Eine 3D-Schwanz-Explant-Kultur zur Untersuchung der Wirbeltiersegmentierung bei Zebrafischen

3-D-Zebrafischschwanz-Explantierungen Lassen Sie uns die Transparenz von Zebrafischembryonen während der Somite-Entwicklung und Wirbeltiersegmentierung in vollem Umfang nutzen. Füllen Sie ein leeres Paarungsbecken mit Fischsystemwasser. Reinigen Sie das Sieb mit Systemwasser.

Erhöhen Sie die Barrieren zwischen paarenden Paaren. Bewegen Sie das Fischpaar selektiv in den Süßwassertank. Sammeln Sie Embryonen im Sieb durch Wassertransfers mit einem leeren Tank.

Die gesammelten Embryonen mit Fischsystemwasser abspülen und auf eine Petrischale drehen. Ethanol-Glasur-Dissektionswerkzeuge. Erstellen Sie zwei Schichten von Bändern auf Dias.

Schneiden Sie die horizontalen Seiten tiefer Kammern ab. Komplette Kammerschnitte mit vertikalen Seiten. Ziehen Sie das Klebeband von der Kammeroberfläche ab.

Zellkulturmedien in eine Röhrchen gießen. Mischen Sie Calciumchlorid 2,8 Millimolar Endkonzentration. Fügen Sie eine antibiotische Lösung hinzu.

Aliquot Dissektionsmedien in einer separaten Röhre. Ergänzen Sie das fetale Rinderserum, um Gewebekulturmedium zu machen. Embryonen mit Nadeln entkorrieren.

Spülen Sie die Embryonen in einer Süßwasserschale aus und sammeln Sie sie zur Explanting. Stabilisieren Sie den Embryo mit der Nadel und beginnen Sie mit dem Entjochen. Schneiden Sie die übrig gebliebenen Gewebe ab.

Übertragen Sie die Explants auf den Coverlip. Das Gewebe abflachen und überschüssige Medien mit Pipette heraussaugen. Legen Sie den Abdeckr auf das Wachstumsmedium, das die Gleitkammer enthält.

Legen Sie das Explantgewebe auf ein Gewebetuch. Tragen Sie Tauchöl auf das Objektiv auf. Montieren Sie die Objektträgerkammer auf dem Mikroskop.

Passen Sie die Laserkanäle für die Bildaufnahme an. Überprüfen Sie die Z-Layer-Grenzwerte der Probe. Setup-Time-Imaging und Z-Layer.

Das 3D-Schwanzexplantierungssystem hält die Zellintegration in die Schwanzknospe und die überschüssige Dehnung wie ganze Embryonen intakt. Es ist auch möglich, eine übermäßige Dehnung zu stoppen, indem die Oberfläche chemisch mit Kollagen typ eins aktiviert wird. Das 3D-Zebrafischschwanz-Explants-System ermöglicht es uns, die Transparenz von Zebrafischembryonen zu nutzen, indem wir hochauflösende und nahezu objektive Mikroskopiebilder aufnehmen können.

Darüber hinaus können wir den Überschuss an Dehnung von der Morphogensignalisierung entkoppeln und auch die Morphogensignalquellen mit einfachen Dissektionsmethoden steuern.