Ein angepasster optischer Dichte-basierter Mikrotiterplatten-Assay zur Charakterisierung der Actinobacteriophagen-Infektion

Letztendlich interessieren wir uns für Bakteriophagen-Wirt-Interaktionen. Dieses Protokoll ermöglicht die Messung der Phageninfektion in langsam wachsenden Bakterien und generiert beschreibende Infektionsmetriken. Diese Methodik ist maßgeblich an der Untersuchung der Bakteriophagen-Wirt-Koevolution in langsam wachsenden Actinomyceten-Bakterien beteiligt.

Schnelle Mikrotiterplatten-Methoden liefern hervorragende Ergebnisse für schnell wachsende bakterielle Wirte, sind aber zu kurz, um das Fortschreiten der Bakterien-Phagen-Infektion in langsamer wachsenden bakteriellen Wirten wie Actinomyceten zu zeigen. Unsere Methode ist für langsam wachsende Bakterien geeignet, so dass Bakterien und Phagen mehrere Tage lang gemeinsam kultiviert werden können, um die Dynamik der Bakteriophageninfektion zu charakterisieren. Unser Protokoll ermöglicht es, die Interaktionen zwischen Bakteriophagen und Wirt für langsam wachsende Bakterien in Mikrotiterplatten zu bewerten, anstatt eine Unterprobenahme aus einem größeren Kulturkolben zu erfordern.

Dieses Protokoll verwendet leicht verfügbare Materialien, um sich an längere Kulturzeiten anzupassen, und ermöglicht die Beschichtung mehrerer Replikate in einer einzigen Mikrotiterplatte.