Langfristige Forschung und Verwendung eines Biokontrollmittels hängen von der Verfügbarkeit effektiver und wirtschaftlicher Aufzuchttechniken ab, und dieses Protokoll hat sich als effizient für die Aufzucht dieses Parasitoiden erwiesen. Es besteht derzeit ein enormes Interesse daran, dieses Parasitoid für die Forschung oder Freisetzung im Feld aufzuziehen, und das Protokoll wird der zukünftigen langfristigen Forschung und Verwendung dieses vielversprechenden Biokontrollmittels zugute kommen. Zunächst müssen Benutzer möglicherweise einige grundlegende Biologien der beteiligten Insekten verstehen, indem sie die relevanten Referenzen im Artikel und einige Praktiken der Methoden lesen.
Für die Herstellung der Wirtsdiät bereiten Sie zuerst den flüssigen Teil der Diät vor, wie im Manuskript beschrieben. Als nächstes fügen Sie 25 bis 30 Gramm Blaubeerpüree in einen leeren 250-Milliliter-Kolben hinzu. Dann gießen Sie die Flüssigkeit in den Kolben, wobei die Flüssigkeit nur die Oberseite der pürierten Blaubeeren bedeckt.
Als nächstes, um den Wirt Drosophila Suzuki aufzuziehen, schneiden Sie zuerst ein Stück saugfähiges Papiertuch und drehen Sie es in der Mitte. Legen Sie dann den verdrehten Mittelteil des Papiertuchs in den Diätkolben. Um Feuchtigkeit zu speichern, verwenden Sie destilliertes Wasser, um das Papiertuch und die Diät zu benetzen.
Um geschlechtsreife erwachsene Fliegen zu übertragen, entfernen Sie vorsichtig den Stopper eines Fliegenkoloniekolbens und kehren Sie ihn in den Diätkolben um. Halten Sie die Fliegen nach einer Woche dieser Exposition drei Wochen lang in einer Umweltkammer, um die Fliegen zum Auftauchen der Fliege zu erhalten. Um die Wirtslarve Parasitoiden auszusetzen, entfernen Sie zuerst die erwachsenen Fliegen und das Papiertuch aus dem Kolben und lassen Sie die Fliegeneier und Larven zurück.
Um als Verpuppungssubstrat für die Larven zu dienen, falten Sie ein neues saugfähiges Papiertuch und legen Sie es in den Kolben. Dann sechs weibliche und männliche Paare des parasitoiden G3 Ganaspis brasiliensis in den Kolben saugen und eine dünne Schicht Honig auf den Boden des Schaumstoffstopfens streichen. Um die Parasitoide zu sammeln und zu lagern, entfernen Sie die Erwachsenen nach fünf Tagen.
Dann lagern Sie den Kolben 35 Tage lang in der Umweltkammer unter den zuvor genannten Bedingungen. Mit dem Auftauchen von erwachsenen Wespen, aspirieren Sie sie dreimal pro Woche. Um die Wespen zu halten, legen Sie zuerst ein mit destilliertem Wasser angefeuchtetes, aber nicht mit destilliertem Wasser gesättigtes Papiertuch auf den Boden eines 2,5 x 9,5 Quadratzentimeter großen Drosophila-Fläschchens.
Übertragen Sie dann etwa 60 Wespen in die Durchstechflasche und markieren Sie das Entstehungsdatum. Lagern Sie die Durchstechflasche in der Umweltkammer. Zweimal pro Woche eine dünne Schicht Honig auf den Boden des Schaumstoffverschlusses der Fläschchen streichen.
Ordnen Sie zunächst eine großflächige Aufzucht von Drosophila suzuki an, indem Sie 1.500 bis 2.000 geschlechtsreife erwachsene Fliegen im Geschlechterverhältnis von 50:50 in einen großen, gestrickten, mit Netzen bedeckten Käfig legen. Legen Sie dann einen Teller mit wassergetränkter Baumwolle und vier bis sechs Petrischalen mit Standard-Drosophila-Medium in den Käfig. Ersetzen Sie zweimal pro Woche die freiliegenden Petrischalen durch frische.
Legen Sie jede befallene Petrischale ohne Deckel in einen 800-Milliliter-Plastikbecher und bedecken Sie den Becher mit einem feinen Netz. Dann inkubieren Sie die Becher bei 23 Grad Celsius und 75% relativer Luftfeuchtigkeit für 12 bis 15 Tage. Nach der Inkubation frisch geschlüpfte erwachsene Drosophila suzuki in einen Aufzuchtkäfig bringen.
Als nächstes beginnen Sie mit der Zubereitung der Wirtslarven, indem Sie Blaubeeren eine Minute lang in kaltem Wasser spülen und die Früchte in einem mit einer Bleichlösung gefüllten Becken einweichen, das drei Minuten lang auf 5% verdünnt wird. Dann neun Zentimeter Petrischalen mit den gewaschenen Blaubeeren füllen. In den späten Nachmittagsstunden die Petrischalen in den Aufzuchtkäfig stellen und über Nacht stehen lassen.
Am nächsten Morgen klopfen Sie vorsichtig auf die Petrischale, um Fliegen von den Früchten zu lösen und die Früchte aus dem Aufzuchtkäfig zu entfernen. Bereiten Sie in der Zwischenzeit einen Parasitismuskäfig und einen Wespenauflaufkäfig für den parasitoiden G1 Ganaspis brasiliensis vor. Beide Käfige sollten eine dünne Schnur unter der Decke haben, um einen oder mehrere Feeder aufzuhängen.
Hängen Sie in jedem Käfig eine Drosophila-Durchstechflasche mit Wasser auf und versiegeln Sie sie alle fünf bis sieben Tage mit einem Zelluloseacetatstopfen, der je nach relativer Luftfeuchtigkeit kopfüber von der Decke steht. Unmittelbar nachdem Sie befallene Blaubeeren aus dem Käfig Drosophila suzuki herausgenommen haben, legen Sie sie für zwei bis drei Tage in den Parasitismuskäfig mit 1.500 bis 2.000 Ganaspis brasiliensis-Wespen. Als nächstes sammeln Sie die Früchte in einem 800-Milliliter-Plastikbecher mit saugfähigem Papier am Boden.
Inkubieren Sie den offenen Becher im Auflauf- oder Eklosionskäfig bei 21 Grad Celsius und 65% relativer Luftfeuchtigkeit für mindestens 28 Tage. Überprüfen Sie den Käfig während der zweiten und dritten Woche der Inkubation wöchentlich auf eine frühe Kontraktion des Wirts. Um die sukzessive parasitoide Sammlung zu erleichtern, entfernen Sie die erwachsenen Fliegen.
Stellen Sie am Ende der vierten Woche der Inkubation einen Feeder und eine Wasserquelle für den Käfig bereit. Sammle etwa 10 bis 15% der erwachsenen Wespen und übertrage sie in den Parasitismuskäfig, um alte und unproduktive Wespen zu ersetzen. Von den verbleibenden Wespen des Eklosionskäfigs bis zu 700 Erwachsene im Geschlechterverhältnis 50:50 mit einem 800-Milliliter-Plastikbecher aufbewahren, der ein mit Wasser gefülltes und mit einer Zahnbaumwollrolle am Boden der Tasse versiegeltes Zwei-Milliliter-Röhrchen enthält.
Lagern Sie den Becher mit einem ausgeprägten Auflaufzustand bis zu einem Monat in einer Umweltkammer. Für den Versand von Parasitoiden legen Sie etwa 200 Erwachsene in ein 50 Milliliter konisches Rohr. Dann legen Sie alle Rohre zusammen mit Eisbeuteln in einen isolierenden Versandbehälter.
Dieses Protokoll führte zu einer erfolgreichen Kleinaufzucht von G3 Ganaspis brasiliensis, einem parasitoiden Erreger, gegen den landwirtschaftlichen Schädling Drosophila suzuki im Labor. Die Produktion der Nachkommen blieb von Unterschieden in der parasitoiden Dichte und der Expositionszeit unberührt. Eine großflächige Erzeugung von G1 Ganaspis brasiliensis könnte ebenfalls erreicht werden, wobei die Produktion fünf Wochen nach der ersten Exposition gegenüber dem Wirt Drosophila suzuki beginnt.
Von Woche 8 bis Woche 22 wurde die parasitoide Produktion proportional zur Menge der Früchte, die ihnen ausgesetzt waren. Es ist von entscheidender Bedeutung, eine geeignete Aufzuchttemperatur aufrechtzuerhalten, die Luftfeuchtigkeit zu kontrollieren und immer Nahrung für erwachsene Insekten bereitzustellen. Die Methoden könnten weiter verbessert werden, indem die Aufzuchtdichten von Wirt und Parasitoid optimiert werden, um die Reproduktion von Wespen zu maximieren, und indem die Möglichkeit untersucht wird, dieses Parasitoid auf alternativen Wirten aufzuziehen.
