Herstellung und Aufreinigung von Suspensionskulturen von Adeno-assoziierten Viren durch Iodixanol-Dichtegradientenzentrifugation für In-vivo-Anwendungen

Wir verwenden einen gerichteten Evolutionsansatz, um Adeno-assoziierte Viruskapitel mit höherem Tropismus für menschliche Zielzelltypen zu identifizieren. Durch diese Forschung wollen wir rekombinante Adeno-assoziierte virale Vektoren mit verbesserter Zielzelltransduktion und klinischer Relevanz im Bereich der Gentherapie herstellen. Unsere Gruppe hat kürzlich mehrere AAV-Serotypen aus der Leber entfernt, indem sie Kapsidreste eingebaut hat, die ursprünglich für einen AAV-Serotyp verwendet wurden, der von Natur aus einen verminderten Lebertropismus aufweist.

Bei erfolgreicher Ausweitung auf weitere Serotypen bietet dies die Grundlage für die Verringerung der erforderlichen klinischen RAAV-Dosis durch periphere Injektion und die Verringerung unerwünschter Patientenergebnisse. Die IODIXanol-Reinigungsmethode ist zwar kostengünstig, aber schwer zu skalieren. Darüber hinaus wird in Downstream-Anwendungen der Ansatz der gerichteten Evolution mit Tiermodellen oder in vitro durchgeführt.

Daher können Kapside, die durch gerichtete Evolution isoliert wurden, In-vivo-Ziele beim Menschen nicht im gleichen Maße übertragen wie in präklinischen Modellen. Dieses Protokoll ist erschwinglich und für kleinere Labore zugänglich. Darüber hinaus liefert diese Methode hochreine, rekombinante Adeno-assoziierte Viren, die für nachgeschaltete präklinische In-vivo-Anwendungen verwendet werden können.