Bu eser kalp ve inme Vakfı Kanada bir hibe ve Morris ve Bella Fainman Aile Vakfı tarafından desteklenmiştir. Yazarlar Veronique Michaud VEVO770 ultrason görüntüleme sistemi ile onun teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum.

Tüm yordamları kurumsal hayvan bakımı Komitesi, McGill Üniversitesi Montréal, QC, Kanada tarafından kabul edildi. Gerekli tüm ekipman tabloda listelenen ben.
1. antikorundan (C57BL/6J) IVC Staz Protokolü
<ol><li>Ameliyat hazırlığı Not: Bu bir hayatta kalma ameliyat olduğunu ve bu nedenle, uygun aseptik tekniği her zaman takip edilmesi gerekiyor. Bu tüm malzemeler el altında olduğundan emin yapma, temizlik ve önce arasında kullanım aletleri sterilize ve tüm steril malzeme için çalışma yüzeyinde steril bölge belirleme içerir.<ol>
<li>Tüm cerrahi aletler ve malzemeler otoklav tarafından sterilize. Cam boncuk sterilizasyon araç ipuçları arasında birden fazla işlem aynı anda yapılır eğer hayvanlar, sterilize etmek yeterlidir.</li>
		<li>8-10 hafta eski C57Bl/6 erkek fareler % 100 oksijen ve % 2.5 isoflurane karışımı ile anestezi. Not: oksijen ve gerektiği gibi isoflurane akışını ayarlayın.</li>
		<li>Anesthetization hayvan Forseps ile ayak parmakları arasında arka pençe pinching tarafından onaylayın. Hayır yanıt--dan tutam hayvan anestezi gösterir.</li>
		<li>Yavaş salınımlı analjezik (buprenorfin) subkutan enjeksiyon yoluyla yönetmek. Fareler analjezik 1 kg vücut ağırlığı (1 mg/kg) başına 1 mg doz ver.</li>
		<li>Her iki gözün kornea hiçbir kuruma süresi boyunca yordamı sağlamak için hayvan göz merhem yerleştirin.</li>
		<li>0.2 - 0.5 mL izotonik sıvı vücut ağırlığının 10 g başına subkutan yönetmek.</li>
		<li>Cerrahi bant kullanarak ameliyat masasına yerde hayvan düzeltmek. Hayvanın karın ortaya çıkarmak için sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Hipotermi önlemek için bir Isıtma yastığı ameliyatı.</li>
		<li>Saç fare karından 1-2 dk. karın bölgesi gazlı bez ile temiz ve distile su, temizleme işlemi için krem epilasyon uygulaması gerekirse çıkarın.</li>
		<li>Alternatif olarak, saç küçük bir elektrikli ustura ile tıraş karından çıkarın.</li>
		<li>Karin Baxedin (klorheksidin glukonat BP çözüm) ile herhangi bir insizyon vermeden önce sterilize. Etanol ile hafifçe gazlı bez alkol buharlaşma tarafından neden olduğu aşırı ısı kaybını önlemek için geçerlidir.</li>
	</ol></li>
	<li>Maruz kalma Inferior Vena kava (IVC)
	<ol>
<li>Cerrahi makas kullanırken, karın boşluğu açmak için laparatomi gerçekleştirin.<ol>
<li>Alt karın, Forseps ile cilt kaldırın ve bir dikey kesi linea her iki tarafına paralel yapmak alba. Sola veya sağa linea ilk kesi yapmak alba, operatörün el kullanımı bağlı olarak. Belgili tanımlık kesme uzak orta hat ultrason daha sonra Imaging'de yardımcı olmak için yapılır.</li>
			<li>Karın üstündeki ikinci, yatay bir kesi yapmak. Not: karın içine nüfuz kas olmalı "tented" ve herhangi bir zarar için karın organları önlemek için Cerrahi makas ile nüfuz.</li>
			<li>Hayvanın karın kas tabakası üzerinde dikey ve Yatay kesikler yineleyin. Karın altında organlara zarar içine penetrasyon sırasında kas çadır emin olun. Dikkat: cilt ve kas bağırsaklar ve diğer iç organlara onları delmek değil insizyon yaparken kaldır.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Cilt ve kas karın boşluğu ortaya çıkarmak için belgili tanımlık kesme uzak katlayın.</li>
		<li>Yara açılış kenarlarına izotonik solüsyonu ile ıslatılmış gazlı bez uygulayın ve bağırsak yansıtmak. Karın bağırsak dışa yardımcı olmak için her iki taraf için basınç uygulayın. Nazik hareketleri bir pamuk uç aplikatör ile bağırsak taşımak için kullanın. Gazlı bez izotonik çözümde ıslatın ve externalized bağırsak yerleştirin.<ol>
<li>Gazlı bez doku yerleşimde önce önceden nemlendirilmiş.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Kenara çekilin Periton herhangi bir yağ ve böbrek ve İliak damarları arasında IVC bulaşmasına neden.</li>
		<li>Açık yan dalları ilk bir kimlik olun. Bir yan dal olarak daha küçük görünür, ancak böbrek ve iliyak arasında IVC uzak dalları önemli damar damarlar. Damarlara büyük fareler arasında değişiklik gösterebilir. Fareler yan dalları mevcut IVC bir veya her iki tarafta olabilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Tüp ligasyonu yan dalı Not: yan dallar varsa, aşağıdaki yordamı her biri için gelir. Yok, adım 4'e devam edin: ilk dikiş yerleştirme IVC altında. IVC ligasyonu yer-ecek var olmak hemen yan dallar varlığı ne olursa olsun sol renal ven distal.<ol>
<li>Künt diseksiyon yan dal her tarafında gerçekleştirmek. Künt diseksiyon art arda ile çevresindeki damarları zarar vermeden fasya ile kırmak için hafif basınç, künt forseps açma işlemidir. Uyarı: Delme veya zarar ven kaçının.</li>
		<li>Şube kaldırın ve 6-0 ipek sütür ven altında bir bölümünü geçmek. Her zaman kaldırma veya gemiler taşırken dikkat. Gemilerin çevresinde yağ kapmak en iyisi, aksi takdirde gemi zarar riski.</li>
		<li>Dikiş forseps kullanarak, bir cerrahi ligasyonu standart cerrahi düğüm bağlama tekniği kullanarak yan dal çevresinde bulunurlar. Tam ligasyonu % 100 tıkanıklığı damarın sağlamak için yapılır. En az üç uygulamakla atar ligasyonu güvenli olduğundan emin olmak için kullanın.</li>
		<li>1.3 için kalan herhangi bir yan dalları arasındaki adımları yineleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>IVC üzerinden abdominal aort diseksiyon
	<ol>
<li>Hemen distal IVC çevresinde künt diseksiyon sol renal ven gerçekleştirin. Abdominal aort IVC fasya ile bağlı olduğu, bu nedenle ilk künt diseksiyon IVC ve abdominal aort gerçekleştirin. Dikkat: Delme veya zarar ven kaçının. Rüptürü veya her iki gemi delik değil. Bu yordam, gemi hasar için yüksek risk taşıyan en önemli parçasıdır.</li>
		<li>Açık bir pencere aort ile IVC arasında yapılana kadar künt diseksiyon ile hafif basınç uygulamaya devam.</li>
	</ol></li>
	<li>Dikiş yerleştirme ve IVC ligasyonu
	<ol>
<li>6-0 ipek sütür IVC ve abdominal aort altında bir bölümünü geçmek.</li>
		<li>IVC ve aort arasında oluşturulan pencereden dikişi bulun. Forseps dikişi çekin ve abdominal aort ile IVC arasında iş parçacığı için kullanın. Dikiş aracılığıyla dikkatle, çekme/abdominal aort ve IVC ponksiyon değil için iş parçacığı.</li>
		<li>Cerrahi ligasyonu IVC çevresinde toplam tıkanıklığı damarın sağlanması dikiş Forseps ile olun. Yine, tüp ligasyonu hemen sol renal ven üzerinden distal olun.</li>
		<li>Tüp ligasyonu güvenliğini sağlamak için üç dikiş atar olun. Not: İki alternatif bir seçenek olarak ayıran önce aort ve IVC altında dikiş geçmek mümkündür. Alternatif olarak, 7-0 Prolene sütür yan şube ve IVC ligasyonu için kullanılabilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Yaranın kapanması ve ameliyat sonrası bakım
	<ol>
<li>Abdominal aort kesintisiz bırakıldı ve tüm yan dalları bakmaksızın doğrulayın. IVC dilate görünür distal ligasyonu siteden ve kan akışı görünür olacaktır.</li>
		<li>Tüm Periton yağ ve bağırsak karın boşluğunda yerleştirin.</li>
		<li>Yaranın dikiş forseps ve 6-0 ipek sütür kullanarak kapatın. Çalışan dikiş (basit sürekli) kullanın ve dikiş çok sıkı olmayacak. Ne zaman hayvan uyanır ve onun kafes taşır sıkı dikiş rüptürü.<ol>
<li>Alternatif olarak, PDS, Ethilon, Vicryl, Dexon veya paslanmaz çelik klipleri yara kapatma için kullanabilir.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Dikiş önce uygun dikiş tekniği bağlama kullanarak karın kas tabakası.</li>
		<li>Dikiş tekniği cilt için yineleyin ve yara kapatma yeterli olduğunu doğrulayın. Not: aynı dikiş iğne ve iplik birden çok hayvanlar için kullanılıyorsa, ikisinde % 70 etanol her kullanımdan önce sterilize.</li>
		<li>Hayvan anestezik gaz kaldırmak ve en az 30 dakika 34 ° C kuluçka makinesine koyun.</li>
		<li>Yine, 0.2 - 0.5 mL izotonik sıvı vücut ağırlığının 10 g başına subkutan yönetmek. Sıvı takip eden günlerde pre-operative vücut ağırlığı korumak için gerekirse verilebilir.</li>
		<li>Hayvan Kurtarma kadar başarılı ameliyat olun ve hayvan genel sağlık değerlendirmek için izleyin. Uyarı: Hafif Kambur duruş bu gibi invaziv bir işlem için bekliyoruz, ama hayvan 30 dakika sonrası işlemi normalde erken davranacaktır.</li>
		<li>Hayvan kendi kafesin içine yerleştirin ve tamamen iyileşti kadar diğer hayvanlarla koymayın.</li>
		<li>Analjezik günlük en çok 48 s postop için yeniden yönetmek.</li>
		<li>Gıda kafesin zemininde kurtarma hayvan süre yerleştirin. Diğer özel bakım genellikle gerekli değildir.</li>
		<li>Kızarıklık, şişlik, ya da basma ve herhangi bir diğer işaret-in hastalık yara sitesine inceleyin.</li>
		<li>Gerekirse, dikişler 7-10 gün sonra kaldırın.</li>
		<li>Ötenazi gerçekleştirdikten hemen ameliyat başarısız olursa (Örneğin, önemli gemi hasar ve/veya kan kaybı) veya hayvan ile ameliyat sonrası bakım geliştirmek değil. Ötenazi genellikle 48 h postop gerçekleştirilir. Daha uzun deneyler için 7-0 Prolene yan dallar ve IVC ve 5-0 Vicryl sütür karın boşluğu kapatmak için ligate kullanmak.<ol>
<li>Ötenazi anesthetization bir indüksiyon daha önce açıklandığı gibi dışında % 5 isoflurane hayvan yerine getirilir. Bu boğulma anestezi iken % 100 CO2 tarafından takip ediyor.</li>
			<li>Ötenazi boğulma (kalp atışı ve nefes kaybı) tarafından onay sonra tam ötenazi sağlamak için servikal çıkığı gerçekleştirin.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>2. yüksek frekans ultrason Protokolü
Not: Bu bayan Davis Enstitüsü kemirgen fenotipleme çekirdek SOP yüksek frekans ultrason görüntüleme için gelen adapte iletişim kuralıdır. Bu iletişim kuralı 24 h post operatif taşıdı ama hayvan de ameliyat için yanıt olarak daha önce yapılabilir. Protokol sağlıklı fareler üzerinde herhangi bir zamanda yapılabilir ve genellikle öncesi ve ameliyat sonrası karşılaştırmak için yapılır.
<ol><li>
Hayvan hazırlanması
	<ol>
<li>Hayvan bir indüksiyon odasında yerleştirin ve % 100 oksijen ve % 2.5 isoflurane karışımı ile hayvan anestezi.</li>
		<li>Kalp hızı ve sıcaklık monitörünüzü açınız. Hayvan işlem sırasında sıcak tutmak için tablonun üst pozisyon ısı lamba.</li>
		<li>Hayvan indüksiyon odasından kaldırın ve kornea kuruma önlemek için göz yağ uygulayın. Hayvan analiz platformu üzerinde konumlandırın ve hayvanın ağız/burun anestezik tüp yapıştırmayın.</li>
		<li>Sıcak ultrason 37 ° C-jel ve jel hayvanın karın bölgesinde yer. Ultrason jeli pompalar su jel şişe sarılı rulo ile sıcak su ısıtma sistemi kullanılarak ısıttı.</li>
		<li>Kalp hızı ölçümleri, (gerekirse) için elektrot jel üzerinde analiz platformun elektrotlar 4 koymak ve belgili tanımlık paws platformu/elektrotlar için hayvanın cerrahi bant ile düzeltmek. Hayvan sırtüstü pozisyonunda IVC görüntüleme için yerleştirin. Görüntüleme sistemi ultrason sıcak ve elektrotlar hayvan izleme içeren bir çözümleme platform içerir.</li>
		<li>Sıcaklık ölçüleri, elektrot jel termometre üzerinde koymak ve hayvan rektum yerleştirin.</li>
		<li>Isı lamba ve isoflurane o hayvanı rahat, 30-70 bpm arasında bir solunum vardır ve 37 ° C'de tutulur emin olmak gerektiği gibi ayarlayın</li>
		<li>Gerekirse, hayvanın karın tıraş veya saç dökücü krem saç kaldırma. 1-2 dakika boyunca uygulayın ve temiz gazlı bez ve distile su ile silin. Not: Çok fazla saç görüntü kalitesini etkileyebilir.</li>
		<li>Gazlı bez altında veya herhangi bir aşırı ultrason jeli yakalamak için hayvan tarafına yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Düşsel IVC ve Trombus olgusu
	<ol>
<li>Görüntüleme yazılımını açın ve yeni bir çalışma başlar.</li>
		<li>Görüntüleme için uygun bir scanhead seçin. Burada kullanılan scanhead için karın organları olduğunu (frekans: 35 MHz, odak uzaklığı: 12.8 mm).</li>
		<li>Hayvan ilgili herhangi bir ilgili bilgileri kaydeder. Bu hayvan içerebilir kimliği, seks, ağırlık, Doğum tarihi, soy, vb.</li>
		<li>Ultrason jeli hayvan dokunuyor kadar scanhead indirin.</li>
		<li>2-B görüntüleme hayvan başlamak için scanhead sonda başlatın. Bu modda, görüntüleri iki boyutlu, değişen grinin olarak sunulmaktadır.</li>
		<li>IVC ve abdominal aort scanhead z uçağın üzerinden de hareket ederken fare platform x - ve y-uçak, boyunca taşıyarak bulun. Not: kan damarları onların duvarlar beyaz ve kan içinde neredeyse-ecek gözükmek ile siyah. Abdominal aort yoğun atmak ve daha kalın duvarlar var, süre IVC ince duvarlar ve sıkıştırma genişletin/kolayca üzerinde görüntü ekran scanhead hareket ettiğinde ve aşağı. Tüp ligasyonu sitesi damarı genişlemiş ve damar duvar bir noktasına gelecek kadar belirgin olacaktır. İçinde oluşan herhangi bir trombüsü ultrason görüntüleme altında katı olacak ve damar duvar gibi kolayca sıkıştırır değil. Damar-ecek basmak sadece ligasyonu nerede yok trombüsü oluşturulur.</li>
		<li>IVC ve ligasyonu site bulma üzerine, onları en doğru görüntü elde etmek için ultrason, odak noktası üzerinde ortalayın.<ol>
<li>Görüntü net görmek, jel ayarlamak ve herhangi bir hava kabarcıkları pamuk uç aplikatör ile kaldırmak için çok karanlık ise.</li>
			<li>Gerekirse, scanhead 45 ° sola veya sağa doğru eğin ve damar açıkça görmek için hayvan platformu yeniden ayarlayabilirsiniz. Scanhead ile girişim ise bu yapılır. Bu senaryoda, damar bir yan-dikişi önlemek için bir açıyla yansıması gerekir. Not: Görüntü paraziti en sık deri hayvan, zavallı yaranın dikiş yerleştirme veya ultrason jel kabarcıkları karanlık yamalar neden olur.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Yazılımı kullanarak, istenen herhangi bir yapı fotoğraf çekmek ve herhangi bir ölçüm araçları kullanarak ölçüleri yapın. Ortak ölçümler kesiti trombüsü veya ligasyonu sayfanın genişliğini içerir.</li>
		<li>Kan akışı ölçümleri yapmak için nabız dalga Doppler görüntüleme modunu değiştirmek. Bu mod, vasküler kan akımı görüntüleme ve diğer değişkenler arasındaki akış hızı ölçümü sağlar.</li>
		<li>Hayvan arka sonu düşürmek için analiz platformu eğ.</li>
		<li>Hayvan posterior ucundan yaklaşık 30 ° açılı jel başvuracağım scanhead açısı/konumunu değiştirin.</li>
		<li>Hayvan platformu ve scanhead yeniden konumlandırın. IVC ve ligasyonu gerekirse yerini değiştirin.</li>
		<li>Kan akışı ölçümleri Staz onaylamak ve istenen herhangi bir fotoğraf çekmek için ligasyonu site yapmak. Ortalama hız, en yüksek hız veya medyan hız kan akımı ortak ölçümler.</li>
		<li>Herhangi bir ölçüm veya çekilen görüntüleri kaydedin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Temizlik ve hayvan kurtarma
	<ol>
<li>Pozisyon ilk ve hayvan platformu ilk konumuna de yeniden konumlandırmak için scanhead kaldırın.</li>
		<li>Gazlı bez hayvanla kapalı aşırı jel kaldırın. Yaranın dikiş değil yırtıldı yavaşça yapmak bu.</li>
		<li>Termometre hayvanın rektum kaldır ve hayvan platform kapalı alır.</li>
		<li>Hayvan onun kafes ve 34 ° C kuluçka makinesi yerleştirin.</li>
		<li>Hayvan Kurtarma kadar izlemek. Çok küçük ve non-invaziv bir yöntemdir. Hayvan hızla uyanacaksın. Şu günlerde bölümü 1,6 Bu protokol uyarınca hayvan izleme devam edin.</li>
		<li>Gazlı bez ve dezenfektan hayvan platformuyla temiz.</li>
		<li>Silme temiz gazlı bez ve distile su ile scanhead. Uyarı: Çok yavaşça scanhead temiz ve sadece distile su ile.</li>
		<li>2 sonraki hayvan için yineleyin.<ol>
<li>Tüm konular ile yapılırsa, tüm resimler ve kayıtları kaydedildiğini doğrulayın. O zaman tüm ekipman ve yazılım kapatın.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+diagnosed+deep+vein+thrombosis+in+the+general+population:+systematic+review.">Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review.</a> Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).</li><li>McGuinness, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+labelled+monocytes+by+experimental+venous+thrombi.">Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi.</a> Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).</li><li>Singh, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+of+thrombus+to+resolve+in+urokinase-type+plasminogen+activator+gene-knockout+mice:+rescue+by+normal+bone+marrow-derived+cells.">Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells.</a> Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).</li><li>Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+kinetics+of+99mTc+labeled+recombinant+tissue+plasminogen+activator+in+rabbits.">In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits.</a> Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).</li><li>Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+pig+models+of+venous+thrombosis+mimicking+human+disease.">In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease.</a> Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).</li><li>Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+pulmonary+emboli+and+deep+venous+thrombi+with+99mTc-bitistatin,+a+platelet-binding+polypeptide+from+viper+venom.">Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom.</a> J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).</li><li>Wakefield, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venous+thrombosis+prophylaxis+by+inflammatory+inhibition+without+anticoagulation+therapy.">Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy.</a> J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).</li><li>Robins, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+Gas6+contributes+to+thrombogenesis+and+promotes+tissue+factor+up-regulation+after+vessel+injury+in+mice.">Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice.</a> Blood. 121 (4), 692-699 (2013).</li><li>Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostaglandin+E+synthase+is+upregulated+by+Gas6+during+cancer-induced+venous+thrombosis.">Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis.</a> Blood. 127 (6), 769-777 (2016).</li><li>Laurance, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gas6+(Growth+Arrest-Specific+6)+Promotes+Inflammatory+(CCR2hiCX3CR1lo)+Monocyte+Recruitment+in+Venous+Thrombosis.">Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis.">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li><li>Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+monitoring+of+venous+thrombosis+in+mice.">In vivo monitoring of venous thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).</li><li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches.">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li><li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL/6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+(stasis)+model.">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li><li>Luther, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+Effector-Memory+T+Cell+Activation+Regulates+Post-Thrombotic+Vein+Wall+Inflammation+and+Thrombus+Resolution.">Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution.</a> Circ Res. , (2016).</li><li>Subramaniam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+contributions+of+complement+factors+to+platelet+activation+and+fibrin+formation+in+venous+thrombus+development.">Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development.</a> Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombogenesis+with+continuous+blood+flow+in+the+inferior+vena+cava.+A+novel+mouse+model.">Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model.</a> Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Staz modelini kullanarak başarılı Venöz trombüsü oluşumu için birkaç önemli adım vardır. Ven Trombozu indüksiyon daha inferior vena kava ve aort damarı çevreleyen yağ birikimi nedeniyle eski farelerde zordur. İdeal olarak, bu yordamı geçiren fareler 8 - 10 hafta çocuk olmalıdır. Büyük değil ikna etmek IVC endotel hasarı künt diseksiyon ve bağ sırasında için özen gösterilmelidir. Buna ek olarak, bu ameliyattan sonra en az 30 dakika 34 ° C kuluçka makinesine hayvan tutmak için ve yalnız...

Derin Venöz trombozu (DVT) ve pulmoner emboli oluşur, Venöz tromboemboli (VTE), miyokard enfarktüsü ve inme sonra kardiyovasküler ölüm üçüncü önde gelen nedenidir. Nüfusun % 1-2 1 5001yıllık insidansı ile etkileyen yaygın bir durumdur. Download VTE için yol açabilir: 1) ölümün ötesine pulmoner emboli; 2) sonrası trombotik sendromu, kronik bacak ağrı, şişlik ve ülserasyon ile karakterize; ya da 3) önemli Kronik solunum uzlaşma içinde kaynaklanan Kronik Pulmoner Hipertansiyon. Download VTE çok faktöriyel bir hastalıktır ve yüz yıl önce açıklandığı Staz kan akımı, gemi duvarları ve/veya pıhtılaşma Birleşik koagülasyon ve fibrinolitik sistem arasındaki dengeyi bir bozulma nedeniyle zarar neden olabilir Virchow tarafından ve Virchow'ın Üçlü bilinir.
Çoğu zaman insan DVT örnekleri elde edebilmek mümkün değildir çünkü, araştırmacılar DVT deneysel hayvan modelleri geliştirdi. Sıçan2, fare3, tavşan4, domuz5, köpek6ve insan dışı primat7 de dahil olmak üzere çeşitli hayvanlar kullanılmıştır. Fare genetiği değiştirilmiş ve DVT eğitim için en sık kullanılan hayvan vardır. Ancak, Bütün hayvanlar gibi farelerde spontan DVT gözlenen değil. Böylece, fiziksel veya kimyasal değişiklikler damar duvarının trombozu farelerde oluşturmak için kullanılır. Biz daha önce biatriyal Trombus fareler8,9,10inferior vena kava (IVC) ikna etmek için ferrik klorid modeli kullandık. Bu model güvenilir birkaç dakika içinde tıkayıcı olu_umu üreten avantajı ve anti-koagulant ve anti-trombosit uyuşturucu rol sırasında akut DVT araştırmak için kullanılır. Ancak, bu terminal bir işlemdir. Böylece, akut ve kronik DVT çalışmaya, staz modeli daha uygundur. Bu modelde, trombüsü oluşumu IVC Virchow'ın Üçlü DVT gelişimi için faktörlerin kan akımı tam kesintiye indüklenen. Bu model DVT oluşumu ve FeCl3 model11' e göre bir avantajdır çözünürlük çalışma için kullanılabilir.
Trombüsü oluşumu ve çözünürlük bir mikro-görüntüleme yüksek frekanslı ultrason sistemi12kullanarak zaman içinde takip etmek non-invaziv bir yöntem geliştirdik. Biz daha önce ultrason tarafından Venöz tromboz ölçümü olumlu patolojik olarak elde edilen olu_umu ile ilişkili olan göstermiştir. Biz iki sonraki çalışmalarda ölçümleri ultrason ilişkili trombüsü ağırlık ve histochemistry9,10tarafından sayısal trombüsü alanı ile elde edilen doğruladı. Daha da önemlisi, yüksek frekans ultrason fareler12derin Venöz tromboz oluşumunu izlemek için kullanılan göstermiştir. Trombüsü çözünürlük non-invaziv bir şekilde ölçmek için de kullanılabilir.
Burada, staz kaynaklı trombozu fare modeli ve nasıl trombüsü formasyonu olmayan invaziv yüksek frekans ultrason kullanarak zaman içinde izlenebilir kullanarak trombüsü oluşumu izin iletişim kuralı anlatacağım.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-0 perma-hand silk suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>706G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>20830-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture tying forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>20830-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blunt forceps (straight and curved)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>20830-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13002-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15396-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G needles</td>
			<td>Becton Dickinson &#38; Co.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VEVO 770 High Resolution Imaging System</td>
			<td>Visualsonics</td>
			<td>No longer sold</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SR Buprenorphine</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td></td>
			<td>Given to LDI by Vet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Systan eye oinment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>288/28062-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x2 sterile Gauze</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>#104148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicators</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>from JGH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transpore hypoallergenic surgical tape</td>
			<td>CDMV</td>
			<td>#7411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel (Aquasonic-100)</td>
			<td>Dufort &#38; Lavigne</td>
			<td>#AKEN4061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>From JGH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Dispomed</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment</td>
			<td>Dispomed</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair remover</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water heated hard pad</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td>#HHP-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymar heater water pump TP500</td>
			<td>MATVET Inc.</td>
			<td>#R-500305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infra-red heating lamp</td>
			<td>electrimat inc.</td>
			<td>#1R175R-PAR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse rectal temperature prope</td>
			<td>emkaTECHNOLOGIES</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>From JGH</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

deep vein thrombosis induced by stasis in mice monitored by high frequency ultrasonography

Venöz tromboz nüfusun % 1-2 1 500 yıllık insidansı ile etkileyen yaygın bir durumdur. Venöz tromboz, pulmoner emboli veya sonuçlar sonrası trombotik sendromu, kronik bacak ağrı, şişlik ve ülserasyon ile karakterize veya önemli kronik kaynaklanan Kronik Pulmoner Hipertansiyon ölüme açabilir solunum uzlaşma. Bu en yaygın kardiyovasküler hastalık akut miyokard infarktüsü ve iskemik inme sonrası ve kanser, sistemik hastalığı, cerrahi ve büyük travma gibi diğer bozuklukları seyri karmaşık hale getirebilir gibi tüm tıp disiplinleri için klinik bir mücadeledir.
Deneysel modeller bu mekanizmaların çalışması gereklidir. Staz modeli tutarlı trombüsü boyutu ve trombüsü ölçülebilir miktarda neden olmaktadır. Ancak, sistematik olarak ligate yan dalları inferior vena kava trombüsü boyutları değişkenlik ve herhangi bir hatalı veri yorum önlemek için gereklidir. Ultrasonografi kullanarak trombüsü boyutunu ölçmek için non-invaziv bir yöntem geliştirdik. Bu tekniği kullanarak, biz trombüsü geliştirme ve çözünürlük zaman içinde aynı hayvan değerlendirebilir. Bu yaklaşım Venöz tromboz değiştirme, azaltma ve araştırma hayvanlarda arıtma prensibi ile tutarlı miktar için gerekli fare sayısını sınırlar. Ultrasonografi ile elde trombüsü ağırlık ve histolojik trombüsü boyut ilişkili ile ölçüm analizi göstermiştir. Bu nedenle, çalışmada Derin Ven Trombozu inferior vena kava Staz modelini kullanarak farelerde ikna etmek ve yüksek frekans ultrason kullanarak izlemek anlatılmaktadır.

Staz Venöz tromboz modeli
Staz modelindeki fareler anestezi ve inferior vena kava (IVC) ortaya çıkarmak için bir kesi yapılır. Sol veya sağ tarafına fare orta hat laparatomi ultrason sonda ile müdahale olmaz bir şekilde yerine belgili tanımlık kesme yapılır. Karın kasları ve cilt kat vardır geri IVC (şekil 1) ortaya çıkarmak için. İlk olarak, yan dallar bir 6-0...

Watch this Scientific Journal Video about Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography at JoVE.com

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Mevcut Protokolü Venöz tromboz Staz modelini kullanarak elde etmek için gereken adımları açıklar. Buna ek olarak, biz trombüsü oluşumu ve çözünürlük zamanla ölçmek için non-invaziv bir yöntem kullanarak.

Derin Ven Trombozu Staz farelerde yüksek frekans Ultrasonografi tarafından izlenen tarafından indüklenen

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

deep-vein-thrombosis-induced-stasis-mice-monitored-high-frequency

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

9.8K Görüntüleme.  McGill University. Mevcut Protokolü Venöz tromboz Staz modelini kullanarak elde etmek için gereken adımları açıklar. Buna ek olarak, biz trombüsü oluşumu ve çözünürlük zamanla ölçmek için non-invaziv bir yöntem kullanarak.

Video: Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus (KSHV)

Currently KS is the most predominant HIV/AIDS related malignancy in Southern Africa and hence the world.1,2 It is characterized as an angioproliferative tumor of vascular endothelial cells and produces rare B cell lymphoproliferative diseases in the form of pleural effusion lymphomas (PEL) and some forms of multicentric Castleman's disease.3-5 Only 1-5% of cells in KS lesions actively support lytic replication of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV), the etiological agent associated with KS, and it is clear that cellular factors must interact with viral factors in the process of oncogenesis and tumor progression.6,7 Identifying novel host-factor determinants which contribute to KS pathology is essential for developing prognostic markers for tumor progression and metastasis as well as for developing novel therapeutics for the treatment of KS.8 The accompanying video details the methods we use to identify host cell gene expression programs altered in dermal microvascular endothelial cells (DMVEC) after KSHV infection and in KS tumor tissue.9 Once dysregulated genes are identified by microarray analysis, changes in protein expression are confirmed by immunoblot and dual labeled immunofluorescence. Changes in transcriptional expression of dysregulated genes are confirmed in vitro by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). Validation of in vitro findings using archival KS tumor tissue is also performed by dual labeled immunochemistry and tissue microarrays.8,10 Our approach to identifying dysregulated genes in the KS tumor tissue microenvironment will allow the development of in vitro and subsequently in vivo model systems for discovery and evaluation of potential novel therapeutic for the treatment of KS.

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV

Host cell factors play a critical role in the establishment and maintenance of Kaposi's sarcoma (KS). We outline methods to identify host cell factors altered in KSHV-infected DMVEC cells, and in KS tumor tissue. Cellular genes altered by virus will serve as potential target(s) for novel therapeutics.

Kaposi sarkomu ile ilişkili Herpes (KSHV) Yol Açtığı düzensiz Genler belirlenmesi

Currently KS is the most predominant HIV/AIDS related malignancy in Southern Africa and hence the world.1,2 It is characterized as an angioproliferative ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to Witebsky's postulates, one of the criteria in diagnosing a disease as autoimmune is the reproduction of the disease in experimental animals by the passive transfer of autoantibodies. For epidermolysis bullosa acquisita (EBA), a prototypic organ-specific autoimmune disease of skin and mucous membranes, several experimental models were recently established. In the animal model described in our present work, purified IgG antibodies against a stretch of 200 amino acids (aa 757-967) of collagen VII are injected repeatedly into mice reproducing the blistering phenotype as well as the histo- and immunopathological features characteristic to human EBA 1. Full-blown widespread disease is usually seen 5-6 days after the first injection and the extent of the disease correlates with the dose of the administered collagen VII-specific IgG. The tissue damage (blister formation) in the experimental EBA is depending on the recruitment and activation of granulocytes by tissue-bound autoantibodies 2,-4. Therefore, this model allows for the dissection of the granulocyte-dependent inflammatory pathway involved in the autoimmune tissue damage, as the model reproduces only the T cell-independent phase of the efferent autoimmune response. Furthermore, its value is underlined by a number of studies demonstrating the blister-inducing potential of autoantibodies in vivo and investigating the mechanism of the blister formation in EBA 1,3,-6. Finally, this model will greatly facilitate the development of new anti-inflammatory therapies in autoantibody-induced diseases. Overall, the passive transfer animal model of EBA is an accessible and instructive disease model and will help researchers to analyze not only EBA pathogenesis but to answer fundamental biologically and clinically essential autoimmunity questions.

In the animal model described in our present work, purified IgG antibodies against a stretch of 200 amino acids (aa 757-967) of collagen VII are injected repeatedly into mice reproducing the blistering phenotype as well as the histo- and immunopathological features characteristic to human epidermolysis bullosa acquisita (EBA)1.

Granülosit-bağımlı otoantikor indüklenen Cilt Kabarcıklanma

Autoimmune phenomena occur in healthy individuals, but when self-tolerance fails, the autoimmune response may result in specific pathology. According to ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages and disadvantages. We describe here an experimental colitis model that is initiated by adoptive transfer of syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipient mice. The CD4+CD45RBhigh T cell population that largely consists of na&#239;ve effector cells is capable of inducing chronic intestinal inflammation, closely resembling key aspects of human IBD. This method can be manipulated to study aspects of disease onset and progression. Additionally it can be used to study the function of innate, adaptive, and regulatory immune cell populations, and the role of environmental exposures, i.e., the microbiota, in intestinal inflammation. In this article we illustrate the methodology for inducing colitis with a step-by-step protocol. This includes a video demonstration of key technical aspects required to successfully develop this murine model of experimental colitis for research purposes.

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.

Efektör CD4 Evlatlık transferi ile Kemirgen Bağırsak Enflamasyon indüksiyonu<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Yüksek</sup&gt; Bağışık yetmezliği olan farelere içine T Hücreleri

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in vivo is crucial for understanding the molecular basis of leukocyte transendothelial migration and interaction with vascular endothelium. One powerful approach involves intravital microscopy on transgenic mice expressing fluorescent proteins in cells of interest.
Here we present a protocol for imaging monocytes and neutrophils in the CX3CR1gfp/wt mouse i.v. injected with orange dye-labeled neutrophils with an inverted confocal microscope. Time-lapse movies gathered from 30 min&#160;to several hours of imaging allow the analysis of leukocyte behavior in mesenteric veins under both steady state and inflammatory conditions. We also describe the steps to locally induce blood vessel inflammation with TLR2/TLR1 agonist Pam3SK4 and monitor the subsequent recruitment of neutrophils and monocytes.
The presented technique can also be used to monitor other populations of leukocytes and investigate molecules implicated in leukocyte recruitment or trafficking using other stimuli or transgenic mice.

We detail a protocol to monitor the behavior of neutrophils and monocytes in mesenteric veins under steady state and inflammatory conditions using intravital confocal microscopy on anaesthetized mice.

Real Time Anestetize Farelerde Intravital Mikroskopi Mezenterik Damarlardaki nötrofiller ve monositler Görüntüleme

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of combining reactions together. We designed and evaluated a panel based on this principle to rapidly identify the presence of common disease agents in dogs and horses with acute respiratory illness. This manuscript describes a nanoscale diagnostic PCR workflow for sample preparation, amplification, and analysis of target pathogen sequences, focusing on procedures that are different from microliter scale reactions. In the respiratory panel presented, 18 assays were each set up in triplicate, accommodating up to 48 samples per plate. A universal extraction and pre-amplification workflow was optimized for high-throughput sample preparation to accommodate multiple matrices and DNA and RNA based pathogens. Representative data are presented for one RNA target (influenza A matrix) and one DNA target (equine herpesvirus 1). The ability to quickly and accurately test for a comprehensive, syndrome-based group of pathogens is a valuable tool for improving efficiency and ergonomics of diagnostic testing and for acute respiratory disease diagnosis and management.

High-throughput testing of DNA and RNA based pathogens by nanoscale PCR is described using a syndromic canine and equine respiratory PCR panel.

Nano PCR ile Hayvan Örnekler Solunum Patojenler yüksek verimlilik Algılama

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human central nervous system (CNS) autoimmune demyelinating disease, creation of an AQP4-targeted model with both clinical and histologic manifestations of CNS autoimmunity has proven challenging. Immunization of wild-type (WT) mice with AQP4 peptides elicited T cell proliferation, although those T cells could not transfer disease to na&#239;ve recipient mice. Recently, two novel AQP4 T cell epitopes, peptide (p) 135-153 and p201-220, were identified when studying immune responses to AQP4 in AQP4-deficient (AQP4-/-) mice, suggesting T cell reactivity to these epitopes is normally controlled by thymic negative selection. AQP4-/- Th17 polarized T cells primed to either p135-153 or p201-220 induced paralysis in recipient WT mice, that was associated with predominantly leptomeningeal inflammation of the spinal cord and optic nerves. Inflammation surrounding optic nerves and involvement of the inner retinal layers (IRL) were manifested by changes in serial optical coherence tomography (OCT). Here, we illustrate the approaches used to create this new in vivo model of AQP4-targeted CNS autoimmunity (ATCA), which can now be employed to study mechanisms that permit development of pathogenic AQP4-specific T cells and how they may cooperate with B cells in NMO pathogenesis.

Here, we present a protocol to induce paralysis and opticospinal inflammation by transfer of aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells from AQP4-/- mice into WT mice. In addition, we demonstrate how to use serial optical coherence tomography to monitor visual system dysfunction.

Felç ve görsel sistem yaralanma tarafından Nöromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4 T hücreleri belirli farelerde indüksiyon

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus formation in veins remain obscure. Lack of mobility (e.g., after surgery or long-haul flights) is one of the main factors leading to DVT. The pathophysiological consequence of the lack of mobility is blood flow stagnation in venous valves. Here, a model is described that mimics such flow disturbance as a thrombosis-driving factor. In this model, partial flow restriction (stenosis) in the inferior vena cava (IVC) is created. Closure of about 90% of the IVC lumen for 48 h results in development of thrombi structurally similar to those in humans. The similarities are: i) most of the thrombus volume is red, i.e., consists of red blood cells and fibrin, ii) presence of a white part (lines of Zahn), iii) non-denuded endothelial monolayer, iv) elevated plasma D-Dimer levels, and v) possibility to prevent thrombosis by low molecular weight heparin. Limitations include variable size of thrombi and the fact that a certain percentage of wild-type mice (0 - 35%) may not produce a thrombus. In addition to visual observation and measurement, thrombi may be visualized by non-invasive technologies, such as ultrasonography, which allows for monitoring the dynamics of thrombus development. At shorter time points (1 - 6 h), intravital microscopy may be applied to directly observe events (e.g., recruitment of cells to the vessel wall) preceding thrombus formation. Use of this method by several teams around the world has made it possible to uncover basic mechanisms of DVT initiation and identify potential targets that might be beneficial for its prevention.

We describe here stenosis in the inferior vena cava as a murine model of deep vein thrombosis. This model recapitulates blood flow restriction, one of the major triggers of venous thrombosis in humans.

Inferior Vena kava stenozu: Derin Ven Trombozu fare modeli

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

Evaluation of Blood Lactate and Plasma Insulin During High-intensity Exercise by Antecubital Vein Catheterization

The measurement of metabolic and endocrinal markers during physical activity is of relevance to understanding the physiological implications of different exercise modalities. During some exercise modalities (e.g., high-intensity interval exercise), blood metabolites and hormonal levels change in short periods of time. In the present study, we describe a method to catheterize the antecubital vein, which allows the collection of several blood samples during exercise. Insulin and venous lactate concentrations were measured during high-intensity exercise by the application of the described method. The exercise consisted of three 30 s bouts of high-intensity exercise separated by 4 min of recovery. After the last recovery period, a Wingate test was performed. Blood samples from the antecubital vein were obtained before and after each 30 s bout and before and after the Wingate test. As a result, it was possible to evaluate the plasma insulin and venous blood lactate variations during the exercise.

Here we present a protocol to obtain several blood samples from the antecubital vein during high-intensity interval training. This protocol may be useful for the measurement of blood metabolites and endocrinal markers during exercise.

Kolundaki ven kateterizasyonu tarafından yoğun egzersiz sırasında kan laktat ve plazma insülin değerlendirme

The measurement of metabolic and endocrinal markers during physical activity is of relevance to understanding the physiological implications of different ...

Visualizing Leukocyte Rolling and Adhesion in Angiotensin II-Infused Mice: Techniques and Pitfalls

Epifluorescence intravital video microscopy (IVM) of blood vessels is an established method to evaluate the activation of immune cells and their ability to role and adhere to the endothelial layer. Visualization of circulating cells by injection of fluorescent dyes or fluorophore-coupled antibodies is commonly used. Alternatively, fluorescent reporter mice can be used. Interactions of leukocytes, in particular lysozyme M+ (LysM+) monocytes, with the vessel wall play pivotal roles in promoting vascular dysfunction and arterial hypertension. We here present the technique to visualize and quantify leukocyte rolling and adhesion in carotid arteries in angiotensin II (AngII)-induced hypertension in mice by IVM.
The implantation of a catheter damages the vascular wall and leads to altered blood cell responses. We compared different injection techniques and administration routes to visualize leukocytes in a LysMCre+IRG+ mouse with widespread expression of red fluorescent protein and conditional expression of green fluorescent protein in LysM+ cells. To study LysM+ cell activation, we used AngII infused mice in which rolling and adhesion of leukocytes to the endothelium is increased. We either injected acridine orange using a jugular catheter or directly though the tail vein and compared the amount of rolling and adhering cells. We found that jugular catheter implantation per se increased the number of rolling and adhering LysM+ cells in sham-infused LysMCre+IRG+ mice compared to controls. This activation was augmented in AngII-infused mice. Interestingly, injecting acridine orange directly through the tail vein did not increase LysM+ cell adhesion or rolling in sham-infused mice. We thereby demonstrated the importance of transgenic reporter mice expressing fluorescent proteins to not interfere with in vivo processes during experimentation. Furthermore, tail vein injection of fluorescent tracers might be a possible alternative to jugular catheter injections.

This manuscript describes the use of transgenic reporter mice and different administration routes of fluorescent dyes in angiotensin II-induced hypertension using intravital video microscopy of blood vessels to evaluate the activation of immune cells and their ability to roll and adhere to the endothelium.

Lökosit haddeleme ve yapışma Anjiyotensin II-infüzyon farelerde görselleştirme: teknikleri ve Püf noktalar

Epifluorescence intravital video microscopy (IVM) of blood vessels is an established method to evaluate the activation of immune cells and their ability ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T (iNKT) cells. Patients with active RA present fewer iNKT cells, defective cell function, and excessive polarization of Th1. In this study, an RA animal model was established using a mixture of hGPI325-339 and hGPI469-483 peptides. The iNKT cells were obtained by in vivo induction and in vitro purification, followed by infusion into RA mice for adoptive immunotherapy. The in vivo imaging system (IVIS) tracking revealed that iNKT cells were mainly distributed in the spleen and liver. On day 12 after cell therapy, the disease progression slowed down significantly, the clinical symptoms were alleviated, the abundance of iNKT cells in the thymus increased, the proportion of iNKT1 in the thymus decreased, and the levels of TNF-&#945;, IFN-&#947;, and IL-6 in the serum decreased. Adoptive immunotherapy of iNKT cells restored the balance of immune cells and corrected the excessive inflammation of the body.

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

This protocol uses G6PI mixed peptides to construct rheumatoid arthritis models that are closer to that of human rheumatoid arthritis in CD4+ T cells and cytokines. High purity invariant natural killer T cells (mainly iNKT2) with specific phenotypes and functions were obtained by in vivo induction and in vitro purification for adoptive immunotherapy.

Glukoz-6-Fosfat İzomazlarında (G6PI)-Indüklenen RA Farelerde iNKT Hücrelerinin Benimseyici İmmünoterapisi

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...