Dieses Protokoll ermöglicht es Forschern, die Auswirkungen von chronischem Stress auf das mühsame Reagieren sowohl bei männlichen als auch bei weiblichen Mäusen zu untersuchen. Ein Vorteil dieser Technik ist, dass sowohl männliche als auch weibliche Mäuse gleichzeitig ein validiertes chronisches soziales Niederlagenparadigma durchlaufen können, das es ermöglicht, Belohnungsverhalten direkt zu vergleichen. Historisch gesehen hat die präklinische Forschung zu affekten Störungen Verhaltensaufgaben genutzt, die die Vermeidung bedrohlicher Umgebungen beinhalten.
Belohnungs- und Motivationsaufgaben, wie z. B. die aufwandsbezogene Auswahl, können jedoch eine größere translationale Relevanz bieten. Um die Fahrzeuglösung vorzubereiten, lösen Sie 3,375 Gramm Beta-Cyclodextrin in 750 Milliliter Leitungswasser in einem Ein-Liter-Schraubglasbehälter auf. Um die Corticosteron-Lösung vorzubereiten, lösen Sie 3,375 Gramm Beta-Cyclodextrin in 750 Milliliter Leitungswasser auf, gefolgt von der Zugabe von 26,25 Milligramm Corticosteron.
Lösen Sie das Corticosteron in Lösung in einem Ultraschallreiniger-Wasserbad für ca. 30 Minuten bei 40 Kilohertz auf, bis die Flüssigkeit ein klares Aussehen zeigt, füllen Sie dann die Wasserflaschen der Fahrzeug- und Corticosteron-Mausgruppe mit den entsprechenden Lösungen und erfassen Sie das Volumen der zweimal pro Woche verbrauchten Flüssigkeit. Um die Mäuse zum Y-Maze zu gewöhnen, legen Sie am Tag nach der Nahrungsentzug eine große Anzahl von 20 Milligramm Getreide-basierte Futterpellets in die Kappen von zwei 50 Milliliter Zentrifugenrohren und legen Sie eine Kappe am Ende jedes Arms des Y-Maze, dann legen Sie eine Maus in die Startbox des Y-Maze mit dem Startbox-Teiler an Ort und Stelle für ein paar Sekunden, bevor Sie den Teiler entfernen und die Maus zu erkunden Minuten. Nach zwei Tagen Y-Maze-Gewöhnung für Pellets in eine Kappe für den hohen Belohnungsarm legen und zwei Pellets in eine Kappe für den niedrigen Belohnungsarm legen.
Für eine hohe Belohnung erzwungene Auswahl-Test, blockieren Sie den Zugriff auf die niedrige Belohnung Arm und legen Sie die Maus in der Startbox für ein paar Sekunden vor dem Entfernen der Trennwand, so dass die Maus 60 Sekunden, um die hohe Belohnung Arm zu betreten, um die verfügbaren Pellets zu verbrauchen. Für eine niedrige Belohnung erzwungene Auswahl-Test, blockieren Sie den Zugriff auf den High Reward Arm. Für ein Training zur freien Wahl beginnen Sie jede Sitzung mit einer Prüfung mit einem hohen und einem niedrigen Arm, bevor Sie 10 Tests zur freien Wahl absolvieren.
Erlauben Sie der Maus, einen der beiden Labyrintharme auszuwählen. Sobald die Maus bis zum Ende des Arms bis zur Kappe von Pellets gereist ist, legen Sie einen Armteiler hinter die Maus und verriegeln Sie das Tier, bis es die Pellets verzehrt hat. Zeichnen Sie auf, welcher Arm für alle 10 Kostenlosen-Testversionen täglich ausgewählt wird.
Sobald eine Maus den High-Reward-Arm für 7 von 10 Versuchen an einem freien Trainingstag ausgewählt hat, legen Sie eine 10-Zentimeter-Barriere auf halbem Weg nach unten in den hohen Belohnungsarm im Y-Labyrinth und führen Mindestens zwei hohe und niedrige Arm erzwungene Auswahlversuche mit der Barriere an Ort und Stelle durch. Nachdem Sie alle vier Versuche abgeschlossen haben, legen Sie die Maus in die Startbox und lassen Sie die Maus einen Arm für 10 freie Auswahlversuche mit der 10-Zentimeter-Barriere zum hohen Belohnungsarm auswählen. Am nächsten Tag, gewöhnen und testen Sie die Maus, wie gezeigt, aber verwenden Sie eine 15 Zentimeter Barriere im hohen Belohnungsarm.
Testen Sie am nächsten Tag die Maus mit einer 20-Zentimeter-Barriere, wie gezeigt. Für chronische nichtdiskriminierende soziale Niederlagen Stresstests, richten Sie die Käfige von CD1 Männchen mit C57BL/6J Männchen und Weibchen mit CD1 Käfigen in der Vorderseite und C57BL/6J Käfige neben den CD1 männlichen Mäusen im sozialen Defeat Room aus. Um die Studie zu starten, legen Sie ein erwachsenes männliches und ein erwachsenes weibliches experimentelles C57BL/6J Maus in den Heimkäfig jedes CD1-Aggressormännchenfür eine fünfminütige soziale Niederlage Sitzung und zeichnen Sie die Angriffslatenz und Häufigkeit des Angriffs für männliche und weibliche Versuchstiere auf.
Am Ende der Sitzung, übertragen Sie die männliche C57BL/6J Maus in den Käfig der mituntergebrachten CD1 Männchen durch eine klare perforierte Plexiglas-Barriere getrennt. Trennen Sie die angreifenden CD1- und weiblichen C57BL/6-Mäuse mit einer ähnlichen klaren perforierten Plexiglasbarriere. Legen Sie für eine Kontrollsitzung eine weibliche Steuermaus in den Heimkäfig eines Steuermännchens C57BL/6 Maus.
Legen Sie nach fünf Minuten einen durchsichtigen Plexiglasteiler zwischen die Tiere. Am Ende des ersten Experiments drehen Sie die Mäuse für die verbleibenden neun Niederlagensitzungen, so dass jedes männliche und weibliche Paar C57BL/6 um einen Käfig nach links gedreht wird, um eine neue Interaktion mit neuartigen CD1-Mäusen für jede Sitzung zu ermöglichen. Chronisches Corticosteron und chronisch nichtdiskriminierende soziale Niederlagenstressmäuse weisen beide ein reduziertes mittleres Körpergewicht im Vergleich zu Fahrzeug- und Kontrolltieren auf.
Diese Mäuse konsumierten auch weniger mittlere Hauskäfig Labor Chow. Fahrzeug- und Corticosteron-verabreichte Mäuse verbrauchen ein ähnliches Volumen an Flüssigkeit über vier Wochen Behandlung und drei Wochen Verhaltenstests. Chronischer nichtdiskriminierender sozialer Niederlagenstress erzeugt einen maladaptiven Phänotyp bei anfälligen Mäusen im Vergleich zu widerstandsfähigen oder kontrollierbaren Mäusen, die nicht chronischen nichtdiskriminierenden sozialen Niederlagen ausgesetzt sind und eine Verkürzung der Zeit in der Interaktionszone mit einer neuartigen CD1-Maus zeigen.
Sowohl chronisches Corticosteron als auch chronisch nichtdiskriminierende soziale Niederlagenstressmäuse erzeugen eine Verschiebung der mühsamen Reaktion, wenn die Barrierehöhe auf 15 und 20 Zentimeter ansteigt. Hohe und niedrige Belohnung Armlatenz mit der 15-Zentimeter-Barriere wird nicht durch Corticosteron Verwaltung beeinflusst und ist ähnlich für beide Gruppen mit niedrigen und hohen Belohnung Arme. Wichtig ist, wenn chronischer Corticosteron oder chronischer nichtdiskriminierender sozialer Niederlagenstress das Lernen der Y-Maze-Barriereaufgabe beeinträchtigt, können diese Mäuse das Kriterium in Freien-Wahl-Trainingseinheiten nicht erreichen, was sich auf die anschließende Interpretation des Barriereergebnisses auswirkt.
Darüber hinaus kann die soziale Interaktionsaufgabe verwendet werden, um die Mäuse in widerstandsfähige und anfällige Populationen sowie durch Sex zu schichten. Bei der Durchführung der Y-Maze-Barriereaufgabe ist es wichtig, sowohl den ausgewählten Arm als auch die Latenz aufzuzeichnen, um die Belohnung für Lebensmittelpellets in jeder einzelnen Studie zu erreichen. Andere wichtige und translationsrelevante belohnungsbezogene Verhaltensweisen, wie z. B. Ergebnisabwertung oder progressives Verhältnis, können nach der chronischen Corticosteron-Sozialniederlage oder chronischen nichtdiskriminierenden sozialen Niederlagenprotokollen durchgeführt werden.
