Unser einzigartiges Arzneimittelabgabesystem, das 20 Nanometer Goldpartikel in zwei spezifischen kurzen Peptiden verwendet, kann Gold-Nanopartikel in physiologischer Lösung stabilisieren und seine zelluläre Aufnahme verbessern und somit effektiv Peptid-basierte oder andere Medikamente in Zellen liefern. Unser BSP-Peptid-Hybrid ist einfach zu synthetisieren und stabil. Durch die Verwendung von Gold-Nanopartikel-Peptid-Hybriden als Wirkstoffträger können wir Peptidmedikamente effektiv und in Hülle und Fülle in die Zellen übertragen.
Wir behandelten Ischämie-Reperfusionsverletzungen in der Lunge mit unserem BSP/PKCi-Hybrid. BSP bringt PKC-Hemmerpeptide in das Zytoplasma. Diese Verabreichungsmethode war in der Lage, schwerere Lungenverletzungen mit einer niedrigeren Dosierung von PKCi als andere Liefermethoden zu reduzieren.
Um dieses Verfahren zu beginnen, holen Sie die Peptide aus einem Gefrierschrank bei minus 20 Grad Celsius, und tauen Sie sie bei Raumtemperatur auf. Verwenden Sie eine Mikroskala, um 0,01 Gramm jedes aufgetauten Peptids zu wiegen, und übertragen Sie jedes Peptid in ein separates 50 Milliliter konisches Rohr. Fügen Sie 18,74 Milliliter entionisiertes Wasser in die P2-Röhre und 16,93 Milliliter entionisiertes Wasser in die P4-Röhre.
Fügen Sie 8,21 Milliliter 50%Acetonitril in deionisiertem Wasser in die PKC-Delta-Inhibitor-Röhre ein. Wirbel die Peptid-Lösungen kurz. Dann legen Sie die Röhren in einen Beschallungsgerät bei 40 Megahertz für fünf Minuten.
Übertragen Sie die Lösungen anschließend in einen Biosicherheitsschrank. Es ist wichtig, das 50 ml konische Rohr für fünf Minuten in einen Beschallungsgerät zu geben. Wenn dieser Schritt übersprungen wird, bildet das BSP/PKCi Aggregationen.
Übertragen Sie einen Milliliter jeder Peptidlösung in ihre eigene neue 50 Milliliter konische Röhre. Fügen Sie 19 Milliliter entionisiertes Wasser in die Rohre mit P2 und P4. Und fügen Sie 19 Milliliter 50%Acetonitril in die Tube mit PKC-Delta-Inhibitor. Fügen Sie 475 Milliliter der P2-Lösung, 25 Mikroliter der P4-Lösung, 500 Mikroliter der PKC-Delta-Inhibitorlösung zu einer 15-Milliliter-Röhre hinzu.
Dann fügen Sie neun Milliliter einer 20 Nanometer BSP-Lösung in die gleiche Röhre. Entfernen Sie die kombinierte Lösung aus dem Biosicherheitsschrank und wickeln Sie das Rohr in Aluminiumfolie. Legen Sie die Röhre über Nacht auf einen Shaker.
Am nächsten Tag, geben Sie die Proben in den Biosicherheitsschrank zurück. Übertragen Sie einen Milliliter Aliquots der BSP/PKCi-Lösung in 1,5 Milliliter Mikroröhren. Zentrifugieren Sie die Mikroröhrchen bei einer Mikrozentrifuge bei 15294 mal g und bei vier Grad Celsius für 30 Minuten.
Übertragen Sie die Mikroröhren zurück in den Biosicherheitsschrank, und entfernen Sie den Überstand aus jedem Rohr, während sichergestellt wird, dass das BSP-Pellet nicht gestört wird. Setzen Sie jedes Pellet in dem gewünschten Lösungsmittel entsprechend der erforderlichen Konzentration wieder ab. Um die BSP/PKCi-Hybridlöslichkeit zu bewerten, gießen Sie 0,5 Milliliter der BSP/PKCi-Lösung in eine Abgrenzungsküvette.
Legen Sie die Küvette auf ein UV-Vis-Spektralphotometer und testen Sie die Spitzenabsorption. In dieser Studie wird der Proteinkinase-C-Delta-Inhibitor mit Gold-Nanopartikeln konjugiert, um einen BSP/PKCi-Hybrid zu bilden. Bei der Bewertung der biophysikalischen Eigenschaften des Hybrids ist Vorsicht geboten, da Sichazer gold-Nanopartikel in einem Lösungsmittel zu aggregieren neigen.
Wenn sich die Nanopartikel aggregieren, ändert sich die Farbe der Lösung von rosa zu violett. Die Proben werden mit einem UV-Vis-Spektralphotometer analysiert, das mit hoher Empfindlichkeit detektieren kann. Wenn der Hybrid nicht aggregiert ist, sollte der Spitzenwert einer Absorption bei 525 Nanometern liegen.
Wenn das BSP aggregiert wird, wird der Absorptionsgipfel nach rechts verschoben. Wie man sieht, nimmt die optische Deltadichte ab, wenn sich Aggregate gebildet haben. Bei der Formulierung der BSP-Peptid-Hybriden ist es wichtig, sich das Verhältnis von Peptiden zu BSP-Lösung zu merken sollte eins zu neun sein.
Diese BSP/PKCi-Formel kann bei Ischämie-Reperfusionsverletzungen in anderen Organsystemen als der Lunge verwendet werden. Alle Peptide können an das BSP anhängen, wenn diese Peptide einen Cysteinrückstand am N-Terminus haben. Dies bedeutet, dass BSP-Peptid-Hybrid verwendet werden kann, um andere Peptid-Medikamente in die Zelle zu transportieren.
Rational gestaltete Peptide sind neue Technologien, die spezifische Protein-Protein-Interaktion in diese Zellen gebracht können. Diese Hier entwickelte Technik kann für die Abgabe neuer Peptidmedikamente oder für modifizierte Versionen bestehender Medikamente verwendet werden.
