Angesichts der großen Auswahl an kurzen Peptidsequenzen kann diese Methode auf viele andere Nanopartikel-Designs erweitert werden. Peptidmodifikation kann das System für diagnostische Zwecke geeignet machen. Die Verkapselung von Krebsplatin zu Arzneimitteln mit biologisch abbaubarem, niedrig toxischem Stabilisierungsmittel ist für pharmazeutische Anwendungen von großer Bedeutung.
Vorläufige In-vivo-Studien mit Eierstockkrebs sind vielversprechend und werden weiter untersucht. Zunächst 50 Milligramm Cisplatin in vier Millilitern reines Wasser bei 60 Grad Celsius aussetzen. Fügen Sie die Silbernitratlösung tropfenweise in die Cisplatin-Lösung und rühren Sie das Gemisch bei 300 bis 400 Umdrehungen pro Minute für zwei Stunden bei 60 Grad Celsius im Dunkeln.
Danach verwenden Sie 10 Gewichtsprozent Salzsäure, um zu bestätigen, dass es keine freien Silberionen in Lösung gibt. Wenn sich bei Zugabe von Salzsäure kein zusätzliches Silberchlorid bildet, zentrieren Sie das Gemisch bei 3, 220-facher Schwerkraft für 10 Minuten. Dekantden Sie den Überstand und filtern Sie ihn durch einen 0,2 Mikrometer Spritzenfilter.
Dann testen Sie das Filtrat auf Platin, indem Sie zwei bis drei Tropfen auf 10 zwei Chloridkristalle auftragen. Platin ist vorhanden, wenn die Suspension dunkelbraun oder orange wird. Als nächstes fügen Sie 13,3 Milligramm Natriumhydroxid in einem Milliliter Wasser in 94,2 Milligramm Suspension von Ölsäure in drei Milliliter Wasser bei 60 Grad Celsius hinzu.
Rühren Sie die Mischung für zwei Stunden bei 60 Grad Celsius. Dann schalten Sie die Hitze aus und rühren Sie bei Raumtemperatur für 16 bis 24 Stunden, um das Rohprodukt als öligen, gelbbraunen Niederschlag zu erhalten. Zentrifugieren Sie das Reaktionsgemisch bei 3, 220-facher Schwerkraft für 10 Minuten, und entfernen Sie den Überstand.
Trocknen Sie die Produkte auf einem Rotationsverdampfer bei 25 Grad Celsius. Das Rohprodukt in fünf Milliliter Acetonitril aussetzen, indem das Produkt durch Zentrifugation gewirbelt und zurückgewinnt. Wiederholen Sie diesen Waschvorgang mindestens zwei weitere Male, um das reine Ölsäure-Platin-II-Konjugat als hellgelben Feststoff zu erhalten.
Erstens, tränken Sie 5,7 Gramm Fmoc geschützt L-Phenylalanin funktionalisierte Wang Harz in 25 Milliliter Dimethylformamid für eine Stunde. Dann das Harz in 15 Milliliter 20%Piperidin in DMF für fünf Minuten einweichen, während es bei 80 RPM schüttelt, um das Amin zu de-schutzn. Das Harz abtropfen lassen und den De-Schutz 20 Minuten wiederholen.
Waschen Sie das Harz anschließend mit DMF und Isopropylalkohol. Sobald der De-Schutz bestätigt wurde, fügen Sie Fmoc geschützte L-Tyrosin TBTU und DIPEA und rühren Sie die Mischung für 16 bis 24 Stunden, um Kopplung durchzuführen. Waschharz mit DMF und Isopropylalkohol.
Führen Sie den Kaiser-Test durch und fahren Sie mit dem De-Schutz und der Wäsche fort, wie zuvor beschrieben. Paar und de-protect Fmoc geschütztLysin in der gleichen Weise. Waschen Sie das Harz anschließend mit DMF, IPA, Methanol, Dichlormethan und Diethylether.
Legen Sie ein Gramm KYF-lagerisches Harz für die FITC-Modifikation beiseite. Das restliche Harz in 95% Trifluoressigsäure einweichen. 2,5% Triisopropylsilan und 2,5% Wasser für drei Stunden, um das Tripeptid aus dem Harz zu spalten.
Das rohe Peptid mit auf 20 Grad Celsius gekühltem Diethylether ausfälten. Waschen Sie den Niederschlag dreimal durch Zentrifugation in 30 bis 40 Milliliter Portionen kalten Diethylethers und trocknen Sie ihn unter Vakuum. Als nächstes mischen Sie das restliche Gramm KYF-Harz mit 120,1 Milligramm 6-Acetohexansäure in 30 Milliliter DMF mit TBTU und DIPEA.
Rühren Sie die Mischung für 16 bis 24 Stunden bei Raumtemperatur, um das Azid modifizierte Tripeptid zu erhalten. Kombinieren Sie dann 253 Milligramm dieses Harzes mit 3,78 Milligramm festem Kupfer(I)iodid 71,9 Milligramm Propargylflorisean und 2,24 Milligramm DIPEA. Lassen Sie die Mischung reagieren, während sie für 24 Stunden schüttelt.
Dann waschen Sie das FITC modifizierte KYF-Lagerharz gründlich. Den FITC modifizierten KYF aus dem Harz lassen und auf die gleiche Weise wie das unveränderte Tripeptid reinigen. Um mit der Vorbereitung der Nanoemoulsion zu beginnen, lösen Sie 10 Milligramm des Ölsäure-Platin-II-Konjugats in 1,5 Milliliter IPA auf.
Zeichnen Sie diese Lösung in eine 5-Milliliter-Spritze, befestigen Sie eine 20-Meter-Nadel und montieren Sie die Spritze auf einer Spritzenpumpe über dem Reaktionsbereich. Stellen Sie die Spritzenpumpe auf 0,1 Milliliter pro Minute ein. Für eine Nanoemulsion mit FITC modifiziertem KYF, lösen Sie ein Milligramm FITC modifizierte KYF und ein Milligramm unverändertes KYF in 20 Milliliter Wasser auf.
Für eine Nanoemulsion mit unverändertem KYF lösen Sie stattdessen zwei Milligramm KYF in 20 Milliliter Wasser auf. Erhitzen Sie die FITC-modifizierte oder unveränderte KYF-Lösung auf 37 Grad Celsius. Stellen Sie sicher, dass die KYF-Lösung bei etwa 400 Umdrehungen umrührt und dass die Spritze auf die Lösung ausgerichtet ist.
Starten Sie dann die Spritzenpumpe, um mit dem Hinzufügen der Ölsäure Platin zwei Konjugat Tropfen klug zu beginnen. Nachdem das Konjugat hinzugefügt wurde, reduzieren Sie die Rührgeschwindigkeit auf 150 Umdrehungen pro Minute und lassen Sie die Lösung auf Raumtemperatur abkühlen. Fahren Sie 16 bis 24 Stunden lang mit dem Rühren fort.
Konzentrieren Sie dann das Nanoemultion in einer 10.000 Daltons Zentrifugalfiltereinheit. Waschen Sie die Nanoemulsion dreimal in einer Zentrifugalfiltereinheit mit vier Milliliter-Portionen Reinstwasser. Und dann speichern Sie es als wässrige Lösung bei vier Grad Celsius.
Das Endprodukt ist opaleszierend für KYF-Nanopartikel und fluoreszierend für FITC-modifizierte Nanopartikel. Die Tröpfchen in einer Nanoemulsion, die mit unverändertem KYF hergestellt wurden, waren kugelförmig, gut dispergiert und relativ gleichmäßig. Basierend auf Transmissionselektronenmikroskopiebildern hatten die Kerne einen Durchmesser von etwa 107 Nanometern.
Die FITC-modifizierte Nanoemulsion, die hier grün erscheint, könnte in Zellen aus verschiedenen Eierstockkrebszelllinien eindringen. Während der hydrodynamische Durchmesser beider Formulierungen während der viermonatigen Lagerung im Wasser zunahm, blieben die Gesamtabmessungen erhalten. Darüber hinaus wurde nach einem Tag der Inkubation in 20% fetalem Rinderserum keine Opsonisierung der Emulsion beobachtet.
Die Freisetzung von Platin aus der Emulsion war am langsamsten bei pH 7,4 mit nur 20,8% des Platins, das nach vier Stunden freigesetzt wurde. Die Platinfreisetzung beschleunigte sich, als der pH-Wert abnahm. Die platinhaltige KYF-beschichtete Nanoemulsion reduzierte die Lebensfähigkeit dieser Eierstockkrebszelllinien in einem viel größeren Maße als carboplatin, das klinisch relevante Analog.
Die Nanoemulsion zeigte auch eine vergleichbare oder größere Verringerung der Lebensfähigkeit als Cisplatin in fünf der sechs Zelllinien. Die KYF-beschichtete Nanoemulsion führte durchweg zu einer vergleichbaren oder größeren Verringerung der Lebensfähigkeit als das Oleicsäure-Platin-II-Konjugat allein. Dies ist eine einfache, effiziente Methode zur Verkapselung hydrophober Therapeutika in das Nanopartikelgerüst der Tripeptidbasis.
Kurze Peptide sind biologisch abbaubar und haben eine geringe Toxizität, was für die Medizin und Biotechnologie von Bedeutung ist. Führen Sie dieses Verfahren unter der Dunstabzugshaube durch, um eine Exposition gegenüber organischen Lösungsmitteln zu vermeiden. Platinölsäure und KYF Platin-Nanoemulsionen haben Krebsschutzeigenschaften und sollten daher mit besonderer Sorgfalt behandelt werden.
Diese Methode ist einfach in Bezug auf niedrige Filabilator Aktivität und Ausrüstung, aber es stützt sich auf die ordnungsgemäße Anwendung der Synthesestrategie, und zugrunde liegende chemische Konzepte. Unsere Methode kann erweitert werden, um andere kleine Wirkstoffmoleküle zu liefern. Der Nanopartikelkern besteht aus Ölsäure und eignet sich daher für die Verkapselung hydrophober Wirkstoffe.
