Unser Protokoll bietet ein einfaches, kostengünstiges, reproduzierbares und klinisch relevantes Modell für Forscher auf dem Gebiet der venösen Intimhyperplasie. Unser Protokoll ist wirtschaftlich, klinisch und technisch ausgewogen. Daher ist es sehr empfehlenswert für Forscher, die ihre In-vitro-Ergebnisse auf eine In-vivo-Einstellung anwenden möchten.
Wir glauben, dass unser Protokoll auf ein größeres Tiermodell für die Entwicklung neuer Behandlungsstrategien bei ischämischen Herz- und Unterextremitätskrankheiten angewendet werden kann. Unser Protokoll ist vor allem für den Bereich der Herz-Kreislauf-Chirurgie relevant. Jedoch, Es kann auch verwendet werden, um degenerative Veränderungen in arteriovenösen Fisteln bei Patienten mit Nierenerkrankungen im Endstadium anzugehen.
Nach lokaler Anästhesie, und prophylaktische Antibiotikum analgetikatische Verabreichung, desinfizieren Sie die chirurgische Stelle mit 10%povidon-jod. Und machen Sie einen 50 bis 60 Millimeter Schnitt mit einem chirurgischen Skalpell im Zervixbereich des anästhesisierten männlichen japanischen weißen Kaninchens. Sezieren Sie die subkutanen Gewebe und Faszien unverblümt, um ein 20 bis 30 Millimeter großes Segment der Jugularvene freizulegen.
Und verwenden Sie 4-0 Seidennähte, um alle Zweige der exponierten Vene zu ligten. Legen Sie eine 2-0 Seidennaht um die inneren und äußeren Jugularvenen und machen Sie einen ein Millimeter Schnitt in der venösen Wand der distalen Seite der Vene. Legen Sie einen 2-französischen Ballonkatheter vom Schnitt in Richtung der proximalen Seite der Vene ein.
Und ligate die 2:0 Seidennaht an den distalen Stellen der Jugularvenen. Aufblasen Sie den Ballon mit 200 Mikroliter Luft. Und verwenden Sie den Ballon, um die Intima der Vene dreimal für endotheliale Peeling zu denunzieren.
Nach dem dritten Durchgang, ligate das proximale Ende der Vene und schnitt die Vene an der distalen Stelle. Dann legen Sie einen 20 Gauge intravenösen Katheter in die geerntete Vene von der distalen in die proximale Richtung, und schneiden Sie die Vene an der proximalen Stelle. Um die Halsschlagader mit der Erntejugularvene zu durchondieben, legen Sie ein 20 bis 30 Millimeter großes Segment der ipsilateralen Halsschlagader aus.
Und trennen Sie die Arterie sorgfältig von der nahen Vene und Nerven. Ligate alle Zweige der exponierten Vene mit 4-0 Seidennaht. Und intravenös 200 internationale Einheiten pro Kilogramm Heparin-Natrium verabreichen.
Klemmen Sie die proximalen und distalen Enden der Arterie mit chirurgischen Gummiklemmen. Und schneiden Sie die Arterie zwischen den Klammern. Injizieren Sie normale Saline in die eingeschnittene Karotisarterie proximal und distally, um die Arterie zu distend.
Und legen Sie die Erntevene in der Nähe der Arterie, um das Gefäß in einer umgekehrten End-to-End-Manier anzuastomose. Um das proximale Ende der Vene an das distale Ende der Arterie anzutreiben, legen Sie zwei Ankerstiche von 8-0 Polypropylen an der Stelle und der gegenüberliegenden Stelle. Fügen Sie Stiche an der Oberseite der Anastomoselinie zwischen den Ankerstichen hinzu.
Drehen Sie die Arterie und die Venentransplantation auf den Kopf. Und fügen Sie Stiche auf den verbleibenden Teil der Anastomose-Linie. Als nächstes entfernen Sie den intravenösen Katheter aus der Vene und klemmen Sie das Venentransplantat proximal.
Declamp die Halsschlagader distally. Und beobachten, ob sich die Venentransplantation allmählich ausdehnt. Verwenden von 8-0 Polypropylen unterbrochennähte Nähte, anastomose das distale Ende der Vene an das proximale Ende der Arterie.
Und entklemmen Sie die Arterie, um Blutungen von den Anastomose-Stellen zu überprüfen. Schließlich ligate die innere Halsschlagader mit einer 4-0 Seidennaht, um einen schlechten Ablaufzeitzustand zu simulieren und intimale Hyperplasie zu erleichtern. Dann reinigen Sie die Wunde mit Saline.
Schließen Sie den Schnitt mit 3-0 Polyglactin 910 in Schichten. Und lassen Sie das Kaninchen vollständig mit Überwachung erholen, bevor sie das Tier in seinen Hauskäfig zurück. In diesem repräsentativen Bild kann eine erfolgreiche Intimhyperplasie nach 2 Wochen nach venöser Interpositionsoperation beobachtet werden.
Hierkönnen die therapeutischen Wirkungen von microRNA-145 geladenen Poly(Milch-Co-Glykolsäure)Nanopartikeln auf die intime Hyperplasie-Morphologie beobachtet werden. Tatsächlich führt die Behandlung mit microRNAs, die mit Poly(Milch-Co-Glykolsäure)-Nanopartikeln beladen sind, zu einer signifikanten Dämpfung der intimalen Hyperplasie. Darüber hinaus zeigt die Immunfärbung für Ki-67, einen zellproliferativen Marker, weniger Ki-67-positive Zellen innerhalb der behandelten microRNA-145-Gruppe, was auf eine Phänotypänderung in den vaskulären glatten Muskelzellen vom unreifen proliferativen Zustand in den reifen kontraktilen Zustand hindeutet.
Das Hauptziel unseres Protokolls ist es, die Durchgängigkeit des implantierten Transplantats zu erreichen. Es ist auch wichtig zu bestätigen, dass sich das Transplantat nach der Declamping der Halsschlagader ausdehnt.
