Die Arbeit berichtete über die Identifizierung von Chemoattraktiva von Rhizobakterien in Wurzelexsudaten unter Verwendung eines verbesserten Chemotaxis-Assays. Chemotaxis-Implantatwurzelbetätigungen sind wichtig für die Wurzelbesiedlung für das Pflanzenwachstum, die Förderung von Rhizobienbakterien und für die Bereitstellung der hilfreichen Fraktionen von Pflanzen-Mikroben-Interaktionen. Viele Methoden wurden zur Analyse der bakteriellen Chemotaxis verwendet.
Zum Beispiel Schwimmplattenmethode, Cappilary-ähnliche Methode, mikrofluidisches Slipchip-Gerät. Der Experimentzyklus der Schwimmplattenmethode war lang. Der experimentelle Fehler der Cappilary-ähnlichen Methode wurde gestartet, mikrofluidische Slipchip-Gerät ist teuer zu experimentieren.
Wir haben eine einfache Methode etabliert, um schnell das Chemoattraktivum zu identifizieren, das die chemotaktische Bewegung von rhizosphärenwachstumsfördernden Bakterien mit sterilen Glasobjektträgern ohne komplizierte Schritte induzieren könnte. Die Methode reduzierte den Fehler der Plattenzählung und verkürzte den Experimentzyklus. In Bezug auf die Identifizierung einer chemoattraktiven Substanz könnte die neue Methode 2-3 Tage einsparen und auch die Kosten für experimentelle Materialien senken.
Verteilen Sie zufällig Reissamen in der Anbaukammerkultur entsteht für eine Woche und fügen Sie zweimal steriles Wasser hinzu. Wählen Sie die Reissämlinge ähnlicher Größe aus und pflanzen Sie sie in einem 50 Milliliter Ms flüssiges Medium. Inkubieren Sie für 48 Stunden bei 22 Grad Celsius und septischen Bedingungen.
Reiswurzelexsudate werden in das Ms-Medium freigesetzt. Flüssigkeitschromatographie Massenspektrometrie Die Analyse wurde mit dem UHPLC-System durchgeführt. Bereiten Sie chemoattraktive wässrige Lösung vor, um sicherzustellen, dass sie steril ist.
Filtern Sie die chemoattraktive Lösung mit einem 0,22 Mikrometer Bakterienfilter. Die chemoattraktive wässrige Lösung war die aus den LCMS-Studien erhaltene Einzelsubstanz, die in Wasser gelöst wurde. Als Beispiel wurde die Citrix Acid-Lösung verwendet.
Alle Aktionen müssen an der Seite der Lampe ausgeführt werden. Markieren Sie die mittlere Position des Glasobjektträgers in einem Abstand von 1 Zentimeter. Stellen Sie sicher, dass der Glasobjektträger mehrmals auf der Flamme sterilisiert wird.
An der 30 Mikroliter chemoattraktiven Lösung auf der linken Seite des Glasobjektträgers wird sichergestellt, dass Bakterien bis ins logarithmische Stadium kultiviert wurden. Fügen Sie die 30 Mikroliter-Bakterienlösung auf der rechten Seite des Glasobjektträgers hinzu. Sterilisieren Sie die Impfschleife mehrmals auf der Flamme mit der Impfschleife, um die chemoattraktive wässrige Lösung mit der Bakterienlösung zu verbinden, und halten Sie sie 20 Minuten lang auf einer sauberen Bank bei Raumtemperatur.
Nach 20 Minuten trennen Sie die Verbindungsleitung mit Filterpapier. Stellen Sie sicher, dass das 1,5 Milliliter zentrifugierte Röhrchen steril ist. Sammeln Sie die chemoattraktive wässrige Lösung auf der linken Seite des Glasobjektträgers.
Die Lösung wird in das sterile zentrifugierte Röhrchen mit 1,5 Millilitern überführt. Geben Sie das entsprechende Volumen des Zellfrontfarbstoffs in das zentrifugierte Röhrchen. Sammeln Sie nach 2 Minuten die fehlbaren Flüssigkeiten für die Bakterienzählung und mikroskopische Beobachtung mit einer Blutzählkammer.
Bestimmen Sie die Anzahl der lebensfähigen Mikroorganismen, die angezogen werden, mit einer folgenden Gleichung. Ein höherer RCI weist auf eine starke Reaktion auf das Chemoattraktivum hin. Die Ergebnisse zeigten, dass Zitronensäure und Kaffeesäure die höchsten Chemotaxis-Indizes aufweisen.
Die Ergebnisse der neuen Chemotaxis-Assay-Methode schrieben, dass die bakterielle Dosenkonzentration von Zitronensäure, Kaffeesäure und Galactose-Experimenten signifikant höher war als die der Kontrollgruppe und der Positivkontrolle. Zitronensäure schrieb die stärkste Chemotaxis. Die experimentellen Ergebnisse stimmten mit den Ergebnissen traditioneller Methoden überein.
Dieses Videoprotokoll kann als wertvolle Ressource zur Aufklärung von Pflanzen-Mikroben-Interaktionen dargestellt werden.
