Diese Arbeit wurde durch einen Zuschuss aus dem Herzen und Stroke Foundation of Canada und der Morris und Bella Fainman Family Foundation unterstützt. Die Autoren möchten Veronique Michaud für ihre technische Hilfe mit dem VEVO770 Ultraschall-imaging-System zu danken.

Alle Verfahren wurden von der institutionellen Animal Care Ausschuss der McGill Universität Montréal, QC, Kanada genehmigt. Alle notwendigen Einrichtungen, ist in Tabelle aufgeführt ich.
(1) Murine (C57BL/6J) IVC Stasis Protokoll
<ol><li>OP-Vorbereitung Hinweis: Dies ist eine Operation, überleben und korrekte aseptische Technik muss daher stets befolgt werden. Dabei sicherstellen, dass alle Materialien zur Verfügung stehen, reinigen und Sterilisieren Instrumente vor und zwischen den Einsatz und Benennung eines sterilen Bereichs auf der Arbeitsfläche für alle sterilen Material.<ol>
<li>Sterilisieren Sie alle chirurgischen Instrumente und Materialien von Autoklaven. Ein Glas Bead Sterilisator ist ausreichend, Sterilisieren Instrument Tipps zwischen den Tieren, wenn mehrere Verfahren gleichzeitig durchgeführt wird.</li>
		<li>8-10 Wochen alte C57Bl/6 männliche Mäuse mit einer Mischung aus 100 % Sauerstoff und 2,5 % Isofluran zu betäuben. Hinweis: Stellen Sie den Fluss von Sauerstoff und Isofluran als notwendig.</li>
		<li>Anesthetization durch die hintere Pfote des Tieres zwischen den Zehen mit Zangen kneifen zu bestätigen. Keine Antwort von der Klemme gibt an, dass das Tier betäubt ist.</li>
		<li>Verabreichen Sie langsame Freisetzung Analgetikum (Buprenorphin) durch subkutane Injektion. Geben Sie Mäuse eine Dosis von 1 mg pro 1 kg Körpergewicht (1 mg/kg) Schmerzmittel.</li>
		<li>Platzieren Sie Augensalbe auf beiden Augen des Tieres keine Hornhaut Austrocknung für die Dauer des Verfahrens sicherzustellen.</li>
		<li>Verabreichen Sie 0,2 - 0,5 mL isotonischer Flüssigkeit pro 10 g Körpergewicht subkutan.</li>
		<li>Fixieren Sie das Tier auf dem OP-Tisch mit chirurgischen Klebeband. Legen Sie das Tier in Rückenlage auf den Bauch zu entlarven. Operieren Sie auf ein Heizkissen zu Unterkühlung zu verhindern.</li>
		<li>Entfernen Sie Haare aus dem Bauch der Maus durch Anwendung einer Haarentfernung Creme für ca. 1-2 min. Wischen Bauchbereich reinigen mit Gaze und destilliertem Wasser, wenn nötig.</li>
		<li>Alternativ entfernen Sie die Haare aus dem Bauch durch die Rasur mit einem kleinen elektrischen Rasierapparat.</li>
		<li>Den Bauch mit Baxedin (Chlorhexidin Gluconat BP Lösung) vor der Herstellung Einschnitte zu sterilisieren. Gelten Sie Ethanol leicht mit Gaze, übermäßiger Hitze Verlust durch die Verdunstung des Alkohols zu vermeiden.</li>
	</ol></li>
	<li>Belichtung der unteren Hohlvene (IVC)
	<ol>
<li>Führen Sie chirurgische Scheren verwenden, eine Laparotomie um die Bauchhöhle zu öffnen.<ol>
<li>Heben Sie Haut mit einer Pinzette am Unterbauch und machen einen vertikalen Schnitt parallel zu beiden Seiten der Linea Alba. Den erste Schnitt zu machen, nach links oder rechts von der Linea Alba, abhängig von der Händigkeit des Betreibers. Der Schnitt erfolgt, bei der Ultraschall-Bildgebung weiter Weg von der Mittellinie.</li>
			<li>Machen Sie einen zweiten, horizontalen Einschnitt an der Spitze des Bauches. Hinweis: Nach dem Eindringen in die Bauchhöhle, die Muskulatur "Zelt" und dann Drang mit chirurgische Scheren zu Schäden an der Bauchorgane zu vermeiden.</li>
			<li>Wiederholen Sie die vertikale und horizontale Einschnitte auf dem Bauchmuskel-Layer des Tieres. Achten Sie darauf, die Muskulatur Zelt beim Eindringen in die Bauchhöhle um nicht unter die Organe zu schädigen. Achtung: Heben Sie Haut und Muskel vom Darm und anderen inneren Organe beim Einschnitte um ihnen Punktion nicht zu machen.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Falten Sie die Haut und Muskel vom Einschnitt in die Bauchhöhle aussetzen.</li>
		<li>Gaze, befeuchtet mit Isotone Lösung, um die Seiten der Wunde Öffnung wenden und den Darm zu externalisieren. Druck auf beiden Seiten des Bauches, die Externalisierung des Darms zu unterstützen. Verwenden Sie sanfte Bewegungen mit einem Baumwolle Spitze Applikator, um den Darm zu bewegen. Einweichen Sie Gaze in isotonische Lösung und legen Sie es über das externalisierte Darm.<ol>
<li>Gaze sollte bereits vor der Platzierung auf Gewebe befeuchtet werden.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Bewegen Sie peritonealen Fett beiseite zu, und setzen Sie die IVC zwischen den Nieren- und Beckenkamm Adern.</li>
		<li>Machen Sie einen ersten Ermittlung des offensichtlichen Seitenäste. Einem Seitenast erscheint als kleiner, aber bedeutende Ader, die Weg von der IVC, zwischen den Nieren und den Beckenkamm Zweige Venen. Gefäßsystem variieren stark zwischen Mäusen. Mäuse haben Seitenäste vorhanden auf einer oder beiden Seiten von der IVC.</li>
	</ol></li>
	<li>Unterbindung der Seitenäste Hinweis: Wenn Seitenäste vorhanden sind, wird das folgende Verfahren jeweils gefolgt. Falls nicht vorhanden, fahren Sie mit Schritt 4: erste Naht Platzierung unter der IVC. Die Ligatur-Website von der IVC werden unmittelbar distal der linken renal Vene, unabhängig vom Vorhandensein von seitenästen.<ol>
<li>Durchführen Sie stumpfe Dissektion auf jeder Seite des Ortsverbandes Seite. Stumpfe Dissektion ist der Prozess wiederholt stumpfen Pinzette mit sanftem Druck, um die Faszie durchbrechen, ohne Beschädigung der umgebenden Gefäße zu öffnen. Vorsicht: Punktion oder die Vene zu beschädigen zu vermeiden.</li>
		<li>Heben Sie den Zweig und übergeben Sie einen Abschnitt von 6-0 Seide Naht unterhalb der Vene. Immer Vorsicht beim Heben oder bewegen Schiffe. Es empfiehlt sich, das Fett um die Schiffe zu packen, sonst besteht die Gefahr einer Beschädigung des Schiffes.</li>
		<li>Mit Naht Pinzette, machen Sie eine chirurgische Ligatur um den Seitenzweig mit standard chirurgische Knoten binden Technik. Vollständige Unterbindung erfolgt um zu 100 % Okklusion der Vene zu gewährleisten. Verwenden Sie mindestens drei binden wirft, um sicherzustellen, dass die Verbindung sicher ist.</li>
		<li>Wiederholen Sie Schritt 1.3 für alle verbleibenden Seitenäste.</li>
	</ol></li>
	<li>Dissektion der bauchschlagader von der IVC
	<ol>
<li>Führen Sie stumpfe Dissektion um die IVC unmittelbar distal von der linken renal Vene. Der bauchschlagader ist die IVC über Faszien befestigt, daher führen erste stumpfe Dissektion um die IVC und Bauchaorta. Achtung: Vermeiden Sie punktieren oder die Vene zu beschädigen. Bruch oder Punktion entweder Schiff nicht. Dies ist der wichtigste Teil des Verfahrens, mit dem höchsten Risiko für Schiff Schaden.</li>
		<li>Weiterhin üben Sie sanften Druck über stumpfe Dissektion, bis eine klare Fenster zwischen der Aorta und IVC vorgenommen wird.</li>
	</ol></li>
	<li>Naht-Platzierung und IVC-Ligatur
	<ol>
<li>Übergeben Sie einen Abschnitt von 6-0 Seide Naht unter dem IVC und Bauchaorta.</li>
		<li>Suchen Sie die Naht durch das Fenster zwischen der IVC und Aorta erstellt. Verwenden Sie Zange ziehen die Naht und Fädeln Sie ihn zwischen die Bauchaorta und IVC. Fädeln Sie den Faden durch sorgfältig, versuchte, nicht zu ziehen/Punktion der IVC und Bauchaorta.</li>
		<li>Machen Sie eine chirurgische Verbindung rund um die IVC mit Naht-Zange, ein total Verschluss der Vene zu gewährleisten. Wieder stellen der Ligatur unmittelbar distal von der linken renal Vene.</li>
		<li>Machen Sie drei Naht wirft der Ligatur zu sichern. Hinweis: Es ist auch möglich, die Naht unterhalb der IVC und Aorta vor der Trennung der beiden als eine Alternative zu übergeben. 7-0 Prolene Fäden können alternativ zur Unterbindung von den Seitentrieben und die IVC verwendet werden.</li>
	</ol></li>
	<li>Wundverschluss und postoperative Pflege
	<ol>
<li>Vergewissern Sie sich, der bauchschlagader ununterbrochene gelassen worden ist und dass alle Seitenäste ligiert worden. Die IVC erscheint dilatative distal von der Ligatur-Website und kein Blut fließen wird sichtbar sein.</li>
		<li>Legen Sie alle peritonealen Fett und den Darm wieder in die Bauchhöhle.</li>
		<li>Schließen Sie die Wunde mit Naht Zange und 6-0 Seide Naht. Verwenden Sie eine laufende Naht (einfach kontinuierliche) und sicherzustellen Sie, dass die Naht nicht zu eng sein wird. Eine enge Naht wird brechen, wenn das Tier wacht auf und bewegt sich in seinem Käfig.<ol>
<li>Alternativ können Sie die PDS, Ethilon, Vicryl, Dexon oder Edelstahl-Clips für Wundverschluss.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Naht die Schicht der Bauchmuskel zunächst mit entsprechenden Naht Technik zu binden.</li>
		<li>Wiederholen Sie die Nahttechnik für die Haut und überprüfen Sie Wundverschluss ausreicht. Hinweis: Wenn die gleichen Faden Nadel und Faden für mehrere Tiere verwenden, Sterilisieren Sie sowohl in 70 % igem Ethanol vor jedem Gebrauch.</li>
		<li>Entfernen Sie das Tier aus betäubende Gas und legen Sie sie in einem Inkubator 34 ° C für mindestens 30 Minuten.</li>
		<li>Auch hier verabreichen Sie 0,2 - 0,5 mL isotonischer Flüssigkeit pro 10 g Körpergewicht subkutan. Flüssigkeiten können in folgenden Tagen eingeräumt präoperative Körpergewicht bei Bedarf.</li>
		<li>Überwachen Sie das Tier bis zur Genesung zu gewährleisten erfolgreich operiert und die allgemeine Gesundheit des Tieres zu beurteilen. Vorsicht: Eine leichte Buckliger Haltung für ein invasives Verfahren wie diesem erwarten, aber das Tier verhält sich normalerweise schon 30 Minuten nach der Operation.</li>
		<li>Legen Sie das Tier in seinem eigenen Käfig, und stellen Sie es nicht mit anderen Tieren bis vollständig erholt.</li>
		<li>Neu verwalten Sie Analgetikum täglich für bis zu 48 h op.</li>
		<li>Legen Sie Lebensmittel auf dem Boden des Käfigs für die tierischen While in Genesung. Andere besondere Vorsicht ist in der Regel nicht erforderlich.</li>
		<li>Prüfen der Wundstelle für Rötung, Schwellung, oder Entlastung und andere Anzeichen einer Infektion.</li>
		<li>Entfernen Sie ggf. Fäden nach 7-10 Tagen.</li>
		<li>Euthanasie sofort durchführen, wenn eine Operation nicht erfolgreich ist (z. B. bedeutende Schiff Schäden und/oder Blut Verlust) oder Tier nicht mit Post-operative Betreuung verbessert. Sterbehilfe ist in der Regel in 48 h op durchgeführt. Verwenden Sie für längere Experimente 7-0 Prolene um zu verbinden Seitenäste und die IVC und 5-0 Vicryl Nähte um den Bauchraum zu schließen.<ol>
<li>Durchführen Sie Euthanasie durch Anesthetization des Tieres in eine Induktion wie zuvor beschrieben, außer bei 5 % Isofluran. Es folgt durch ersticken mit 100 % CO2 während betäubt.</li>
			<li>Führen Sie nach Bestätigung der Euthanasie durch Ersticken (Verlust von Herzschlag und keine Atmung) durch zervikale Dislokation um komplette Euthanasie zu gewährleisten.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>(2) Hochfrequenz-Ultraschall-Protokoll
Hinweis: Dieses Protokoll wird von der Lady Davis Institut Nagetier Phänotypisierung Kern SOP für Hochfrequenz-Ultraschall-Bildgebung angepasst. Dieses Protokoll wird 24 Stunden nach der Operation durchgeführt, aber kann schneller erfolgen, solange das Tier gut auf die Operation reagiert. Das Protokoll kann jederzeit an gesunden Mäusen durchgeführt werden und ist oft getan, vor und nach der Operation zu vergleichen.
<ol><li>
Vorbereitung der Tiere
	<ol>
<li>Legen Sie das Tier in eine Induktion Kammer und Betäuben Sie das Tier mit einer Mischung aus 100 % Sauerstoff und 2,5 % Isofluran zu.</li>
		<li>Herzfrequenz und temperaturmonitor einschalten. Stellung Wärmelampe über Tisch Tier warm zu halten während der Prozedur.</li>
		<li>Nehmen Sie das Tier aus der Induktion Kammer und Auge Gleitmittel um Hornhaut Austrocknung zu verhindern. Positionieren Sie das Tier auf die Analyseplattform und kleben Sie die Narkose Rohr zu Mund/Nase des Tieres.</li>
		<li>Warmen Ultraschall gel auf 37 ° C und legen Sie das Gel auf den Bauch des Tieres. Das Ultraschallgel wird erwärmt, mit einem Wasser-Heizung-System, dass Pumpen Warmwasser durch Spulen, die um die Gel-Flasche gewickelt sind.</li>
		<li>Für Messungen der Herzfrequenz (falls erforderlich) die 4 Elektroden die Analyseplattform Elektrodengel aufsetzen und die Pfoten des Tieres auf die Plattform/Elektroden mit chirurgischen Klebeband befestigen. Legen Sie das Tier in Rückenlage für die Bildgebung von der IVC. Die Ultraschall-imaging-System umfasst eine Analyseplattform, die wird erwärmt und Elektroden zur Überwachung des Tieres enthält.</li>
		<li>Für Temperaturmessungen Elektrodengel auf Thermometer und Einfügen in den Enddarm des Tieres.</li>
		<li>Passen Sie Wärmelampe und Isofluran als notwendig, um sicherzustellen, dass Tier ist komfortabel und hat eine Atmung zwischen 30-70 Bpm wird bei 37 ° c gehalten</li>
		<li>Falls erforderlich, Bauch des Tieres zu rasieren oder Haare mit Enthaarungscreme entfernen. Bewerben Sie sich für 1 bis 2 Minuten und wischen Sie mit Gaze und destilliertem Wasser reinigen. Hinweis: Zu viel Haar kann die Qualität der Bilder beeinflussen.</li>
		<li>Platzieren Sie Gaze unter oder auf die Seite des Tieres überschüssige Ultraschallgel zu fangen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Bildgebung der IVC und Thrombus
	<ol>
<li>Schalten Sie die imaging-Software und beginnen Sie eine neue Studie.</li>
		<li>Wählen Sie eine geeignete Scanhead für die Bildgebung. Die hier verwendete Scanhead ist für die Bauchorgane (Frequenz: 35 MHz, Brennweite: 12,8 mm).</li>
		<li>Erfassen Sie alle relevanten Informationen über das Tier. Dazu gehören Tier ID, Geschlecht, Gewicht, Geburtsdatum, Stamm.</li>
		<li>Senken Sie die Scanhead nach unten, bis er das Ultraschallgel auf das Tier berührt.</li>
		<li>Starten Sie die Scanhead-Sonde um 2-D-Bildgebung des Tieres zu beginnen. In diesem Modus werden Bilder als zweidimensional in unterschiedlichen Graustufen dargestellt.</li>
		<li>Suchen Sie die IVC und bauchschlagader durch Bewegen der Maus-Plattform innerhalb des x- bzw. y-Ebene, während der Bewegung auch die Scanhead durch die Z-Ebene. Hinweis: Blut Schiffe mit ihren weißen Mauern und das Blut im Inneren erscheint fast schwarz. Bauchschlagader wird intensiv Pulsieren und haben dickere Wände, während der IVC haben dünnere Wände und Kompresse/erweitern leicht auf das Bild-wenn die Scanhead nach oben verschoben und nach unten. Die Ligatur-Website werden offensichtlich, da die Vene geweitet wird und die Vene Wand wird zu einem Punkt kommen. Jede Thrombus innerhalb gebildet werden solide unter Ultraschall-Bildgebung und wird nicht leicht komprimieren, wie die Wand der Vene. Die Vene wird erst oberhalb der Ligatur komprimieren, wo kein Thrombus gebildet wird.</li>
		<li>Bei der Ortung Zentrieren der IVC und die Ligatur-Seite Sie sie auf den Mittelpunkt des Ultraschalls, um die genaueste Bild zu erreichen.<ol>
<li>Wenn das Bild zu dunkel ist, um klar zu sehen, stellen das Gel und entfernen eventuell vorhandene Luftbläschen mit einem Baumwolle Spitze Applikator.</li>
			<li>Falls erforderlich, Scanhead 45° nach links oder rechts kippen und Nachjustieren der Tieren-Plattform um die Vene klar zu sehen. Dies geschieht wenn gibt es Interferenzen mit der Scanhead. In diesem Szenario muss die Vene in einem Seite-Winkel um die Naht zu vermeiden abgebildet werden. Hinweis: Bildstörungen verursacht in den meisten Fällen durch dunkle Flecken der Haut auf dem Tier, schlechte Wunde Naht Platzierung oder Luftblasen in das Ultraschallgel.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Mit der Software machen Sie Fotos von jedem gewünschten Strukturen und machen Sie Messungen Messung Werkzeug. Gemeinsamen Messungen umfassen Querschnittsfläche von den Thrombus oder Breite des Standortes Ligatur.</li>
		<li>Ändern Sie die bildgebenden Modus auf Pulswelle Doppler, Blut Durchflussmessungen zu machen. Dieser Modus ermöglicht die Darstellung der vaskulären Blutfluss und die Messung der Strömungsgeschwindigkeit, unter anderen Variablen.</li>
		<li>Kippen Sie die Analyseplattform um das hintere Ende des Tieres zu senken.</li>
		<li>Ändern Sie die Winkelstellung der Scanhead, so dass sie das Gel in einem Winkel von etwa 30° vom hinteren Ende des Tieres in Verbindung setzen wird.</li>
		<li>Positionieren Sie die Tier-Plattform und Scanhead. Die IVC und Ligatur zu verlagern, wenn nötig.</li>
		<li>Machen Sie Blut fließen Messungen rund um die Ligatur-Website zu bestätigen Stase und nehmen alle gewünschten Bilder. Gemeinsamen Messungen des Blutflusses enthalten Durchschnittsgeschwindigkeit, Peak Velocity oder mittlere Geschwindigkeit.</li>
		<li>Speichern Sie Messungen oder Aufnahmen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Clean-Up und Tier Erholung
	<ol>
<li>Erhöhen der Scanhead zur Ausgangsposition und tierischen Plattform in die Ausgangsposition zu positionieren.</li>
		<li>Entfernen Sie überschüssiges Gel aus dem Tier mit Gaze. Tun Sie dies sanft, so dass die Wunde Naht nicht gebrochen werden.</li>
		<li>Entfernen Sie das Thermometer aus dem Tier Rektum und nehmen Sie das Tier von der Plattform zu.</li>
		<li>Legen Sie das Tier in seinem Käfig und ein 34 ° C Inkubator.</li>
		<li>Überwachen Sie das Tier bis zur Genesung. Das Verfahren ist sehr kleine und nicht-invasiv. Das Tier wird schnell aufwachen. Weiterhin Tier in den folgenden Tagen gemäß Abschnitt 1.6 dieses Protokolls.</li>
		<li>Reinigen Sie die tierische Plattform mit Gaze und Desinfektionsmittel.</li>
		<li>Wischen Sie die Scanhead mit Gaze und destilliertem Wasser reinigen. Vorsicht: Reinigen der Scanhead sehr vorsichtig und nur mit destilliertem Wasser.</li>
		<li>Wiederholen Sie Schritt 2 für das nächste Tier.<ol>
<li>Wenn fertig mit allen Themen, stellen Sie sicher, dass alle Bilder und Aufnahmen gespeichert wurden. Dann schalten Sie alle Geräte und Software.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+diagnosed+deep+vein+thrombosis+in+the+general+population:+systematic+review.">Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review.</a> Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).</li><li>McGuinness, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+labelled+monocytes+by+experimental+venous+thrombi.">Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi.</a> Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).</li><li>Singh, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+of+thrombus+to+resolve+in+urokinase-type+plasminogen+activator+gene-knockout+mice:+rescue+by+normal+bone+marrow-derived+cells.">Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells.</a> Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).</li><li>Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+kinetics+of+99mTc+labeled+recombinant+tissue+plasminogen+activator+in+rabbits.">In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits.</a> Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).</li><li>Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+pig+models+of+venous+thrombosis+mimicking+human+disease.">In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease.</a> Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).</li><li>Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+pulmonary+emboli+and+deep+venous+thrombi+with+99mTc-bitistatin,+a+platelet-binding+polypeptide+from+viper+venom.">Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom.</a> J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).</li><li>Wakefield, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venous+thrombosis+prophylaxis+by+inflammatory+inhibition+without+anticoagulation+therapy.">Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy.</a> J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).</li><li>Robins, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+Gas6+contributes+to+thrombogenesis+and+promotes+tissue+factor+up-regulation+after+vessel+injury+in+mice.">Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice.</a> Blood. 121 (4), 692-699 (2013).</li><li>Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostaglandin+E+synthase+is+upregulated+by+Gas6+during+cancer-induced+venous+thrombosis.">Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis.</a> Blood. 127 (6), 769-777 (2016).</li><li>Laurance, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gas6+(Growth+Arrest-Specific+6)+Promotes+Inflammatory+(CCR2hiCX3CR1lo)+Monocyte+Recruitment+in+Venous+Thrombosis.">Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis.">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li><li>Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+monitoring+of+venous+thrombosis+in+mice.">In vivo monitoring of venous thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).</li><li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches.">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li><li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL/6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+(stasis)+model.">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li><li>Luther, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+Effector-Memory+T+Cell+Activation+Regulates+Post-Thrombotic+Vein+Wall+Inflammation+and+Thrombus+Resolution.">Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution.</a> Circ Res. , (2016).</li><li>Subramaniam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+contributions+of+complement+factors+to+platelet+activation+and+fibrin+formation+in+venous+thrombus+development.">Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development.</a> Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombogenesis+with+continuous+blood+flow+in+the+inferior+vena+cava.+A+novel+mouse+model.">Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model.</a> Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).</li></ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Es gibt mehrere wichtige Schritte für erfolgreiche venöse thrombusbildung mit dem Stase-Modell. Induktion einer Beinvenenthrombose ist eine größere Herausforderung in alten Mäusen durch die Anhäufung von Fett rund um die minderwertige Vena Cava und Aorta. Idealerweise sollte Mäuse durchläuft diese Prozedur 8 - 10 Wochen alt sein. Große Sorgfalt sollte nicht induzieren endothelschäden in der IVC während der stumpfe Dissektion und Ligatur. Darüber hinaus ist es entscheidend, das Tier in einem Inkubator 34 ° C ...

Venöse Thromboembolien (VTE), die tiefe Venenthrombose (DVT) und Lungenembolie besteht, ist die dritthäufigste Ursache von Herz-Kreislauf-Tod nach Herzinfarkt und Schlaganfall. Es ist eine häufige Erkrankung, die Auswirkungen auf 1-2 % der Bevölkerung, mit einer jährlichen Inzidenz von 1 in 500-1. VTE-Risiko kann zu führen: 1) Tod durch Lungenembolie; (2) Post-thrombotischen Syndrom, gekennzeichnet durch chronische Beinschmerzen, Schwellungen und Geschwüre; oder 3) Chronische pulmonale Hypertonie, was zu erheblichen chronischen Atemwegserkrankungen Kompromiss. VTE ist eine multifaktorielle Erkrankung und kann aus der Stasis des Blutflusses, Schäden an Gefäßwänden und/oder Hypercoagulable Staaten aufgrund einer Störung des Gleichgewichts zwischen der Koagulation und die fibrinolytische Systeme führen, wie es vor über hundert Jahren beschrieben wurde von Virchow und ist bekannt als die Virchow-Trias.
Da in den meisten Fällen unmöglich, Humanproben TVT erhalten ist, haben Forscher experimentelle Tiermodelle der DVT entwickelt. Mehrere Tiere einschließlich Ratte2, Maus3, Kaninchen4, Schwein5, Hund6und nicht-menschlichen Primaten7 wurden verwendet. Mäuse können gentechnisch verändert und sind die am häufigsten verwendeten Tiere DVT zu studieren. Wie bei allen Tieren ist spontane DVT jedoch nicht bei Mäusen beobachtet. So werden physikalische oder chemische Veränderungen der Vene Wand zur Thrombose bei Mäusen zu erstellen. Wir haben zuvor das Eisenchlorid Modell verwendet, um Thrombose in der minderwertigen Vena Cava (IVC) Mäuse8,9,10induzieren. Dieses Modell hat den Vorteil, zuverlässig produzieren okklusive Thromben innerhalb von Minuten und kann verwendet werden, um die Rolle der Antigerinnungsmittel und Anti-Thrombozyten Drogen während akuter TVT untersuchen. Es ist jedoch ein terminal Verfahren. So, um akute und chronische DVT zu untersuchen, ist die Stasis-Modell besser geeignet. In diesem Modell wird durch die vollständige Unterbrechung des Blutflusses in der IVC, einer der Faktoren im Virchow Trias für DVT Entwicklung thrombusbildung induziert. Dieses Modell lässt sich studieren, DVT-Bildung und Auflösung, die ein Vorteil im Vergleich zu den FeCl3 Modell11ist.
Wir haben eine nicht-invasive Methode zur thrombusbildung und Auflösung im Laufe der Zeit mit einem Micro-Imaging Hochfrequenz-Ultraschall-System12folgen entwickelt. Wir haben zuvor gezeigt, dass die Messung der venösen Thrombose mit Ultraschall positiv korreliert mit Thromben pathologisch erhalten. Wir haben in zwei weiteren Studien bestätigt, dass Messungen mit Ultraschall korrelieren mit Thromben Gewicht und Thrombus durch Histochemie9,10quantifiziert. Noch wichtiger ist, haben wir gezeigt, dass hochfrequente Ultraschall verwendet werden kann, um die Bildung von tiefen Venenthrombose in Mäusen12zu überwachen. Es kann auch zur Auflösung des Thrombus in eine nicht-invasive Weise quantifizieren.
Hier beschreiben wir das Protokoll so dass thrombusbildung mit der Stasis-induzierte Thrombose-Maus-Modell und wie thrombusbildung nicht-invasiv im Laufe der Zeit mittels Hochfrequenz Ultraschall überwacht werden kann.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-0 perma-hand silk suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>706G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>20830-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture tying forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>20830-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blunt forceps (straight and curved)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>20830-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13002-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15396-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G needles</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VEVO 770 High Resolution Imaging System</td>
			<td>Visualsonics</td>
			<td>No longer sold</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SR Buprenorphine</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td>Given to LDI by Vet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Systan eye oinment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>288/28062-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x2 sterile Gauze</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>#104148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>from JGH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transpore hypoallergenic surgical tape</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>#7411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel (Aquasonic-100)</td>
			<td>Dufort &#38; Lavigne</td>
			<td>#AKEN4061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>From JGH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Dispomed</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment</td>
			<td>Dispomed</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair remover</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water heated hard pad</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td>#HHP-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymar heater water pump TP500</td>
			<td>MATVET Inc.</td>
			<td>#R-500305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infra-red heating lamp</td>
			<td>electrimat inc.</td>
			<td>#1R175R-PAR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse rectal temperature prope</td>
			<td>emkaTECHNOLOGIES</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>From JGH</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

deep vein thrombosis induced by stasis in mice monitored by high frequency ultrasonography

Venenthrombose ist eine häufige Erkrankung, die Auswirkungen auf 1-2 % der Bevölkerung, mit einer jährlichen Inzidenz von 1 in 500. Venenthrombose führt zum Tod durch Lungenembolie oder Ergebnisse in der Post-thrombotischen Syndrom, gekennzeichnet durch chronische Beinschmerzen, Schwellungen und Geschwüre oder Chronische pulmonale Hypertonie, was zu erheblichen chronischen Atemwegserkrankungen Kompromiss. Dies ist die häufigste kardiovaskuläre Erkrankung nach Myokardinfarkt und ischämischen Schlaganfall und ist eine klinische Herausforderung für alle medizinischen Disziplinen, wie es den Kurs von anderen Erkrankungen wie Krebs, systemische Erkrankung, Operation und schweres Trauma erschweren kann.
Experimentelle Modelle sind notwendig, um diese Mechanismen zu untersuchen. Die Stasis-Modell induziert konsistente Thrombus Größe und eine messbare Menge des Thrombus. Allerdings ist es notwendig, systematisch verbinden Seitenäste der minderwertigen Vena Cava Variabilität in den Thrombus Größen und jede fehlerhafte Dateninterpretation zu vermeiden. Wir haben eine nicht-invasive Technik zur Messung der Thrombus Größe mittels Ultraschall entwickelt. Mit dieser Technik können wir Thrombus Entwicklung und Auflösung im Laufe der Zeit in der selben Tier bewerten. Diese Vorgehensweise schränkt die Anzahl der Mäuse für die Quantifizierung der Venenthrombose Einklang mit dem Grundsatz der Ersatz, Abbau und Veredelung von Tieren in der Forschung erforderlich. Wir haben bewiesen, dass Thromben Gewicht und histologischen Untersuchung des Thrombus Größe korrelieren mit Messung mit Ultraschall erhalten. Daher beschreibt die aktuelle Studie induzieren tiefe Venenthrombose bei Mäusen mit dem minderwertigen Vena Cava-Stasis-Modell und wie es mittels Hochfrequenz Ultraschall überwacht.

Stase Venenthrombose Modell
In die Stasis-Modell Mäusen werden betäubt, und ein Schnitt gemacht, der unteren Hohlvene (IVC) verfügbar zu machen. Der Schnitt erfolgt auf der linken oder rechten Seite der Maus anstelle einer Mittellinie Laparotomie in einer Weise, die nicht mit der Ultraschallsonde stören würde. Die Abdominal-Muskeln und der Haut sind Falten zurück zu entlarven die IVC (...

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Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Dieses Protokoll beschreibt die Schritte zum Venenthrombose mit einem Stasis-Modell zu erhalten. Darüber hinaus verwenden wir eine nicht-invasive Methode um thrombusbildung und Auflösung im Laufe der Zeit zu messen.

Tiefe Venenthrombose, induziert durch Stauung in den Mäusen durch Hochfrequenz-Sonographie überwacht

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

deep-vein-thrombosis-induced-stasis-mice-monitored-high-frequency

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

9.8K Aufrufe.  McGill University. Dieses Protokoll beschreibt die Schritte zum Venenthrombose mit einem Stasis-Modell zu erhalten. Darüber hinaus verwenden wir eine nicht-invasive Methode um thrombusbildung und Auflösung im Laufe der Zeit zu messen.

Serie: Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus (KSHV)

Currently KS is the most predominant HIV/AIDS related malignancy in Southern Africa and hence the world.1,2 It is characterized as an angioproliferative tumor of vascular endothelial cells and produces rare B cell lymphoproliferative diseases in the form of pleural effusion lymphomas (PEL) and some forms of multicentric Castleman's disease.3-5 Only 1-5% of cells in KS lesions actively support lytic replication of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV), the etiological agent associated with KS, and it is clear that cellular factors must interact with viral factors in the process of oncogenesis and tumor progression.6,7 Identifying novel host-factor determinants which contribute to KS pathology is essential for developing prognostic markers for tumor progression and metastasis as well as for developing novel therapeutics for the treatment of KS.8 The accompanying video details the methods we use to identify host cell gene expression programs altered in dermal microvascular endothelial cells (DMVEC) after KSHV infection and in KS tumor tissue.9 Once dysregulated genes are identified by microarray analysis, changes in protein expression are confirmed by immunoblot and dual labeled immunofluorescence. Changes in transcriptional expression of dysregulated genes are confirmed in vitro by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). Validation of in vitro findings using archival KS tumor tissue is also performed by dual labeled immunochemistry and tissue microarrays.8,10 Our approach to identifying dysregulated genes in the KS tumor tissue microenvironment will allow the development of in vitro and subsequently in vivo model systems for discovery and evaluation of potential novel therapeutic for the treatment of KS.

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV

Host cell factors play a critical role in the establishment and maintenance of Kaposi's sarcoma (KS). We outline methods to identify host cell factors altered in KSHV-infected DMVEC cells, and in KS tumor tissue. Cellular genes altered by virus will serve as potential target(s) for novel therapeutics.

Identifizieren Dysregulated Gene von Kaposi-Sarkom-assoziierten Herpesvirus (KSHV) Induced

Currently KS is the most predominant HIV/AIDS related malignancy in Southern Africa and hence the world.1,2 It is characterized as an angioproliferative ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to Witebsky's postulates, one of the criteria in diagnosing a disease as autoimmune is the reproduction of the disease in experimental animals by the passive transfer of autoantibodies. For epidermolysis bullosa acquisita (EBA), a prototypic organ-specific autoimmune disease of skin and mucous membranes, several experimental models were recently established. In the animal model described in our present work, purified IgG antibodies against a stretch of 200 amino acids (aa 757-967) of collagen VII are injected repeatedly into mice reproducing the blistering phenotype as well as the histo- and immunopathological features characteristic to human EBA 1. Full-blown widespread disease is usually seen 5-6 days after the first injection and the extent of the disease correlates with the dose of the administered collagen VII-specific IgG. The tissue damage (blister formation) in the experimental EBA is depending on the recruitment and activation of granulocytes by tissue-bound autoantibodies 2,-4. Therefore, this model allows for the dissection of the granulocyte-dependent inflammatory pathway involved in the autoimmune tissue damage, as the model reproduces only the T cell-independent phase of the efferent autoimmune response. Furthermore, its value is underlined by a number of studies demonstrating the blister-inducing potential of autoantibodies in vivo and investigating the mechanism of the blister formation in EBA 1,3,-6. Finally, this model will greatly facilitate the development of new anti-inflammatory therapies in autoantibody-induced diseases. Overall, the passive transfer animal model of EBA is an accessible and instructive disease model and will help researchers to analyze not only EBA pathogenesis but to answer fundamental biologically and clinically essential autoimmunity questions.

In the animal model described in our present work, purified IgG antibodies against a stretch of 200 amino acids (aa 757-967) of collagen VII are injected repeatedly into mice reproducing the blistering phenotype as well as the histo- and immunopathological features characteristic to human epidermolysis bullosa acquisita (EBA)1.

Granulozyten-abhängige Autoantikörper-induzierten Blasenbildung

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages and disadvantages. We describe here an experimental colitis model that is initiated by adoptive transfer of syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipient mice. The CD4+CD45RBhigh T cell population that largely consists of na&#239;ve effector cells is capable of inducing chronic intestinal inflammation, closely resembling key aspects of human IBD. This method can be manipulated to study aspects of disease onset and progression. Additionally it can be used to study the function of innate, adaptive, and regulatory immune cell populations, and the role of environmental exposures, i.e., the microbiota, in intestinal inflammation. In this article we illustrate the methodology for inducing colitis with a step-by-step protocol. This includes a video demonstration of key technical aspects required to successfully develop this murine model of experimental colitis for research purposes.

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.

Die Induktion von Murine Darmentzündungen durch adoptiven Transfer von Effektor CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hoch</sup&gt; T-Zellen in immundefizienten Mäusen

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in vivo is crucial for understanding the molecular basis of leukocyte transendothelial migration and interaction with vascular endothelium. One powerful approach involves intravital microscopy on transgenic mice expressing fluorescent proteins in cells of interest.
Here we present a protocol for imaging monocytes and neutrophils in the CX3CR1gfp/wt mouse i.v. injected with orange dye-labeled neutrophils with an inverted confocal microscope. Time-lapse movies gathered from 30 min&#160;to several hours of imaging allow the analysis of leukocyte behavior in mesenteric veins under both steady state and inflammatory conditions. We also describe the steps to locally induce blood vessel inflammation with TLR2/TLR1 agonist Pam3SK4 and monitor the subsequent recruitment of neutrophils and monocytes.
The presented technique can also be used to monitor other populations of leukocytes and investigate molecules implicated in leukocyte recruitment or trafficking using other stimuli or transgenic mice.

We detail a protocol to monitor the behavior of neutrophils and monocytes in mesenteric veins under steady state and inflammatory conditions using intravital confocal microscopy on anaesthetized mice.

Abbilden Neutrophilen und Monozyten in Mesenterialvenen von Intravitalmikroskopie an narkotisierten Ratten in Echtzeit

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of combining reactions together. We designed and evaluated a panel based on this principle to rapidly identify the presence of common disease agents in dogs and horses with acute respiratory illness. This manuscript describes a nanoscale diagnostic PCR workflow for sample preparation, amplification, and analysis of target pathogen sequences, focusing on procedures that are different from microliter scale reactions. In the respiratory panel presented, 18 assays were each set up in triplicate, accommodating up to 48 samples per plate. A universal extraction and pre-amplification workflow was optimized for high-throughput sample preparation to accommodate multiple matrices and DNA and RNA based pathogens. Representative data are presented for one RNA target (influenza A matrix) and one DNA target (equine herpesvirus 1). The ability to quickly and accurately test for a comprehensive, syndrome-based group of pathogens is a valuable tool for improving efficiency and ergonomics of diagnostic testing and for acute respiratory disease diagnosis and management.

High-throughput testing of DNA and RNA based pathogens by nanoscale PCR is described using a syndromic canine and equine respiratory PCR panel.

Hochdurchsatz-Nachweis von Respiratory Pathogens in Tier Proben durch nanoskalige PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human central nervous system (CNS) autoimmune demyelinating disease, creation of an AQP4-targeted model with both clinical and histologic manifestations of CNS autoimmunity has proven challenging. Immunization of wild-type (WT) mice with AQP4 peptides elicited T cell proliferation, although those T cells could not transfer disease to na&#239;ve recipient mice. Recently, two novel AQP4 T cell epitopes, peptide (p) 135-153 and p201-220, were identified when studying immune responses to AQP4 in AQP4-deficient (AQP4-/-) mice, suggesting T cell reactivity to these epitopes is normally controlled by thymic negative selection. AQP4-/- Th17 polarized T cells primed to either p135-153 or p201-220 induced paralysis in recipient WT mice, that was associated with predominantly leptomeningeal inflammation of the spinal cord and optic nerves. Inflammation surrounding optic nerves and involvement of the inner retinal layers (IRL) were manifested by changes in serial optical coherence tomography (OCT). Here, we illustrate the approaches used to create this new in vivo model of AQP4-targeted CNS autoimmunity (ATCA), which can now be employed to study mechanisms that permit development of pathogenic AQP4-specific T cells and how they may cooperate with B cells in NMO pathogenesis.

Here, we present a protocol to induce paralysis and opticospinal inflammation by transfer of aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells from AQP4-/- mice into WT mice. In addition, we demonstrate how to use serial optical coherence tomography to monitor visual system dysfunction.

Induktion von Lähmung und visuelles System Verletzungen bei Mäusen durch T-Zellen spezifisch für Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus formation in veins remain obscure. Lack of mobility (e.g., after surgery or long-haul flights) is one of the main factors leading to DVT. The pathophysiological consequence of the lack of mobility is blood flow stagnation in venous valves. Here, a model is described that mimics such flow disturbance as a thrombosis-driving factor. In this model, partial flow restriction (stenosis) in the inferior vena cava (IVC) is created. Closure of about 90% of the IVC lumen for 48 h results in development of thrombi structurally similar to those in humans. The similarities are: i) most of the thrombus volume is red, i.e., consists of red blood cells and fibrin, ii) presence of a white part (lines of Zahn), iii) non-denuded endothelial monolayer, iv) elevated plasma D-Dimer levels, and v) possibility to prevent thrombosis by low molecular weight heparin. Limitations include variable size of thrombi and the fact that a certain percentage of wild-type mice (0 - 35%) may not produce a thrombus. In addition to visual observation and measurement, thrombi may be visualized by non-invasive technologies, such as ultrasonography, which allows for monitoring the dynamics of thrombus development. At shorter time points (1 - 6 h), intravital microscopy may be applied to directly observe events (e.g., recruitment of cells to the vessel wall) preceding thrombus formation. Use of this method by several teams around the world has made it possible to uncover basic mechanisms of DVT initiation and identify potential targets that might be beneficial for its prevention.

We describe here stenosis in the inferior vena cava as a murine model of deep vein thrombosis. This model recapitulates blood flow restriction, one of the major triggers of venous thrombosis in humans.

Stenose der minderwertigen Vena Cava: ein Mausmodell der tiefen Venenthrombose

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

Evaluation of Blood Lactate and Plasma Insulin During High-intensity Exercise by Antecubital Vein Catheterization

The measurement of metabolic and endocrinal markers during physical activity is of relevance to understanding the physiological implications of different exercise modalities. During some exercise modalities (e.g., high-intensity interval exercise), blood metabolites and hormonal levels change in short periods of time. In the present study, we describe a method to catheterize the antecubital vein, which allows the collection of several blood samples during exercise. Insulin and venous lactate concentrations were measured during high-intensity exercise by the application of the described method. The exercise consisted of three 30 s bouts of high-intensity exercise separated by 4 min of recovery. After the last recovery period, a Wingate test was performed. Blood samples from the antecubital vein were obtained before and after each 30 s bout and before and after the Wingate test. As a result, it was possible to evaluate the plasma insulin and venous blood lactate variations during the exercise.

Here we present a protocol to obtain several blood samples from the antecubital vein during high-intensity interval training. This protocol may be useful for the measurement of blood metabolites and endocrinal markers during exercise.

Auswertung der Blut-Laktat und Plasma-Insulin im hoch-intensives Training von Antecubital Vene Katheterisierung

The measurement of metabolic and endocrinal markers during physical activity is of relevance to understanding the physiological implications of different ...

Visualizing Leukocyte Rolling and Adhesion in Angiotensin II-Infused Mice: Techniques and Pitfalls

Epifluorescence intravital video microscopy (IVM) of blood vessels is an established method to evaluate the activation of immune cells and their ability to role and adhere to the endothelial layer. Visualization of circulating cells by injection of fluorescent dyes or fluorophore-coupled antibodies is commonly used. Alternatively, fluorescent reporter mice can be used. Interactions of leukocytes, in particular lysozyme M+ (LysM+) monocytes, with the vessel wall play pivotal roles in promoting vascular dysfunction and arterial hypertension. We here present the technique to visualize and quantify leukocyte rolling and adhesion in carotid arteries in angiotensin II (AngII)-induced hypertension in mice by IVM.
The implantation of a catheter damages the vascular wall and leads to altered blood cell responses. We compared different injection techniques and administration routes to visualize leukocytes in a LysMCre+IRG+ mouse with widespread expression of red fluorescent protein and conditional expression of green fluorescent protein in LysM+ cells. To study LysM+ cell activation, we used AngII infused mice in which rolling and adhesion of leukocytes to the endothelium is increased. We either injected acridine orange using a jugular catheter or directly though the tail vein and compared the amount of rolling and adhering cells. We found that jugular catheter implantation per se increased the number of rolling and adhering LysM+ cells in sham-infused LysMCre+IRG+ mice compared to controls. This activation was augmented in AngII-infused mice. Interestingly, injecting acridine orange directly through the tail vein did not increase LysM+ cell adhesion or rolling in sham-infused mice. We thereby demonstrated the importance of transgenic reporter mice expressing fluorescent proteins to not interfere with in vivo processes during experimentation. Furthermore, tail vein injection of fluorescent tracers might be a possible alternative to jugular catheter injections.

This manuscript describes the use of transgenic reporter mice and different administration routes of fluorescent dyes in angiotensin II-induced hypertension using intravital video microscopy of blood vessels to evaluate the activation of immune cells and their ability to roll and adhere to the endothelium.

Visualisierung von Leukozyten Rollen und Haftung bei Angiotensin II-infundiert Mäusen: Techniken und Fallstricke

Epifluorescence intravital video microscopy (IVM) of blood vessels is an established method to evaluate the activation of immune cells and their ability ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T (iNKT) cells. Patients with active RA present fewer iNKT cells, defective cell function, and excessive polarization of Th1. In this study, an RA animal model was established using a mixture of hGPI325-339 and hGPI469-483 peptides. The iNKT cells were obtained by in vivo induction and in vitro purification, followed by infusion into RA mice for adoptive immunotherapy. The in vivo imaging system (IVIS) tracking revealed that iNKT cells were mainly distributed in the spleen and liver. On day 12 after cell therapy, the disease progression slowed down significantly, the clinical symptoms were alleviated, the abundance of iNKT cells in the thymus increased, the proportion of iNKT1 in the thymus decreased, and the levels of TNF-&#945;, IFN-&#947;, and IL-6 in the serum decreased. Adoptive immunotherapy of iNKT cells restored the balance of immune cells and corrected the excessive inflammation of the body.

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

This protocol uses G6PI mixed peptides to construct rheumatoid arthritis models that are closer to that of human rheumatoid arthritis in CD4+ T cells and cytokines. High purity invariant natural killer T cells (mainly iNKT2) with specific phenotypes and functions were obtained by in vivo induction and in vitro purification for adoptive immunotherapy.

Adoptive Immuntherapie von iNKT-Zellen in Glucose-6-Phosphat-Isomerase (G6PI)-Induzierte RA-Mäuse

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...