Isolierung von intaktem Augapfel zur Beschaffung von integralem Okularemoberflächengewebe für die histologische Untersuchung und Immunhistochemie

Unser Labor konzentriert sich auf die Augenentwicklung und die Krankheiten. Dieses Protokoll beschreibt eine Methode, um den Schädel und die Orbitalknochen sequenziell vom sezierten Mauskopf zu entfernen. Augenlider, Augenoberfläche, Linse und Netzhaut in einem Stück zusammen lassen. Das Protokoll kommt Augenärzten zugute, die sich für Augenoberflächendidaktik interessieren. Ich bin Dianlel Guo, um die Technik mit einem wahrscheinlichen Kampf zu erzählen, wenn ich versuche, die Beschädigung des Augapfels zu vermeiden, während die Gesichtsknochen sezieren. Der Hauptvorteil dieser Sezierstoffe besteht darin, dass die Integrität des Augenoberflächenepithelblatts gut erhalten ist und die verschiedenen Teile der Augenoberfläche durch Histologie oder Immunfärbung in einem einzigen Abschnitt untersucht werden können. Achten Sie darauf, alle kleinen Knochen und Ablagerungen von den Weichteilen abzuschneiden. Grund, es wird Narbenspuren auf Gewebeabschnitt sonst verursachen. Nach der Einschläferung der Maus, verwenden Sie eine gerade Schere, um den Kopf abzuschneiden und bisect es entlang der sagittalen Mittellinie beginnend an der intraparietalen Knochen rostral zur Nase. Legen Sie jede Hälfte des geteilten Kopfes in eine saubere Petrischale und schneiden Sie den Kiefer und die Zunge mit einer scharfen Schere ab. Befreien Sie den Sehnerv, indem Sie ihn vor der optischen Chiasm-Position vom Gehirn abschneiden. Und entfernen Sie alle Hirngewebe einschließlich der Olfaktor-Lampe, die an der Schädelwand befestigt ist. Nun sollen alle verbleibenden Gewebe alle Schädel- und Orbitalknochen haben, die mit dem Augapfel verbunden sind. Waschen Sie die restlichen Teile mit PBS, um Blut und Haarreste zu reinigen. Fixieren Sie das Gewebe vorab, indem Sie es in ein 50-Milliliter-Rohr legen, das 4% Paraformaldehyd enthält, und sie bei Raumtemperatur drehen. Nachdem die Präfixierung abgeschlossen ist, waschen Sie den sezierten Kopf in PBS dreimal schnell, um die gebrochenen Haare und Fixativen weiter zu beseitigen. Legen Sie das Gewebe in eine 10 Zentimeter lange Petrischale und schneiden Sie den Schädel in drei Teile entlang der in Abbildung eins des Textprotokolls angegebenen Ebenen. Der Augapfel und die Steckdose sind im mittleren Teil des Schädels unter ethmoiden, frontalen und kieferllbeinen Knochen versteckt. Verwenden Sie zwei Paare von Nummer vier geradeZange, um den ethmoiden Knochen abzuschälen und die Frontal- und Kieferknochen vollständig freizulegen. Dann teilen Sie die Schädeloberfläche geographisch in vier Bereiche. Setzen Sie die Spitze der gekrümmten Zangen horizontal in jeden Bereich ein, um die Oberkiefer- und Frontalknochen sequenziell zu entfernen. Danach werden die darunter liegenden Tränen- und Jugalknochen freigelegt. Entfernen Sie die beiden Knochen und die damit verbundenen subkutanen Muskeln und Fette, die den Augapfel umgeben. Schneiden Sie den Augapfel mit befestigten Augenlidern und Haut in einen kleinen, quadratischen Block, um das Gewebevolumen zu reduzieren und die Orientierung des Gewebes beim Einbetten zu erleichtern. Augapfel und zugehöriges Gewebe wieder in 4%Paraformaldehyd geben und über Nacht bei 4 fixieren