Zentrale venöse Stenose kann sowohl aortocaval Fistel, oder AVF, primäres Versagen der Reifung, sowie späteres Versagen in einer funktionierenden Fistel verursachen. Diese Technik verwendet eine modifizierte Version eines etablierten murinen AVF-Modells, das den klinischen Verlauf des menschlichen AVF rekapituliert und leicht durch mehrere kritische Schritte gemeistert werden kann. Bestätigen Sie vor Beginn des Eingriffs einen Mangel an Reaktion auf Zehenkniff in einer neun bis elf Wochen alten C57-Black/6-Maus und legen Sie die Maus in die Supine-Position im operationschirurgischen Bereich.
Tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf, und entfernen Sie das Fell von der ventralen Seite des Halses auf den Unterbauch. Reinigen und desinfizieren Sie dann die chirurgische Stelle mit drei sequenziellen 10%povidon-jod und 70%isopropanol Peelings, und legen Sie einen chirurgischen Vorhang über das Tier. Für klemmende und punktionsstelle Exposition, legen Sie die Maus unter einem Sezieren Mikroskop und, mit steriler Technik und einem Skalpell, machen Sie einen hauttiefen, Mittellinie, Bauchschnitt von der unteren Leberkante bis knapp über dem Schambein.
Schneiden Sie die Muskulatur mit einer Schere durch, um die Bauchhöhle zu öffnen, und legen Sie einen Retraktor in den Bauch. Bewegen Sie die Eingeweide auf die rechte Seite, und wickeln Sie sie in eine salinegetränkte Gaze. Bewegen Sie die Blase und die Samenbläschen auf die kaudale Seite des Tieres, und verwenden Sie einen Mikronadelhalter, um die Mesenterie zwischen dem Rektum und dem Retroperitoneum zu sezieren, um eine vollständige Sicht auf die Aorta und die minderwertige Vena cava oder IVC zu sichern.
Dann verwenden Sie den Mikronadelhalter, um die Infrarotaorta und IVC en bloc von der seitlichen und dorsalen umgebenden retroperitonealen Gewebe zu sezieren, um das Gewebe zusammenzuklemmen, und sezieren Sie die umgebenden Gewebe, um die Aortenpunktionsstelle in etwa drei Vierteln des Abstands von der linken Nierenvene zur Aortenverzweigung freizulegen. Zur Isolierung des IVC, sezieren zwischen dem Infrarot IVC und der Aorta sofort distal auf die linke Nierenvene und erweitern die Sezieren distal auf halbem Weg zwischen der linken Nierenvene und der aortenbifurkation für postoperative infrarote IVC Beobachtung. Machen Sie ein Fenster, um das IVC von der Aorta zu trennen, und sezieren Sie das IVC vom umgebenden Gewebe.
Dann sorgfältig eine 8-0 Polyamid-Monofilament-Nähte unter dem IVC und der Aorta, bevor das Nähtedes ende durch das Fenster gezogen wird, um die Naht nur unter dem IVC zu positionieren. Um den AVF zu erstellen, biegen Sie zunächst eine 25-Spur-Nadel auf einen 45-bis 60-Grad-Winkel vier Millimeter von der Nadelspitze und klemmen die Infrarot-Aorta und IVC mit einem mikrochirurgischen Clip. Greifen Sie das Bindegewebe, das die Bifurkation umgibt, drehen Sie die Aorta medial und kauarisch, um die Punktionsstelle der Aorta leicht bis zur ventralen Seite gestreckt zu belichten, und verwenden Sie die 25-Spur-Nadel, um durch die Aorta in die IVC zu punktieren.
Wenn das Gewebe durchbohrt wurde, lassen Sie die Aorta los und ziehen Sie von der linken Seite der Aorta nach oben, um die Punktionsstelle mit dem umgebenden Gewebe zu bedecken. Entfernen Sie dann die Nadel, und drücken Sie die Punktionsstelle vorsichtig mit einem Wattestäbchen für Hämostase. Für die IVC-Stenose-Erstellung die Spitze eines 22-Spur-intravenösen Katheterlitudinalauf auf das IVC legen und den Katheter mit einem 8-0 an den IVC aufstellen. Naht.
Wenn die Naht platziert wurde, entfernen Sie den Katheter und bestätigen Primäre Hämostase, bevor Sie die Aorta und das IVC aufheben. Bedecken Sie die Punktionsstelle für eine weitere Minute, um die Hämostase zu gewährleisten, und geben Sie die Organe in ihre Bauchhöhle zurück, bevor Sie den Bauch mit 6-0 Nähten schließen. Legen Sie die Maus dann in einen individuellen, einbettfreien Käfig auf einem thermischen Stützgerät mit Überwachung bis zur vollständigen Genesung und verwenden Sie Doppler-Ultraschall, um die Durchgängigkeit der Fistel zu bestätigen.
Am siebten Tag nach dem chirurgischen Eingriff lassen sich die Fistel- und Stenosebereiche des IVC in der Längssicht leicht erkennen. Bei Mäusen, die eine Stenose ohne AVF tragen, weist das Stenosesegment eine venöse Wellenform mit einer spektralen Verbreiterung auf als scheinbetriebene Mäuse, aber ohne viel Pulsatilität. Bei Mäusen mit AVF sowie einer Stenose zeigt das Stenosesegment neben der spektralen Verbreiterung eine pulsatile Wellenform, und die zeitlich gemittelte maximale Geschwindigkeit des Flusses bei der Stenose bei Mäusen mit einer AVF mit Stenose ist signifikant höher als bei Mäusen mit Stenose allein.
Der mittlere IVC-Durchmesser bei der Stenose bei Mäusen mit Stenose allein ist ähnlich wie bei Mäusen mit aVF und Stenose. Darüber hinaus ist die prozentuale Stenose bei Mäusen, die neben einer Stenose eine AVF haben, entweder das vor- oder nachgelagerte Segment als Referenz signifikant größer. Wenn Sie den IV-Katheter und den IVC zusammenbinden, ist es wichtig, sie fest zu binden, um eine reproduzierbare Stenose zu erzeugen.
Die Anwendung dieses Verfahrens auf murinen venöse Transplantatplantation Modell könnte beantworten, wie die Okklusion der venösen Transplantatstenose zu überwinden.
