rückfälle. Dank der Wiedereinstellung Modell des CPP Paradigmas ist es möglich, Untersuchung des Einflusses von verschiedenen prozeduralen und Umweltfaktoren, die Rückfall, modulieren die Priorität der zukünftigen Forschung hat. Es gibt einige wichtige Punkte zu beachten, wie das CPP-Paradigma ist ein Test, der sehr empfindlich auf Umwelteinflüsse reagiert...

Das Paradigma konditioniert Ort Präferenz (CPP) bietet eine einfache Möglichkeit zur Beurteilung des konditionierten Lohn induziert durch vielfältige Reize1,2, und wurde weitgehend verwendet, um die konditionierten lohnende Suchtgifte3 untersuchen . Es basiert auf Pawlowsche Konditionierung, Auswertung der motivationalen Wertes von Medikament verbundenen ökologischen Cues für die Aufrechterhaltung der Suchtverhalten4. In diesem Modell ökologische Hinweise sekundäre begehrliche Eigenschaften (konditionierte lohnende Effekte) zu erwerben, wenn gepaart mit einem primären Verstärker3. Beispielsweise ein zunächst neutraler Ort (z. B. die Farbe von einem Abteil in der CPP-Käfig) paart sich mit speziellen Wirkungen eines Medikaments von Missbrauch während einiger Sitzungen5, Klimaanlage, während ein weiteres Fach mit der Injektion eines Fahrzeugs verbunden ist. Klimaanlage, wenn das Tier mehr Zeit in das Fach, die zuvor mit dem Medikament verbundenen verbringt folgend wird davon ausgegangen, dass CPP3entwickelt hat. Die Einrichtung der Präferenz ist erreicht, wenn das Tier die Umwelt Cues, verbunden mit der Droge, die die primäre Verstärker ist einen positiven Wert verleiht. Infolgedessen werden Tiere Droge-suchenden Verhaltensreaktionen in Reaktion auf diese kontextuellen Signale6durchführen. Die CPP-Modell ermöglicht die Auswertung der lohnendsten Eigenschaften der Eingangssignale Dosen des Medikaments, die anzeigt, ob Tiere in einem bestimmten Zustand (z. B.zuvor von sozialen Niederlage erlitt) sind anfällig und empfindlich auf Dosen, die können nicht wirksam bei der naiven Tiere7.
CPP-Modell hat auch zur Auslöschung/Wiedereinsetzung als Tiermodell Rückfall3, zu studieren, das ist das Ziel dieses Protokolls zu bewerten. Es gibt drei verschiedene Phasen: Erwerb, vom Aussterben bedroht und Wiedereinstellung (Abbildung 1). In der CPP Wiedereinstellung Modell Tiere erwerben zunächst die CPP für ein Medikament gepaart, und dann führen sie mehrere vom Aussterben bedroht-Sitzungen. Wir definieren vom Aussterben bedroht, wie der Moment, in dem das Tier reduziert seine Verhaltensreaktionen der Annäherung an eine konditionierte lohnende Stimulus, der wurde (z. B.das Medikament entfernt)8. Während der Sitzungen vom Aussterben bedroht erkunden Tiere die Fächer in der Abwesenheit des Medikaments, so dass die erworbenen Präferenz allmählich abgeschwächte9ist. Ein wichtiges Thema zu berücksichtigen ist, dass die Verhaltensänderungen, die das Tier während vom Aussterben bedroht (die fortschreitende Abnahme in den Zeitaufwand in der Droge gepaart Fach) zeigt durch neue Lernprozesse sein kann, die mit der vorherigen erlernte Reaktion konkurrieren, oder zu einem Rückgang der interne motivationale Zustand des Thema3fällig. Schließlich wäre die Wiederherstellung der Ort-Voreinstellung durch den Kontext oder Medikament Hinweise unseres Modells der Wiedereinstellung1.
Verwaltung eine Grundierung Injektion des Medikaments verbunden kann die Präferenz, wiedereinsetzen, die eine Wiederherstellung der Annäherung an die kontextuellen Signale gilt. Medikament Priming Wiedereinstellung erfolgt durch die anhaltende Erinnerung an die angenehmen Effekte der Droge, die induzierte Begierde und motiviert Tiere, die Umwelt Cues im Zusammenhang mit Belohnung zu suchen.
Einige Vorteile des CPP Wiedereinstellung Modells sind, dass das Verfahren ist nicht-invasiv (im Gegensatz zu Selbstverwaltung, die Operation erfordert), kostengünstig und einfach. Darüber hinaus hat dieses Modell eine gutes Kriterium Gültigkeit, wie es gut imitiert, was tritt bei Menschen10,11, induzierende Wiedereinstellung mit reizen, die Rückfall, wie Re-Exposition gegenüber der Droge12,13 auslösen oder betonen Sie14.
Es gibt andere Techniken wie das Aussterben – Wiedereinsetzung Modell der intravenöse Selbstverwaltung. Hier drücken Sie Tiere einen Hebel, um das Medikament selbst verabreichen, das die Bewertung der operanten Reaktion des Tieres, Compulsivity und Motivation14,15,16erlaubt. Der größte Vorteil der KPP über Selbstverwaltung Verfahren ist, dass CPP Wiedereinsetzung gilt entsprechend die Reaktivierung der Anreiz-motivierende Wert der Kontext Stimuli gepaart mit der Droge, bestehend aus dem Wiedererscheinen des Ansatzes Verhalten, die Kontext-17. Darüber hinaus können nicht-medikamentöse Reize wie Stress, auch Wiedereinstellung18,19induzieren. Zum Beispiel beschrieben eine Selbstverwaltung Studie keine Auswirkungen auf die Wiedereinführung der Heroin-Aufnahme bei Ratten nach einem Fuß Schock oder Zurückhaltung betonen20. Autoren diskutiert, dass es nicht erfolgreich war, weil diese Stressoren außerhalb der Selbstverwaltung Kammer in einem anderen Zusammenhang getestet wurden. Im Gegensatz dazu Wenn Sie die CPP-Modell der Wiedereinstellung zu verwenden, gab es eine klare Wiedereinsetzung in den vorigen Morphin-induzierte CPP nach der Verwendung der gleichen Stressoren und in einem anderen Kontext auf, der KPP und zu unterschiedlichen Zeiten angewendet (0 und 15 min nach stress Exposition)18 .
Mehrere Studien in der Literatur haben verschiedene Arten von Drogen- und Stress-induzierte Wiedereinstellung gezeigt. Auf der einen Seite wurde bei Ratten und Mäusen mit Morphin5,21,22,23, Kokain24,25, Amphetamin26Medikamenten-induzierten Wiedereinstellung berichtet, 27, Ethanol28,29und 3,4-Methylendioxymethamphetamin (MDMA)30. Auf der anderen Seite möglicherweise Exposition gegenüber betonen ein entscheidender Faktor bei Anfälligkeit für Drogenmissbrauch. Stress ist bekanntermaßen die lohnenden Effekte von Drogen7,31,32 zu erhöhen und ihre Rolle in der Rückfall ist gut etablierte33,34. Niederlage in sozialen Interaktionen mit ein Artgenosse werden z. B. Morphium und Kokain CPP18,19wiederhergestellt. Darüber hinaus Tieren wiederholt soziale Niederlage sind anfälliger für die konditionierten lohnende Effekte der Eingangssignale Dosen von Kokain, und die Präferenz mit sehr niedrigen Dosen von Kokain7wieder.
Anwendung des Modells CPP Wiedereinstellung ist eine nützliche und sensible Art, Anfälligkeit für Rückfälle bei Tieren zu bewerten, und ermöglicht die Bewertung der verschiedenen feinstofflichen Umwelt Manipulationen, die Hauptauslöser sind, die menschliche Rückfall, wie z. B. bedrohen Drogen oder Stress-induzierte Wiedereinstellung.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>MONPRE 2Z software</td>
			<td>CIBERTEC S.A., Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Identical Plexiglas boxes with two equal sized compartments separated by a grey central area.</td>
			<td>CIBERTEC S.A., Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td>The compartments have different colored walls (black vs white) and distinct floor textures (fine grid in the black compartment and wide grid in the white one). All boxes are equipped with four infrared light beams in each compartment of the box and six in the central area which allow the recording of the position of the animal and its crossings from one compartment to the other.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cocaine hydrochloride</td>
			<td>Laboratorios Alcaliber S.A., Madrid, Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animals: mice of the OF1 outbred strain</td>
			<td>Charles River, Barcelona Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Male mice who arrive to the laboratory on PND 42 and on PND 60 perform the CPP test. These animals are specially indicated for social defeat and aggression models.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Diet- Teklad Global Diet 2014</td>
			<td>Supplied by Harlan Laboratories Models, S. L. (Barcelona, Spain)</td>
			<td></td>
			<td>13 kcal % fat, 67 kcal % carbohydrates and 20% kcal protein; 2.9 kcal/g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High fat diet TD.06415</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>45 kcal % fat, 36 kcal % carbohydrates and 19% kcal protein; 4.6 kcal/g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reinstatement of drug-seeking in mice using the conditioned place preference paradigm

Dieses Protokoll beschreibt bedingt Platz Präferenz (CPP) als Modell für einen Rückfall in die Drogensucht. In diesem Modell Tiere sind zunächst darauf trainiert, klimatisierten Ort bevorzugt in einem Medikament gepaart Fach erwerben und nach dem Post-Klimaanlage-Test führen sie mehrere Sitzungen, um die etablierten Präferenz zu löschen. Die CPP erlaubt die Auswertung der konditionierten lohnende Effekte von Drogen im Zusammenhang mit ökologischen Cues. Dann kann erloschene CPP robust durch die nicht-Kontingent-Verwaltung einer Grundierung Dosis des Medikaments, und durch die Einwirkung von belastenden Reize wieder eingesetzt werden. Beide Methoden werden hier erklärt. Wenn das Tier die Verhaltensreaktion reinitiates, gilt eine Wiedereinsetzung der konditionierten Belohnung stattgefunden haben.
Die wichtigsten Vorteile dieses Protokolls sind, dass es nicht-invasive, kostengünstig und einfach mit guten Validitätskriterien ist. Darüber hinaus ermöglicht es das Studium der verschiedenen ökologischen Manipulationen, wie Stress oder Ernährung, die Rückfall in Drogen sucht Verhalten modulieren kann. Eine Einschränkung ist jedoch, dass wenn der Forscher die Motivation und primäre verstärkende Wirkung des Medikaments zu erkunden soll, mit Selbstverwaltung Verfahren ergänzt werden sollte, da sie operante Reaktionen der Tiere beteiligen.

Erstens sind repräsentative Ergebnisse aus der Grundierung und Stress-induzierte Wiedereinsetzung in Abbildung 7 dargestellt mit Hilfe von Erwachsenen OF1 männlichen Mäusen.
Die Daten in Abbildung 7-b für Zeit verbracht in der Droge gepaart Kompartiments in der Pre- und Post-C Test wurden mit einer Messwiederholung ANOVA mit einer innerhalb der Them...

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Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

Dieses Protokoll beschreibt bedingt Platz Präferenz (CPP) als Modell für einen Rückfall. Dieses Verfahren ermöglicht die Messung von Rückfällen bei Versuchstieren, unter Berücksichtigung der Auswirkungen der Droge verbundenen ökologischen Cues als Begierde und Rückfall in Verzicht Süchtige steht derzeit im Mittelpunkt der Drogenmissbrauch Behandlungsprogramme.

Wiedereinführung der Drug-seeking bei Mäusen mit dem klimatisierten Ort Präferenz Paradigma

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

reinstatement-drug-seeking-mice-using-conditioned-place-preference

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Behavior

Unit 1

Pharmacotherapy of Depression and Anxiety Disorders

SCIENTISTS IN ACTION

11.3K Aufrufe.  Universitat de València. Dieses Protokoll beschreibt bedingt Platz Präferenz (CPP) als Modell für einen Rückfall. Dieses Verfahren ermöglicht die Messung von Rückfällen bei Versuchstieren, unter Berücksichtigung der Auswirkungen der Droge verbundenen ökologischen Cues als Begierde und Rückfall in Verzicht Süchtige steht derzeit im Mittelpunkt der Drogenmissbrauch Behandlungsprogramme.

Serie: Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

The Crossmodal Congruency Task as a Means to Obtain an Objective Behavioral Measure in the Rubber Hand Illusion Paradigm

The rubber hand illusion (RHI) is a popular experimental paradigm. Participants view touch on an artificial rubber hand while the participants' own hidden hand is touched. If the viewed and felt touches are given at the same time then this is sufficient to induce the compelling experience that the rubber hand is one's own hand. The RHI can be used to investigate exactly how the brain constructs distinct body representations for one's own body. Such representations are crucial for successful interactions with the external world. To obtain a subjective measure of the RHI, researchers typically ask participants to rate statements such as "I felt as if the rubber hand were my hand". Here we demonstrate how the crossmodal congruency task can be used to obtain an objective behavioral measure within this paradigm.
The variant of the crossmodal congruency task we employ involves the presentation of tactile targets and visual distractors. Targets and distractors are spatially congruent (i.e. same finger) on some trials and incongruent (i.e. different finger) on others. The difference in performance between incongruent and congruent trials - the crossmodal congruency effect (CCE) - indexes multisensory interactions. Importantly, the CCE is modulated both by viewing a hand as well as the synchrony of viewed and felt touch which are both crucial factors for the RHI.
The use of the crossmodal congruency task within the RHI paradigm has several advantages. It is a simple behavioral measure which can be repeated many times and which can be obtained during the illusion while participants view the artificial hand. Furthermore, this measure is not susceptible to observer and experimenter biases. The combination of the RHI paradigm with the crossmodal congruency task allows in particular for the investigation of multisensory processes which are critical for modulations of body representations as in the RHI.

We demonstrate how an objective measure can be employed in the widely employed rubber hand illusion paradigm. This measure is obtained by modifying the well-established crossmodal congruency task. This task allows the investigation of multisensory processes which are critical for modulations of body representations as in the rubber hand illusion.

Die Kongruenz Crossmodale Aufgabe als ein Mittel zum Ziel Behavioral Messen in der Rubber Hand Illusion Paradigm erhalten

The rubber hand illusion (RHI) is a popular experimental paradigm. Participants view touch on an artificial rubber hand while the participants' own hidden ...

Forschung

Verhalten

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes of interest allows for enhanced temporally- and regionally-specific control of gene deletion, compared to existing methods. While conditional deletion can also be achieved by mating mice that express Cre recombinase under the control of specific gene promoters with mice carrying a floxed gene, stereotaxic microinjection allows for targeting of discrete brain areas at experimenter-determined time points of interest. In the context of cocaine conditioned place preference, and other cocaine behavioral paradigms such as self-administration or psychomotor sensitization that can involve withdrawal, extinction and/or reinstatement phases, this technique is particularly useful in exploring the unique contribution of target genes to these distinct phases of behavioral models of cocaine-induced plasticity. Specifically, this technique allows for selective ablation of target genes during discrete phases of a behavior to test their contribution to the behavior across time. Ultimately, this understanding allows for more targeted therapeutics that are best able to address the most potent risk factors that present themselves during each phase of addictive behavior.

This article describes how to microinject viral vectors into mouse brain and then test in a conditioned place preference paradigm that includes an acquisition, extinction and reinstatement phase.

Stereotaktische Mikroinjektion von viralen Vektoren ausdrücken Cre-Rekombinase, um die Rolle der Zielgene in Cocaine konditionierte Platzpräferenz Studieren

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to drugs of abuse make lasting alterations in the brain function of vulnerable individuals, and these persistent alterations likely serve to maintain the maladaptive drug seeking and taking behaviors characteristic of addiction/dependence2. In rodents, reward experience and contextual associations are frequently measured using the conditioned place preference assay, or CPP, wherein preference for a previously drug-paired context is measured. Behavioral sensitization, on the other hand, is an increase in a drug-induced behavior that develops progressively over repeated exposures. Since sensitized behaviors can often be measured after several months of drug abstinence, depending on the dose and length of initial exposure, they are considered observable correlates of lasting drug-induced plasticity. Researchers have found these assays useful in determining the neurobiological substrates mediating aspects of addiction as well as assessing the potential of different interventions in disrupting these behaviors. This manuscript describes basic, effective protocols for mouse CPP and locomotor behavioral sensitization to cocaine.

This protocol is intended to enable researchers to conduct experiments designed to test these aspects of addiction using the conditioned place preference and locomotor behavioral sensitization assays.

Bewertung der Kokain-induzierte Behavioral Sensibilisierung und konditionierten Platzpräferenz bei Mäusen

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Place and Response Learning in the Open-field Tower Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for examining how rats learn to use a place- or response-learning to successfully navigate in an open-field arena. Additionally, this protocol describes how the OFTM differs from other behavioral maze paradigms that are commonly used to study spatial learning in rodents. The OFTM described in this article was adapted from the one previously described by Cole, Clipperton, and Walt (2007). Specifically, the OFTM was created to test spatial learning in rodents without the experimenter having to consider how &#8220;stress&#8221; might play a role as a confounding variable. Experiments have shown that stress-alone can significantly affect cognitive function1. The representative results section contains data from an experiment that used the OFTM to examine the effects of estradiol treatment on place- and response-learning in adult female Sprague Dawley rats2. Future studies will be designed to examine the role of the hippocampus and striatum in place- and response-learning in the OFTM.

The Open-field Tower Maze (OFTM) is a maze created to study the behavioral and neural mechanisms of spatial learning (e.g., place- or response-learning) in rats. This maze is especially useful for experimenters who want to use a non-stressful maze paradigm to investigate spatial learning in their research.

Zeigen and Response Learning in der Open-field-Turm Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for ...

Examining Recall Memory in Infancy and Early Childhood Using the Elicited Imitation Paradigm

The ability to recall the past allows us to report on details of previous experiences, from the everyday to the significant. Because recall memory is commonly assessed using verbal report paradigms in adults, studying the development of this ability in preverbal infants and children proved challenging. Over the past 30 years, researchers have developed a non-verbal means of assessing recall memory known as the elicited or deferred imitation paradigm. In one variant of the procedure, participants are presented with novel three-dimensional stimuli for a brief baseline period before a researcher demonstrates a series of actions that culminate in an end- or goal-state. The participant is allowed to imitate the demonstrated actions immediately, after a delay, or both. Recall performance is then compared to baseline or to performance on novel control sequences presented at the same session; memory can be assessed for the individual target actions and the order in which they were completed. This procedure is an accepted analogue to the verbal report techniques used with adults, and it has served to establish a solid foundation of the nature of recall memory in infancy and early childhood. In addition, the elicited or deferred imitation procedure has been modified and adapted to answer questions relevant to other aspects of cognitive functioning. The broad utility and application of imitation paradigms is discussed, along with limitations of the approach and directions for future research.

The elicited imitation procedure was established to examine the development of recall memory in infancy and early childhood. This procedure has been widely used to establish a solid foundation of the nature of recall memory in infancy and early childhood.

Untersuchen Recall Memory im Säuglings- und Kleinkind Mit dem elizitierte Imitation Paradigm

The ability to recall the past allows us to report on details of previous experiences, from the everyday to the significant. Because recall memory is ...

Using Eye Movements Recorded in the Visual World Paradigm to Explore the Online Processing of Spoken Language

In a typical eye tracking study using the visual world paradigm, participants' eye movements to objects or pictures in the visual workspace are recorded via an eye tracker as the participant produces or comprehends a spoken language describing the concurrent visual world. This paradigm has high versatility, as it can be used in a wide range of populations, including those who cannot read and/or who cannot overtly give their behavioral responses, such as preliterate children, elderly adults, and patients. More importantly, the paradigm is extremely sensitive to fine grained manipulations of the speech signal, and it can be used to study the online processing of most topics in language comprehension at multiple levels, such as the fine grained acoustic phonetic features, the properties of words, and the linguistic structures. The protocol described in this article illustrates how a typical visual world eye tracking study is conducted, with an example showing how the online processing of some semantically complex statements can be explored with the visual world paradigm.

The visual world paradigm monitors participants' eye movements in the visual workspace as they are listening to or speaking a spoken language. This paradigm can be used to investigate the online processing of a wide range of psycholinguistic questions, including semantically complex statements, such as disjunctive statements.

Verwendung von Augenbewegungen aufgezeichnet in der visuellen Welt Paradigma, die Online-Verarbeitung von gesprochener Sprache zu erkunden

In a typical eye tracking study using the visual world paradigm, participants' eye movements to objects or pictures in the visual workspace are recorded ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

Eine konditionierte Ort Präferenz Protokoll zur Messung der Inkubation des Verlangens bei Ratten

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Using the Visual World Paradigm to Study Sentence Comprehension in Mandarin-Speaking Children with Autism

Sentence comprehension relies on the ability to rapidly integrate different types of linguistic and non-linguistic information. However, there is currently a paucity of research exploring how preschool children with autism understand sentences using different types of cues. The mechanisms underlying sentence comprehension remains largely unclear. The present study presents a protocol to examine the sentence comprehension abilities of preschool children with autism. More specifically, a visual world paradigm of eye-tracking is used to explore the moment-to-moment sentence comprehension in the children. The paradigm has multiple advantages. First, it is sensitive to the time course of sentence comprehension and thus can provide rich information about how sentence comprehension unfolds over time. Second, it requires minimal task and communication demands, so it is ideal for testing children with autism. To further minimize the computational burden of children, the present study measures eye movements that arise as automatic responses to linguistic input rather than measuring eye movements that accompany conscious responses to spoken instructions.

We present a protocol to examine the use of morphological cues during real-time sentence comprehension by children with autism.

Mit Hilfe der visuellen Welt Paradigma Satz Verständnis in Mandarin-sprachigen Kindern mit Autismus zu studieren

Sentence comprehension relies on the ability to rapidly integrate different types of linguistic and non-linguistic information. However, there is ...

Exploring Infant Sensitivity to Visual Language using Eye Tracking and the Preferential Looking Paradigm

We discuss the use of the preferential looking paradigm in eye tracking studies in order to study how infants develop, understand, and attend to the world around them. Eye tracking is a safe and non-invasive way to collect gaze data from infants, and the preferential looking paradigm is simple to design and only requires the infant to be attending to the screen. By simultaneously showing two visual stimuli that differ in one dimension, we can assess whether infants show different looking behavior for either stimulus, thus demonstrating sensitivity to that difference. The challenges in such experimental approaches are that experiments must be kept brief (no more than 10 min) and be carefully controlled such that the two stimuli differ in only one way. The interpretation of null results must also be carefully considered. In this paper, we illustrate a successful example of an infant eye tracking study with a preferential looking paradigm to discover that 6-month-olds are sensitive to linguistic cues in a signed language despite having no prior exposure to signed language, suggesting that infants possess intrinsic or innate sensitivities to these cues.

Eye tracking studies using a preferential looking paradigm can be used to study infants&#39;&#160;emerging understanding of, and attention to, their external visual world.

Erforschen der Sensibilität für visuelle Sprache durch Eye Tracking und das Preferential Looking Paradigm

We discuss the use of the preferential looking paradigm in eye tracking studies in order to study how infants develop, understand, and attend to the world ...

A System for Tracking the Dynamics of Social Preference Behavior in Small Rodents

Exploring the neurobiological mechanisms of social behavior requires behavioral tests that can be applied to animal models in an unbiased and observer-independent manner. Since the beginning of the millennium, the three-chamber test has been widely used as a standard paradigm to evaluate sociability (social preference) and social novelty preference in small rodents. However, this test suffers from multiple limitations, including its dependence on spatial navigation and negligence of behavioral dynamics. Presented and validated here is a novel experimental system that offers an alternative to the three-chamber test, while also solving some of its caveats. The system requires a simple and affordable experimental apparatus and publicly available open-source analysis system, which automatically measures and analyzes multiple behavioral parameters at individual and population levels. It allows detailed analysis of the behavioral dynamics of small rodents during any social discrimination test. We demonstrate the efficiency of the system in analyzing the dynamics of social behavior during the social preference and social novelty preference tests as performed by adult male mice and rats. Moreover, we validate the ability of the system to reveal modified dynamics of social behavior in rodents following manipulations such as whisker trimming. Thus, the system allows for rigorous investigation of social behavior and dynamics in small rodent models and supports more accurate comparisons between strains, conditions, and treatments.

Described here is a novel automated experimental system that offers an alternative to the three-chamber test and also solves several caveats. This system supplies multiple behavioral parameters that enable rigorous analysis of small rodent behavioral dynamics during the social preference and social novelty preference tests.