Dieses überlebensfähige Leberbiopsieverfahren bei Mäusen mit alkoholfreier Steatohepatitis (NASH) ermöglicht sowohl den Ausschluss von Tieren, die keine NASH haben, als auch die genaue Messung der Reaktionen auf Interventionen. Dieses Verfahren imitiert eng das klinische Studiendesign für NASH-Studien, die die Pathologie der Leber nach der Behandlung vergleichen und eine genauere Beurteilung der Wirksamkeit von Arzneimitteln ermöglichen. Die Exposition des Leberlappens kann zunächst eine Herausforderung sein.
Üben Sie, das Gewebe mit dem Finger oder einem baumwollgekippten Applikator zu entlarven, zuerst, um die beste Passform für Sie zu finden. Nach der Bestätigung eines Mangels an Reaktion auf Zehenkneifung, machen Sie einen ein- bis zwei Zentimeter langen, längsförmigen Bauchhautschnitt sofort kaudal zum xiphoiden Prozess und leicht zur linken Seite der anästhesierten Maus. Verwenden Sie Zangen und Scheren, um die Haut stumpf zu sezieren, bis die Bauchwand ausgesetzt ist und die Leber unter dem Muskelgewebe visualisiert werden kann.
Mit einer sterilen Skalpellklinge, machen Sie einen Ein- bis Zwei-Zentimeter-Einschnitt in der Bauchwand, um den linken seitlichen Lappen der Leber zu belichten, und legen Sie einen sterilen Wattestäbchen unter den linken Seitenlappen, um den Durchfall freizulegenden Teil sanft zu extrahieren. Legen Sie ein steriles, mit Herzhaftgetränktem Stück Gaze unter den exponierten Lappen und verwenden Sie eine sterile Schere, um ein 30- bis 50-Milligramm-, keilförmiges Stück Gewebe aus der extrahierten Leber zu verbrauchen. Schneiden Sie ein Stück resorbierbaren Gelatine komprimiertschwamm ähnlich in der Größe, um die Keilstück der Leber, und verwenden Sie sterile Zangen, um den Schwamm in den geschnittenen Teil der Leber einfügen.
Halten Sie den Schwamm mit der Zange an Ort und Stelle, bis die Gelatine an der Leberoberfläche haftet und Hämostase erreicht wird, bevor die Leberbiopsie in einen geeigneten Behälter für ihre nachgelagerte Analyse gelegt wird. Geben Sie die Leber vorsichtig in die Bauchhöhle zurück, wobei Darauf geachtet wird, den Schwamm nicht zu stören, und, beginnend und endend mit einem vollen quadratischen Knoten, die Bauchwand mit 5-0 beschichteten resorbierbaren Nähten befestigen. Schließen Sie dann die Haut mit sieben Millimeterwundenclips, bestätigen Sie einen vollständigen Verschluss nach der Platzierung, und bringen Sie die Maus in einen sauberen Käfig auf einer beheizten Oberfläche mit Überwachung bis zur vollständigen Genesung zurück.
In diesem repräsentativen Experiment wurden 118 Mäuse nach 29 Wochen auf eine benutzerdefinierte Diät mit hohem Fett-, Fruktose- und Cholesteringehalt biopsien, um NASH zu induzieren. Für jede Biopsie wurde dann der Gehalt an Fibrose und Steatose bewertet. Mäuse wurden aufgrund niedriger oder hoher Fibrose und abnormer Gewichtsverlustoderin oder Wundheilung von der Studie ausgeschlossen, und die übrigen Mäuse wurden sechs Wochen lang mit dem Fahrzeug oder dem Glucagon-ähnlichen Peptid-1-Rezeptor-Agonistenliraglutid behandelt.
In den mit Fahrzeugen behandelten Gruppen zeigte eine Maus einen Anstieg der Fibrose und vier Mäuse zeigten einen Anstieg des NASH-Aktivitätsscores. Die Liraglutid-Behandlung war mit einer allgemeinen Verbesserung der Fibrose verbunden, wobei sich 17% der Behandlungsgruppe verbesserten und 83% unverändert blieben. In ähnlicher Weise verbesserte die Liraglutid-Behandlung den NASH-Gesamtwert, wobei 66 % der Gruppe einen verbesserten NASH-Aktivitätswert aufwiesen und 33 % unverändert blieben.
Darüber hinaus verbesserte die Liraglutid-Behandlung die Entzündung, wobei 75% der Gruppe nach der Behandlung einen niedrigeren Entzündungswert hatten, während fahrzeugbehandelte Tiere eine Zunahme der Entzündung erlebten. Steatose war nicht von der agonistischen Behandlung betroffen und blieb in beiden Gruppen vor und nach der Intervention unverändert. Achten Sie darauf, das ausgeschnittene Stück Leber nicht übermäßig zu beschädigen, um sicherzustellen, dass es angemessen für Ihre Bedürfnisse analysiert werden kann.
Dieses Verfahren kann verwendet werden, um klinische Studiendesigns zu imitieren, indem die Vor- und Nachbehandlungseffekte neuer Therapeutika auf NASH-Lebern verglichen werden.
