Der Planarian Locomotor Velocity Test ist ein Mittel zur schnellen Beurteilung von Stimulans und möglichen Entzugserscheinungen für eine Vielzahl von biologischen Modifizierenden, die die Beweglichkeit beeinflussen könnten. Dieser Aufsatz ist leicht zu kontrollieren und bietet eine einfache und zugängliche Methode, um zuverlässige Verhaltensdaten auch in den grundlegendsten Forschungseinstellungen zu generieren. Da das planarische Nervensystem über ein zentralisiertes rudimentäres Gehirn, eine bilaterale Symmetrie und analoge Neurotransmittersysteme verfügt, bieten Verhaltensstudien mit diesen Organismen präklinische Einblicke in mögliche Wirbeltierreaktionen.
Experimente können durch physiologische Signalmodifizierer, Medikamente oder sogar gentechnisch veränderte Planarier weiter beeinflusst werden, um Einblicke in die damit verbundenen biologischen Mechanismen zu geben. Es ist wichtig, den Planarier zu haben, damit die Übertragungen zwischen Containern sie nicht belasten, und die Rasterlinienkurven zwischen Labormitgliedern zu standardisieren. Der beste Weg, um konsistente Ergebnisse aus diesem Verhaltensessay-Experiment zu erhalten, ist zu sehen, wie erfahrene Benutzer sie durchgeführt haben.
Nach der Einrichtung einer planariellen Kultur, füttern Sie die Würmer ad libitum auf einem regelmäßigen zweimal pro Woche Zeitplan von gehackten Bio gekochten Eiern oder gemischte Bio-Rindsleber für ein bis zwei Stunden. Nach der Fütterung entfernen Sie verschmutztes Wasser aus dem Behälter und verwenden Sie einen flachen Aquarellpinsel, um Lebensmittelabfälle und Schleim, die am Behälter haften, auf ein Papiertuch zu übertragen. Verwenden Sie frisches Quellwasser und sanftes Wirbeln oder Rühren, um die Planarier zu vertreiben und die Würmer in einen sauberen Behälter zu entlagern.
Schieben Sie eine Breite Bohrung Pipette Spitze unter alle Planarier restamweiter auf dem alten Behälter, um ihre Übertragung auf die neue Schale zu erleichtern und sorgfältig dekantieren das Transferwasser. Dann bedecken Sie die Planarier im neuen Behälter mit frischem Quellwasser. Um einen planarischen Lokomotor Velocity Test durchzuführen, stellen Sie zunächst sicher, dass die fünf bis zehn Tage verhungerten Planarier vollständig mit vollständigen und pigmentierten Köpfen und Schwänzen ausgebildet sind.
Wenn die Planarier bereit sind, legen Sie eine saubere Petrischale mit 10 ZentimeterDurchmesser auf ein Stück vorlaminiertes Gitterpapier mit 0,5 Zentimeter Quadraten pro Versuchsgruppe und fügen 20 Milliliter unverfälschtes Quellwasser für die Kontrollgruppe oder 20 Milliliter Quellwasser hinzu, das die entsprechende Konzentration des getesteten Naturprodukts zu jeder Schale enthält. Positionieren Sie eine Kamera über der vorbereiteten Bewegungsgeschwindigkeitsstimulationsschale und fügen Sie fünf bis zehn Milliliter unverfälschtes Quell- oder Quellwasser, das die entsprechende Konzentration der Versuchsmasse enthält, zu einem entsprechend großen Gewöhnungsbehälter hinzu. Als nächstes verwenden Sie einen kleinen sauberen Aquarellpinsel, um einen Planarier sanft vom Kulturbehälter in den vorbereiteten Wohnbehälter zu übertragen und dem Planarier zwei Minuten lang die Lösung im Behälter zu überlassen.
Die Forschung wird es den Planariern ermöglichen, sich auf den Pinsel zu bewegen und die Tiere vorsichtig zu heben, ohne sie zu zwingen. Am Ende der Gewöhnungsperiode verwenden Sie den Pinsel, um den Planarier sorgfältig in die Mitte der vorbereiteten Bewegungsstimulationsschale zu übertragen, die die gleiche Lösung wie der Gewöhnungsbehälter enthält, und starten Sie die Kamera, um 10 bis 11 Minuten Bewegung des Planariers aufzuzeichnen. Um die Auswirkungen des Entzugs am Ende der Gewöhnungszeit zu testen, spülen Sie den Planarier in einer fünf Zentimeter großen Schale, die nur Quellwasser enthält.
Bevor Sie den Wurm in die Mitte der vorbereiteten Bewegungsschale mit frischem Quellwasser übertragen und die Kamera starten, um 10 bis 11 Minuten Bewegung aufzuzeichnen. Das Kamera-Setup ermöglicht eine klare Sicht auf den Planarier und das Rasterpapier und ermöglicht eine genaue Einschätzung des Fortschritts des Tieres für die Dauer des Experiments. Die Datenerfassung sollte die Gesamtzahl der gekreuzten Rasterlinien sowie die gesamtzahle Anzahl der pro Minute des Experiments gekreuzten Linien umfassen.
Um die Ergebnisse jeder Studie zu standardisieren, können die planarischen Bewegungsgeschwindigkeitsläufe berechnet und als Anzahl der Kästchen gekreuzt werden, die relativ zum Fortschritt des übereinstimmenden Steuerwurms gekreuzt wurden. Als Maßstab: Planarier im Quellwasser decken in der Regel etwa 25 Kisten in drei Minuten ab. Eine Reihe von Testreagenzkonzentrationen kann untersucht werden, um die planarische Beweglichkeit als Reaktion auf die von Interesse beinteresthaltigen Testverbindungen zu bestimmen.
Die Entzugsdaten können anhand der Quantifizierung der Anzahl der im Quellwasser gekreuzten Gitterleitungen im Verhältnis zur Quellwasserkontrolle bewertet werden, nachdem die Tiere in dem untersuchten biomodulierenden Produkt gewöhnt wurden. Die Frühjahrswasserkontrollplanarier bewegen sich für die Dauer des Experiments über Gitterleitungen. Manchmal jedoch hören die Testplanarier auf, Während des Aufsatzes Gitterlinien mit Verhaltensweisen zu kreuzen, die für das getestete Produkt charakteristisch sind.
Dies deutet darauf hin, dass eine andere Analysemethode erforderlich sein könnte. Solche Fälle können nachverfolgt werden, und die Daten können als Prozentsatz der Gesamtzahl der Tiere dargestellt werden, die einer bestimmten Reagenzkonzentration ausgesetzt sind. Es ist wichtig, den Planarier zu behandeln, damit sie während des Transfers zwischen den Gerichten nicht beschädigt werden.
Nach der Bestimmung der Auswirkungen unterschiedlicher Konzentrationen eines Naturprodukts können biologische Signalwegmodifikatoren hinzugefügt werden, um dynamische Veränderungen der ausgangsergebnisse zu beobachten. Der Planarian Locomotor Velocity Test wurde verwendet, um Stimulation und Entzug mit bekannten pharmakologischen Mitteln zu testen. Wir haben das System angepasst, um diese Konzepte mit natürlichen Produkten zu studieren.
