Name: deep vein thrombosis induced by stasis in mice monitored by high frequency ultrasonography
Uploaded: 2018-04-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography at JoVE.com

이 작품은 심장과 스트로크 캐나다 재단에서 교부 금에 의해 그리고에 모리스와 벨라 Fainman 가족 기초에 의해 지원 되었다. 저자에 대 한 그녀의 기술 VEVO770 초음파 이미징 시스템 베로 미를 감사 하 고 싶습니다.

모든 절차는 기관 동물 관리 위원회의 맥 길 대학 몬트리올, QC, 캐나다에 의해 승인 되었다. 필요한 모든 장비는 테이블에 나열 된 나.
1. murine (C57BL/6J) IVC 스테이 시스 프로토콜
<ol><li>수술 준비 참고: 이것은 생존 수술 하 고 따라서, 적절 한 무 균 기술을 항상 따라 해야. 이 포함 모든 물질이 가까이 다는 것을 확인, 청소 전과 사용 사이 악기를 살 균 하 고 모든 멸 균 자료에 대 한 작업 표면에 살 균 영역을 지정 합니다.<ol>
<li>모든 수술 기구와 고압에 의해 재료를 소독. 유리 구슬 소독 기 소독 동물 일 경우 더 이상의 절차 한 번에 완료 되 고 사이 악기 팁 충분 하다.</li>
		<li>100% 산소와 2.5 %isoflurane 혼합물으로 8-10 주 오래 된 C57Bl/6 남성 마우스 anesthetize 참고: 산소와 필요한 isoflurane의 흐름을 조정 합니다.</li>
		<li>집게와 발가락 사이 동물의 뒷 발을 곤란 하 게 하 여 anesthetization를 확인 합니다. 핀치에서 응답이 동물 마 취 나타냅니다.</li>
		<li>느린 방출 진통제 (buprenorphine) 피하 주사를 통해 관리 합니다. 마우스 1 kg의 몸 무게 (1 mg/kg) 당 진통제의 1 밀리 그램의 복용량을 제공 합니다.</li>
		<li>절차 동안 아무런 각 막 건조 되도록 동물의 두 눈에 눈 연 고를 배치 합니다.</li>
		<li>0.2-몸 무게의 10 g 당 isotonic 체액의 0.5 mL을 피하 관리 합니다.</li>
		<li>외과 테이프를 사용 하 여 수술 테이블에 장소에 동물을 수정. 복 부를 노출 하는 부정사 위치에 동물을 놓습니다. 저체온증을 방지 하기 위해가 열 패드에 수술을 수행 합니다.</li>
		<li>머리에서에서 제거 마우스의 복 부 제 모 크림 1-2 분 복 부 지역 거 즈와 깨끗 하 고 증류수, 지우기에 대 한 응용 프로그램에 의해 필요한 경우.</li>
		<li>또는, 작은 전기 면도기로 면도 하 여 복 부에서 머리를 제거 합니다.</li>
		<li>어떤 절 개 하기 전에 Baxedin (액체 Gluconate BP 솔루션)와 복 부를 소독. 에탄올 알코올의 증발에 의해 발생 하는 과도 한 열 손실을 방지 하기 위해 거 즈로 가볍게 적용 됩니다.</li>
	</ol></li>
	<li>열 등 한 베 나 정 맥 (IVC)의 노출
	<ol>
<li>수술가 위를 사용 하 여 복 부 구멍 여 개복 술을 수행 합니다.<ol>
<li>낮은 복 부에 집게와 함께 피부를 리프트 하 고 수직 절 개는 교육의 양쪽에 평행 하 게 알바. 왼쪽 또는 오른쪽에 교육의 첫 번째 절 개를 만들기 연산자의 handedness에 따라 알바. 절 개는 중간에서 초음파 이미징 나중에 지원 하기 위해 이루어집니다.</li>
			<li>복 부의 위쪽에 두 번째, 가로 절 개를 확인 합니다. 참고: 복 부에 침투, 시는 근육 "천을"와 있어야 다음 복 부 장기에 어떤 손상을 방지 하기 위해 수술가 위로 관통 합니다.</li>
			<li>동물의 복 부 근육 층에 수직 및 수평 절 개를 반복 합니다. 근육을 아래 장기 손상 복 부에 침투 하는 동안 텐트를 해야 합니다. 주의: 리프트 피부와 내장 및 다른 내부 장기에서 근육을 그들을 펑크 절 때.</li>
		</ol>
</li>
		<li>피부와 근육 절 개 노출 복 부 구멍을 멀리 접어.</li>
		<li>Isotonic 솔루션은 상처의 양쪽에 적신 거 즈를 적용 하 고 내장을 외부화. 내장의 외부화를 지원 하기 위해 복 부의 양쪽에 압력을 적용 됩니다. 목화 제보 주걱으로 부드러운 움직임을 사용 하 여 내장을 이동. Isotonic 솔루션에 거 즈를 흡수 하 고 외부화 창 위에 그것을 배치.<ol>
<li>거 즈 조직에 배치 하기 전에 미리 습 되어야 한다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>어떤 복 막 지방, 옆으로 이동 하 고 신장과 장 골 정 맥 사이 IVC 노출.</li>
		<li>명백한 측 지점의 초기 id를 확인 합니다. 측면 지점으로 작은 표시 되지만 중요 한 정 맥 IVC, 신장 및 장 골 사이 분기 하는 혈관. 맥 관 구조는 쥐 사이 크게 달라질 수 있습니다. 마우스는 IVC의 한쪽 또는 양쪽에 측 분기 존재 할 수 있습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>측면 지점의 결 찰 참고: 사이드 분기 존재 하는 경우 다음 절차 뒤에 각 한. 없는 경우 4 단계로 진행: 아래는 IVC 초기 봉합 배치. IVC의 결 찰 사이트 즉시 원심 측 분 지의 존재에 왼쪽된 신장 정 맥에 있을 것입니다.<ol>
<li>측 분기의 각 측에 둔 해 부를 수행 합니다. 무딘 해 부 과정이 반복적으로 주변 혈관을 손상 없이 근 막 돌파 하기 위하여 부드러운 압력, 무뚝뚝한 겸 자 여. 주의: Puncturing 또는 정 맥을 손상 하지 마십시오.</li>
		<li>분기 들어올린 통과 정 맥 아래 6-0 비단 봉합의 섹션. 항상 해제 또는 선박을 이동 하는 때 주의. 혈관 주위 지방 질을 잡아 것이 최상 이다, 그렇지 않으면 혈관 손상의 위험이 있다.</li>
		<li>표준 수술 매듭 묶는 기법을 사용 하 여 측면 지점 주위 수술 결 찰 봉합 집게를 사용 하 여 확인 하십시오. 완전 결 찰 100% 정 맥의 폐색을 보장 하기 위해 수행 됩니다. 적어도 3 개의 동 점 자유 투를 사용 하 여 보호 하기 위한 고 결 찰.</li>
		<li>모든 나머지 측면 지점에 대 한 1.3 단계를 반복 합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>IVC에서 복 부 대동맥의 해 부
	<ol>
<li>왼쪽된 신장 정 맥에서 즉시 원심 IVC 주위 무딘 해 부를 수행 합니다. 복 부 대동맥 근 막 통해 IVC에 연결 되어, 따라서 IVC 및 복 부 대동맥 주위 초기 무딘 해 부 합니다. 주의: puncturing 또는 정 맥을 손상 하지 마십시오. 파열 하거나 어느 배를 찔린 마십시오. 이것은 혈관 손상에 대 한 높은 위험 절차의 가장 중요 한 부분입니다.</li>
		<li>계속 때까지 분명 윈도우는 IVC와 대동맥 사이 무딘 해 부를 통해 부드러운 압력을 적용.</li>
	</ol></li>
	<li>봉합 사 배치 및 IVC 결 찰
	<ol>
<li>IVC와 복 부 대동맥의 아래 6-0 비단 봉합의 부분을 전달 합니다.</li>
		<li>IVC와 대동맥 사이 창을 통해 봉합을 찾습니다. 집게를 사용 하 여 봉합 하 고 복 부 대동맥 사이 IVC 스레드. 스레드를 통해 봉합 신중 하 게, 풀/펑크 IVC 및 복 부 대동맥을 하지 않으려고 합니다.</li>
		<li>게는 IVC 주위 수술 결 찰 봉합 겸, 정 맥의 총 폐색을 보장. 다시, 왼쪽된 신장 정 맥에서 즉시 말 초는 결 찰을 확인 합니다.</li>
		<li>3 개의 봉합은 결 찰을 확보 하 여 throw. 참고: 그것은 또한 IVC와 대체 옵션으로 두를 분리 하기 전에 대동맥의 아래 봉합을 전달할 수 있습니다. 또는 7-0 Prolene 봉합 측면 지점과 IVC의 결 찰에 대 한 사용할 수 있습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>상처 폐쇄 및 수술 후 관리
	<ol>
<li>복 부 대동맥 남아 있다 중단 하 고 모든 측면 지점 출혈 되었습니다 확인 합니다. IVC는 동 공이 확장 되어 나타납니다 결 찰 사이트와 혈액에서 원심 흐름 표시 됩니다.</li>
		<li>모든 복 막 지방 및 내장 복 부 구멍에 다시 배치 합니다.</li>
		<li>상처 봉합 집게와 6-0 비단 봉합 사를 사용 하 여 닫습니다. 실행 중인 봉합 (간단한 연속)을 사용 하 고 봉합 너무 꽉 되지 것입니다 확인 하십시오. 꽉 봉합 동물과 깨어나면 그것의 감 금 소의 주위에 이동 될 때 파열 됩니다.<ol>
<li>또는, PDS, Ethilon, Vicryl, Dexon, 또는 스테인리스 클립을 사용 하 여 상처 폐쇄에 대 한.</li>
		</ol>
</li>
		<li>먼저 적절 한 봉합 기술을 매를 사용 하 여 복 부 근육의 층 봉합</li>
		<li>피부에 대 한 봉합 기술을 반복 하 고 충분 한 상처 폐쇄 확인 합니다. 참고: 여러 동물에 대 한 동일한 봉합 바늘과 스레드를 사용 하는 경우 각 사용 전에 70% 에탄올에 모두 소독.</li>
		<li>동물 마 취 가스에서 제거 하 고 적어도 30 분 동안 34 ° C 배양 기에 넣어.</li>
		<li>다시, 0.2-0.5 mL 몸 무게의 10 g 당 isotonic 체액의 피하 관리 합니다. 체액 주어질 수 있다 다음 일에 수술 몸 무게를 유지 하기 위해 필요한 경우.</li>
		<li>성공적인 수술을 보장 하는 동물의 전반적인 건강을 평가 복구까지 동물을 모니터링 합니다. 주의: 이 같은 침략 절차에 대 한 약간의 돌출된 자세를 기대 하지만 동물 빠르면 30 분 후 작업이 정상적으로 작동 합니다.</li>
		<li>그것의 자신의 감 금에 있는 동물을 놓고 완전히 복구 될 때까지 다른 동물 들과 함께 그것을 배치 하지 마십시오.</li>
		<li>다시 최대 48 h postop에 대 한 진통제를 매일 관리 합니다.</li>
		<li>복구에 동물 동안 감 금 소의 바닥에 음식을 놓습니다. 다른 특별 한 치료는 일반적으로 필요 하지 않습니다.</li>
		<li>빨갛게, 붓기, 또는 방전 및 감염의 다른 증상에 대 한 상처 사이트를 검사 합니다.</li>
		<li>필요한 경우 7-10 일 후에 봉합을 제거 합니다.</li>
		<li>수술은 성공 하는 경우 즉시 안락사를 수행 (예를 들어, 중요 한 혈관 손상 및 혈액 손실) 또는 동물 수술 치료와 개선 되지 않습니다. 안락사는 48 h postop에서 일반적으로 수행 됩니다. 더 이상 실험에 대 한 7-0 Prolene 사용 하 여 측면 가지는 IVC와 5-0 Vicryl 봉합 복 부 구멍을 선.<ol>
<li>앞에서 설명한, 제외 하 고 5 %isoflurane로 유도에 동물의 anesthetization에 의해 안락사를 수행 합니다. 이것은 100% CO2 마 취 동안 질 식 옵니다.</li>
			<li>질 (하트 비트 및 아무 호흡의 손실)에 의해 안락사의 확인 후 완전 한 안락사를 위해 자 궁 경부 전위를 수행 합니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>2. 고주파 초음파 프로토콜
참고:이 프로토콜은 레이디 데이비스 연구소 설치류 형질 코어 SOP 고주파 초음파 이미징에서 적응. 이 프로토콜 수술 24 시간 후, 실시 하지만 동물 수술에 잘 응답으로 빨리 할 수 있습니다. 프로토콜 건강 한 쥐에서 언제 든 지 실행 될 수 있습니다 그리고 수술 전후 비교를 그렇게 자주 이루어집니다.
<ol><li>
동물의 준비
	<ol>
<li>유도 챔버에서 동물을 배치 하 고 100% 산소와 2.5 %isoflurane 혼합물으로 동물을 anesthetize.</li>
		<li>심 박수 및 온도 모니터를 켭니다. 절차 동안 동물을 따뜻하게 유지 하는 테이블 위에 위치 열 램프.</li>
		<li>유도 챔버에서 동물을 제거 하 고 각 막 건조 방지 하기 위해 눈 윤 활 유를 적용. 분석 플랫폼에 동물을 동물의 입/코에 마 취 튜브를 부착 하십시오.</li>
		<li>따뜻한 초음파 37 ° C에 젤 하 고 동물의 복 부에 젤을 놓습니다. 초음파 젤은 펌프 물 젤 병 주위에 감싸인 코일을 통해 따뜻한 물 난방 시스템을 사용 하 여 예 열.</li>
		<li>심장 박동 측정 (필요한 경우), 분석 플랫폼의 4 전극에 전극 젤을 넣고 수술 테이프로 플랫폼/전극에 동물의 발을 해결. 장소는 IVC의 이미징 부정사 위치에 동물. 이미징 시스템 초음파 분석 플랫폼은 예 열 하 고 동물을 모니터링 하기 위한 전극 포함을 포함 합니다.</li>
		<li>온도 측정용 온도계에 전극 젤을 넣고 동물의 항문에 삽입.</li>
		<li>열 램프 및 isoflurane 그 동물 편안 하 게, 30-70 bpm 사이 호흡 그리고 37 ° c.에 유지 되도록 필요에 따라 조정</li>
		<li>필요한 경우, 동물의 복 부를 면도 하거나 제 모 크림으로 털을 제거 합니다. 1-2 분 동안 적용 하 고 깨끗 한 거 즈와 증류수로 닦아. 참고: 너무 많은 머리는 이미지의 품질을 발생할 수 있습니다.</li>
		<li>거 즈 또는 어떤 초과 초음파 젤을 잡으려고 동물의 측면에 배치 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
IVC 및 혈전 영상
	<ol>
<li>이미징 소프트웨어를 켜고 새로운 연구를 시작.</li>
		<li>이미징에 대 한 적절 한 scanhead를 선택 합니다. 복 부 장기는 scanhead 여기 사용 (주파수: 35 MHz, 초점 거리: 12.8 m m).</li>
		<li>동물에 대 한 관련 정보를 기록 합니다. 이 동물을 포함할 수 있습니다 ID, 성별, 체중, 생년월일, 스트레인, 등등.</li>
		<li>그것은 동물에 초음파 젤 감 동적 때까지 아래로 scanhead를 낮춥니다.</li>
		<li>동물의 2 차원 이미징 시작 scanhead 조사를 시작 합니다. 이 모드에서 이미지는 2 차원, 회색의 다양 한 음영으로 표시 됩니다.</li>
		<li>IVC 및 복 부 대동맥 z-비행기를 통해 scanhead 이동 하면서 x-및 y-비행기를 통해 마우스 플랫폼을 이동 하 여 찾습니다. 참고: 혈액이 혈관의 벽 화이트와 내부 혈액 거의 나타납니다 블랙. 복 부 대동맥 달아 고동치는 두꺼운 벽, 이미지 화면는 scanhead 이동 하 고 아래로 IVC 얇은 벽과 압축/쉽게에 확장 하는 동안. 결 찰 사이트와 혈관을 넓힐 것 이다 정 맥 벽 지점에 올 것 이다 명백한 될 것입니다. 안으로 형성 하는 어떤 혈전 초음파 영상에서 고체 되며 정 맥 벽이 하는 것 처럼 쉽게 압축 하지 않습니다. 정 맥 결 찰, 아니 혈전 형성은 위에 압축 됩니다.</li>
		<li>위치에 IVC와 결 찰 사이트 센터 그들, 초음파의 초점에 가장 정확한 이미지를 달성 하기 위하여.<ol>
<li>이미지 너무 어두운 명확 하 게 볼 젤을 조정 하 고 목화 제보 주걱으로 모든 기포를 제거 하는 경우.</li>
			<li>필요한 경우 scanhead 왼쪽 이나 오른쪽으로 45 ° 기울기와 정 맥을 명확 하 게 볼 수 있는 동물 플랫폼을 재조정. 이 경우는 scanhead 간섭이 이루어집니다. 이 시나리오에서는 정 맥을 봉합을 피하기 위해 측면 각도에서 이미지 필요 합니다. 참고: 이미지 간섭은 어두운 피부 패치를 동물, 불 쌍 한 상처 봉합 배치, 또는 초음파 젤에 거품에 의해 가장 자주 발생 합니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>소프트웨어를 사용 하 여 어떤 원하는 구조를의 사진을 찍어 고 어떤 측정 도구를 사용 하 여 측정. 일반적인 측정은 혈전의 단면적 또는 결 찰 사이트의 너비를 포함합니다.</li>
		<li>펄스 파 도플러 혈 류 측정을 이미징 모드를 변경 합니다. 이 모드에서는 혈관 혈액 흐름의 이미징 및 다른 변수 간의 흐름 속도의 측정.</li>
		<li>동물의 후부 끝 낮은 분석 플랫폼을 기울기.</li>
		<li>그것은 동물의 후부 끝에서 약 30 °의 각도에서 젤 연락는 scanhead의 각도/위치 변경.</li>
		<li>동물 플랫폼과 scanhead를 재조 정할. 필요한 경우는 IVC와 결 찰을 재배치 합니다.</li>
		<li>스테이 시스를 확인 하 고 원하는 어떤 이미지를 내 고 사이트 주위 혈액 흐름 측정을 확인 합니다. 혈액 흐름의 일반적인 측정에는 평균 속도, 최대 속도, 또는 중간 속도 포함 됩니다.</li>
		<li>어떤 측정 또는 촬영 한 이미지를 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
청소 및 동물성 복구
	<ol>
<li>초기 위치를 초기 위치로, 또한 동물 플랫폼을 위치를 scanhead를 올립니다.</li>
		<li>거 즈와 동물에서 과잉 젤을 제거 합니다. 이렇게 부드럽게 상처 봉합 파열 하지 것입니다 있도록.</li>
		<li>동물의 항문에서 온도계를 제거 하 고 플랫폼에서 동물을 걸릴.</li>
		<li>그것의 감 금 소 및 34 ° C 배양 기에서 동물을 놓습니다.</li>
		<li>복구까지 동물을 모니터링 합니다. 절차는 매우 작고 비-침략 적. 동물 신속 하 게 깨울 것 이다. 이 프로토콜의 섹션 1.6 다음 일에 동물을 모니터링을 계속 합니다.</li>
		<li>거 즈와 소독 제 동물 플랫폼을 청소.</li>
		<li>거 즈와 증류수 깨끗 scanhead 지우기. 주의: scanhead를 아주 부드럽게 청소 및 증류수 만으로.</li>
		<li>다음 동물에 대 한 2 단계를 반복 합니다.<ol>
<li>모든 과목과 함께 한다면, 모든 이미지와 녹음 저장 되었습니다 확인 합니다. 그런 다음 모든 장비 및 소프트웨어 해제 합니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombogenesis+with+continuous+blood+flow+in+the+inferior+vena+cava.+A+novel+mouse+model.">Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model.</a> Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).</li></ol>

저자는 공개 없다.

스테이 시스 모델을 사용 하 여 성공적인 정 맥 혈전 형성에 대 한 몇 가지 중요 한 단계가 있습니다. 유도 정 맥 혈전 증의 열 등 한 베 나 정 맥과 대동맥 주변 지방의 축적으로 인해 오래 된 쥐에 있는 더 많은 도전 이다. 이상적으로,이 절차를 진행 하는 쥐 8-10 주 오래 된 해야 합니다. 신중 하지 무딘 해 부 및 합자는 IVC 내 피 손상을 유도를 취해야 한다. 또한, 수술 후 적어도 30 분 동안 34 ° C 배?...

정 맥 혈전 색 전 증 (VTE), 깊은 정 맥 혈전 증 (DVT) 폐 색 전 증의 구성 된 심근 경색 및 뇌졸중 후 심장 혈관 죽음의 세 번째 주요 원인입니다. 그것은 1에서 5001의 연간 발생률을 인구의 1-2%에 영향을 미치는 일반적인 조건. VTE 이어질 수 있습니다: 1) 폐 색 전 증; 통해 죽음 만성적인 다리 통증, 붓기, 및 궤; 특징 2) 후 thrombotic 증후군 또는 3) 중요 한 만성 호흡 타협의 결과로 만성 폐 고혈압. VTE는 다중 요인 질병 이며 그것은 전에 백 년 이상 설명으로 혈액의 흐름, 혈관 벽, 또는 hypercoagulable 국가 응고 fibrinolytic 시스템 사이의 균형의 붕괴 때문에 손상의 스테이 시스에서 발생할 수 있습니다. Virchow에 의해 Virchow의 3 인조로 알려져 있다.
대부분의 경우에서 그것은 인간의 DVT 샘플을 얻을 수, 때문에 연구원은 DVT의 실험 동물 모델을 개발 했습니다. 쥐2, 마우스3, 토끼4, 돼지5,6개 및 비 인간 영장류7 을 포함 하 여 여러 동물 사용 되었습니다. 쥐 유전자 변형 될 수 있으며 DVT를 공부 하는 가장 자주 사용된 동물. 모든 동물에서의 자발적인 DVT 하지 쥐에서 관찰 됩니다. 따라서, 정 맥 벽의 물리적 또는 화학적 변경 마우스에서 혈전 증을 만드는 데 사용 됩니다. 우리는 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC) 마우스8,,910의 혈전 증을 유발 하 이전 제 2 철 염화 모델을 이용 했다. 이 분 이내 폐색 혈전을 안정적으로 생산의 장점이 고 급성 DVT 동안 항 응고 제와 항 혈소판 약물의 역할을 조사 하는 데 사용할 수 있습니다. 그러나, 그것은 터미널 절차입니다. 따라서, 공부 하 고 급성과 만성 DVT, 스테이 시스 모델 더 적당 하다. 이 모델에서는 혈전 형성 IVC, DVT 개발 Virchow의 3 인조의 요소 중 하나에서 혈액 흐름의 완전 한 중단에 의해 유도 된다. DVT 형성 FeCl3 모델11에 비해 이점이 해상도 공부 하 고이 모델을 사용할 수 있습니다.
혈전 형성 및 해상도 마이크로 이미징-고주파 초음파 시스템12을 사용 하 여 시간이 지남에 따라 비-침략 적 방법을 개발 했습니다. 우리는 이전 측정 초음파에 의해 정 맥 혈전 증의 혈전 병 적 얻은 호의 상관을 증명 하고있다. 우리가 측정 초음파 상관 혈전 무게와 혈전 영역 histochemistry9,10정량으로 얻은 두 후속 연구에서 확인 했습니다. 더 중요 한 것은, 우리는 높은 주파수 초음파 쥐12에서 깊은 정 맥 혈전의 형성을 모니터링 하는 데 사용할 수 있습니다 보여주 있다. 그것은 또한 비-침략 적 방법으로 혈전 해상도 척도를 사용할 수 있습니다.
여기, 우리는 스테이 시스 유도 혈전 증 마우스 모델 및 어떻게 혈전 형성을 모니터링할 수 있습니다 비 접촉 고주파 초음파를 사용 하 여 시간이 지남에 사용 하 여 혈전 형성을 허용 하는 프로토콜을 설명 합니다.

<table><tbody><tr><td>6-0 perma-hand silk suture</td><td>Ethicon</td><td>706G</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>20830-00</td><td></td></tr><tr><td>Suture tying forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>20830-00</td><td></td></tr><tr><td>blunt forceps (straight and curved)</td><td>Fine Science Tools</td><td>20830-00</td><td></td></tr><tr><td>Needle Driver</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>Moria Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15396-00</td><td></td></tr><tr><td>1ml syringes</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>26G needles</td><td>Becton Dickinson &amp;amp; Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>VEVO 770 High Resolution Imaging System</td><td>Visualsonics</td><td>No longer sold</td><td></td></tr><tr><td>SR Buprenorphine</td><td>ZooPharm</td><td></td><td>Given to LDI by Vet</td></tr><tr><td>Surgery Microscope</td><td>Leica</td><td>Leica M651</td><td></td></tr><tr><td>Systan eye oinment</td><td>Alcon</td><td>288/28062-0</td><td></td></tr><tr><td>2x2 sterile Gauze</td><td>CDMV</td><td>#104148</td><td></td></tr><tr><td>Cotton Tip Applicators</td><td></td><td></td><td>from JGH</td></tr><tr><td>Transpore hypoallergenic surgical tape</td><td>CDMV</td><td>#7411</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasound gel (Aquasonic-100)</td><td>Dufort &amp;amp; Lavigne</td><td>#AKEN4061</td><td></td></tr><tr><td>Incubator</td><td></td><td></td><td>From JGH</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Dispomed</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment</td><td>Dispomed</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hair remover</td><td>Nair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Water heated hard pad</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>#HHP-2</td><td></td></tr><tr><td>Gaymar heater water pump TP500</td><td>MATVET Inc.</td><td>#R-500305</td><td></td></tr><tr><td>Infra-red heating lamp</td><td>electrimat inc.</td><td>#1R175R-PAR</td><td></td></tr><tr><td>Mouse rectal temperature prope</td><td>emkaTECHNOLOGIES</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterile water</td><td></td><td></td><td>From JGH</td></tr></tbody></table>

deep vein thrombosis induced by stasis in mice monitored by high frequency ultrasonography

정 맥 혈전 증 1에서 500의 연례 부각 인구의 1-2%에 영향을 미치는 일반적인 상태 이다. 정 맥 혈전 증 폐 색 전 증 또는 결과 만성적인 다리 통증, 붓기, 및 궤, 특징 후 thrombotic 증후군 또는 만성 폐 고혈압 인 중요 한 만성 통해 죽음으로 이어질 수 있습니다 호흡기 타협. 가장 일반적인 심혈 관 질환 심근 경색 및 허 혈 성 뇌졸중 후 이며 암, 조직의 질환, 수술 등 주요 외상 다른 장애의 과정을 복잡 하 게 수로 모든 의료 분야에 대 한 임상 도전 이다.
실험 모델은 이러한 메커니즘을 연구 하는 데 필요한. 스테이 시스 모델 일관성 혈전 크기와 혈전의 정량 금액을 유도합니다. 그러나, 그것은 체계적으로 열 등 한 베 나 정 맥 혈전 크기에서 변화 및 모든 잘못 된 데이터 해석에의 측 지점 선 하는 데 필요한. 초음파를 사용 하 여 혈전 크기를 측정 하는 비-침략 적 기술을 개발 했습니다. 이 기술을 사용 하 여, 우리가 평가할 수 혈전 개발 및 해상도 같은 동물에서 시간이 지남에. 이 방법은 마우스 교체, 감소, 및 연구에 있는 동물의 구체화의 원리와 일치 하는 정 맥 혈전 증의 정량화에 필요한 수를 제한 합니다. 우리는 초음파로 혈전 무게와 측정으로 혈전 크기 상관의 조직학 분석 얻은 증명 하고있다. 따라서, 현재 연구에 높은 주파수의 초음파를 사용 하 여 모니터링 하는 방법 열 등 한 베 나 정 맥 stasis 모델을 사용 하 여 마우스에 깊은 정 맥 혈전 증을 유발 하는 방법을 설명 합니다.

스테이 시스 정 맥 혈전 증 모델
스테이 시스 모델에서 쥐 취는, 그리고 절 개 폭 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC)로 이루어집니다. 절 개 초음파 프로브와 함께 방해 하지 것 이라고 하는 방식으로 중간 개복 술 대신 마우스의 왼쪽 또는 오른쪽에 이루어집니다. 복 부 근육과 피부는 배 다시 IVC (그림 1</stron...

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Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

현재 프로토콜 스테이 시스 모델을 사용 하 여 정 맥 혈전 증을 얻기에 단계를 설명 합니다. 또한, 우리는 시간이 지남에 혈전 형성 및 해상도 측정 하는 비-침략 적 방법을 사용 하는.

스테이 시스 고주파 초음파에 의해 모니터링 하는 쥐에 의해 유도 된 깊은 정 맥 혈전 증

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

9.8K 조회수.  McGill University. 현재 프로토콜 스테이 시스 모델을 사용 하 여 정 맥 혈전 증을 얻기에 단계를 설명 합니다. 또한, 우리는 시간이 지남에 혈전 형성 및 해상도 측정 하는 비-침략 적 방법을 사용 하는.

비디오: Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential therapeutic compounds (1). New compounds to be utilized in the treatment and prevention of DVT are currently being developed. The delivery of potential therapeutic antagonist compounds to an affected thrombosed vein has been problematic. In the context of therapeutic applications, a model that uses partial stasis and consistently generates thrombi within a major vein has been recently established. The Electrolytic Inferior vena cava Model (EIM) is mouse model of DVT that permits thrombus formation in the presence of continuous blood flow. This model allows therapeutic agents to be in contact with the thrombus in a dynamic fashion, and is more sensitive than other models of DVT (1). In addition, this thrombosis model closely simulates clinical situations of thrombus formation and is ideal to study venous endothelial cell activation, leukocyte migration, venous thrombogenesis, and to test therapeutic applications (1). The EIM model is technically simple, easily reproducible, creates consistent thrombi sizes and allows for a large sample (i.e. thrombus and vein wall) which is required for analytical purposes.

Electrolytic Inferior Vena Cava Model EIM of Venous Thrombosis

The electrolytic induction of endothelial activation to the internal surface of the Inferior Vena Cava results in venous type thrombus formation due to endothelial activation and partial blood stasis, two components of Virchow's triad.

정맥 혈전증의 전해 하부 대정 맥 모델 (EIM)

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential ...

연구

의학

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to assessing pathology post-mortem in animals euthanized at multiple time points in different cohorts, which increases the number of mice needed for a study. Imaging mice in longitudinal studies can track the progression of disease in individual animals, reducing the number of mice needed. Advances in ultrasound technology have allowed for the detection of micrometer-level changes in tissues. Ultrasound has been used to study follicle maturation in ovaries and xenograft growth but has not been applied to morphological changes in the mouse uterus. This protocol examines the juxtaposition of pathology with in vivo imaging comparisons in an induced endometrial cancer mouse model. The features observed by ultrasound were consistent with the degree of change seen by gross pathology and histology. Ultrasound was found to be highly predictive of the observed pathology, supporting the incorporation of ultrasonography into longitudinal studies of uterine diseases such as cancer in mice.

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

This protocol describes a method for monitoring the progression of morphological changes over time in the uterus in an inducible mouse model of endometrial cancer using ultrasound imaging with correlation to gross and histological changes.

마우스에서 종양 억제인자 Arid1a 및 Pten 의 Pax8 지시 결실에서 자궁내막암 진행의 비침습적 초음파 평가

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

암 연구학

혈관 클립을 사용한 마우스 암 모델에서 최적화된 정맥 혈전증 분석

Venous Thrombosis Assay in a Mouse Model of Cancer

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis (CAT). Deep venous thrombosis is a common complication in cancer survivors and can be potentially fatal. The current murine venous thrombosis models typically involve a complete or partial mechanical occlusion of the inferior vena cava (IVC) using a suture. This procedure induces a total or partial stasis of blood and endothelial damage, triggering thrombogenesis. The current models have limitations such as higher variability in clot weights, significant mortality rate, and prolonged learning curve. This report introduces surgical refinements using vascular clips to address some of these limitations. Using a syngeneic colon cancer xenograft mouse model, we employed customized vascular clips to ligate the infrarenal vena cava. These clips allow residual lip space similar to a 5-0 polypropylene suture after IVC ligations. Mice with the suture method served as controls. The vascular clip method resulted in a consistent reproducible partial vascular occlusion and greater clot weights with less variability than the suture method. The larger clot weights, greater clot mass, and clot to the IVC luminal surface area were expected due to the higher pressure profile of the vascular clips compared to a 6-0 polypropylene suture. The approach was validated by gray scale ultrasonography, which revealed consistently greater clot mass in the infrarenal vena cava with vascular clips compared to the suture method. These observations were further substantiated with the immunofluorescence staining. This study offers an improved method to generate a venous thrombosis model in mice, which can be employed to deepen the mechanistic understanding of CAT and in translational research such as drug discovery.

저자 스포트라이트: 설치류 모델에서 암 관련 혈전증 연구 발전 

This article aims to present an optimized method for assessing venous thrombosis in a mouse cancer model, using vascular clips to achieve venous ligation. Optimization minimizes variability in thrombosis-related measurements and enhances relevance to human cancer-associated venous thrombosis.

암의 마우스 모델에서 정맥 혈전증 분석

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis ...

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus formation in veins remain obscure. Lack of mobility (e.g., after surgery or long-haul flights) is one of the main factors leading to DVT. The pathophysiological consequence of the lack of mobility is blood flow stagnation in venous valves. Here, a model is described that mimics such flow disturbance as a thrombosis-driving factor. In this model, partial flow restriction (stenosis) in the inferior vena cava (IVC) is created. Closure of about 90% of the IVC lumen for 48 h results in development of thrombi structurally similar to those in humans. The similarities are: i) most of the thrombus volume is red, i.e., consists of red blood cells and fibrin, ii) presence of a white part (lines of Zahn), iii) non-denuded endothelial monolayer, iv) elevated plasma D-Dimer levels, and v) possibility to prevent thrombosis by low molecular weight heparin. Limitations include variable size of thrombi and the fact that a certain percentage of wild-type mice (0 - 35%) may not produce a thrombus. In addition to visual observation and measurement, thrombi may be visualized by non-invasive technologies, such as ultrasonography, which allows for monitoring the dynamics of thrombus development. At shorter time points (1 - 6 h), intravital microscopy may be applied to directly observe events (e.g., recruitment of cells to the vessel wall) preceding thrombus formation. Use of this method by several teams around the world has made it possible to uncover basic mechanisms of DVT initiation and identify potential targets that might be beneficial for its prevention.

We describe here stenosis in the inferior vena cava as a murine model of deep vein thrombosis. This model recapitulates blood flow restriction, one of the major triggers of venous thrombosis in humans.

열 등 한 베 나 정 맥의 협 착 증: 깊은 정 맥 혈전 증의 Murine 모델

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

면역학 및 감염병학

Murine Model of Central Venous Stenosis using Aortocaval Fistula with an Outflow Stenosis

Central venous stenosis is an important entity contributing to arteriovenous fistula (AVF) failure. A murine AVF model was modified to create a partial ligation of the inferior vena cava (IVC) in the outflow of the fistula, mimicking central venous stenosis. Technical aspects of this model are introduced. The aorta and IVC are exposed, following an abdominal incision. The infra-renal aorta and IVC are dissected for proximal clamping, and the distal aorta is exposed for puncture. The IVC at the midpoint between the left renal vein and the aortic bifurcation is carefully dissected to place an 8-0 suture beneath the IVC. After clamping the aorta and IVC, an AVF is created by puncturing the infra-renal aorta through both walls into the IVC with a 25 G needle, followed by ligating a 22 G intra-venous (IV) catheter and IVC together. The catheter is then removed, creating a reproducible venous stenosis without occlusion. The aorta and IVC are unclamped after confirming primary hemostasis. This novel model of central vein stenosis is easy to perform, reproducible, and will facilitate studies on AVF failure.

An aortocaval fistula was created by puncturing the murine infra-renal aorta through both walls into the inferior vena cava and was followed by creation of a stenosis in its outflow via partial ligation of the inferior vena cava. This reproducible model can be used to study central venous stenosis.

유출 협착증을 가진 Aortocaval 누공을 사용하여 중앙 정맥 협착증의 뮤린 모형

Central venous stenosis is an important entity contributing to arteriovenous fistula (AVF) failure. A murine AVF model was modified to create a partial ...

Analysis of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage with High Frequency Transcranial Duplex Ultrasound

Cerebral vasospasm that occurs in the weeks after subarachnoid hemorrhage, a type of hemorrhagic stroke, contributes to delayed cerebral ischemia. A problem encountered in experimental studies using murine models of SAH is that methods for in vivo monitoring of cerebral vasospasm in mice are lacking. Here, we demonstrate the application of high frequency ultrasound to perform transcranial Duplex sonography examinations on mice. Using the method, the internal carotid arteries (ICA) could be identified. The blood flow velocities in the intracranial ICAs were accelerated significantly after induction of SAH, while blood flow velocities in the extracranial ICAs remained low, indicating cerebral vasospasm. In conclusion, the method demonstrated here allows functional, noninvasive in vivo monitoring of cerebral vasospasm in a murine SAH model.

The aim of this manuscript is to present a sonography-based method that allows in vivo imaging of blood flow in cerebral arteries in mice. We demonstrate its application to determine changes in blood flow velocities associated with vasospasm in murine models of subarachnoid hemorrhage (SAH).

고주파 두개골 이중 초음파를 가진 수브라크누이드 출혈의 뮤린 모형에 있는 뇌 혈관경련의 분석

Cerebral vasospasm that occurs in the weeks after subarachnoid hemorrhage, a type of hemorrhagic stroke, contributes to delayed cerebral ischemia. A ...

신경과학

Multiphoton Intravital Imaging for Monitoring Leukocyte Recruitment during Arteriogenesis in a Murine Hindlimb Model

Arteriogenesis strongly depends on leukocyte and platelet recruitment to the perivascular space of growing collateral vessels. The standard approach for analyzing collateral arteries and leukocytes in arteriogenesis is ex vivo (immuno-) histological methodology. However, this technique does not allow the measurement of dynamic processes such as blood flow, shear stress, cell-cell interactions, and particle velocity. This paper presents a protocol to monitor in vivo processes in growing collateral arteries during arteriogenesis utilizing intravital imaging. The method described here is a reliable tool for dynamics measurement and offers a high-contrast analysis with minimal photo-cytotoxicity, provided by multiphoton excitation microscopy. Prior to analyzing growing collateral arteries, arteriogenesis was induced in the adductor muscle of mice by unilateral ligation of the femoral artery.
After the ligation, the preexisting collateral arteries started to grow due to increased shear stress. Twenty-four hours after surgery, the skin and subcutaneous fat above the collateral arteries were removed, constructing a pocket for further analyses. To visualize blood flow and immune cells during in vivo imaging, CD41-fluorescein isothiocyanate (FITC) (platelets) and CD45-phycoerythrin (PE) (leukocytes) antibodies were injected intravenously (i.v.) via a catheter placed in the tail vein of a mouse. This article introduces intravital multiphoton imaging as an alternative or in vivo complementation to the commonly used static ex vivo (immuno-) histological analyses to study processes relevant for arteriogenesis. In summary, this paper describes a novel and dynamic in vivo method to investigate immune cell trafficking, blood flow, and shear stress in a hindlimb model of arteriogenesis, which enhances evaluation possibilities notably.

The recruitment of leukocytes and platelets constitutes an essential component necessary for the effective growth of collateral arteries during arteriogenesis. Multiphoton microscopy is an efficient tool for tracking cell dynamics with high spatio-temporal resolution in vivo and less photo-toxicity to study leukocyte recruitment and extravasation during arteriogenesis.

쥐 뒷다리 모델에서 동맥 형성 중 백혈구 모집을 모니터링하기 위한 다광자 생체 내 이미징

Arteriogenesis strongly depends on leukocyte and platelet recruitment to the perivascular space of growing collateral vessels. The standard approach for ...

스테이 시스 고주파 초음파에 의해 모니터링 하는 쥐에 의해 유도 된 깊은 정 맥 혈전 증

요약

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정맥 혈전증의 전해 하부 대정 맥 모델 (EIM)

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델

마우스에서 종양 억제인자 Arid1a 및 Pten 의 Pax8 지시 결실에서 자궁내막암 진행의 비침습적 초음파 평가

암의 마우스 모델에서 정맥 혈전증 분석

암의 마우스 모델에서 정맥 혈전증 분석

암의 마우스 모델에서 정맥 혈전증 분석

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고주파 두개골 이중 초음파를 가진 수브라크누이드 출혈의 뮤린 모형에 있는 뇌 혈관경련의 분석

쥐 뒷다리 모델에서 동맥 형성 중 백혈구 모집을 모니터링하기 위한 다광자 생체 내 이미징