Es wurde vorgeschlagen, dass sich die Parkinson-Krankheit durch die prionenähnliche Vermehrung von Alpha-Synuclein-Aggregaten entwickelt und fortschreitet. In der aktuellen Studie versuchen wir, den Ursprung der Alpha-Synuclein-Pathologie im Riechkolben bei der Parkinson-Krankheit in Verbindung zu bringen. In jüngster Zeit wurde angenommen, dass sich die Alpha-Synuclein-Pathologie auf prionenähnliche Weise ausbreitet, ausgehend vom Riechkolben oder dem dorsalen Kern der größeren Synapse.
Obwohl der Ursprung des Alpha-Synuclein-Aggregats im Riechkolben unklar bleibt, deuten neuere Studien darauf hin, dass sich die Vermehrung von der Riechschleimhaut abwechseln kann. Wir zeigten, dass eine weitere Verabreichung von Alpha-Synuclein-Aggregaten im Mausmodell eine Alpha-Synuclein-Pathologie im Riechkolben induzierte. Diese einfache Methode bietet eine weitere Möglichkeit, die Ausbreitung von Alpha-Synuclein von der Riechschleimhaut zum Riechkolben ohne chirurgische Technik zu bewerten.
Die intranasale Verabreichung von Alpha-Synuclein-Aggregaten ist eine sehr einfache und unkomplizierte Methode. Tragen Sie zunächst persönliche Schutzausrüstung wie Einweghandschuhe, Masken und Sicherheitsbecher. Bereiten Sie Maus-Alpha-Synucleinfaserlösung in PBS in einer Konzentration von vier Milligramm pro Milliliter vor und umwickeln Sie das Röhrchen mit einer transparenten Folie, um eine Kontamination zu vermeiden.
Füllen Sie dann das Ultraschallbad eines Ultraschallgeräts mit Wasser und fügen Sie Eiswürfel hinzu, um es auf vier Grad Celsius abzukühlen. Beschallen Sie 200 Mikroliter der Fibrillenlösung, um fünf Minuten lang Alpha-Synuclein-vorgeformte Fibrillen zu erzeugen. Legen Sie eine betäubte Maus in Rückenlage auf ein Papiertuch, wobei der Kopf leicht nach unten geneigt ist.
Ziehen Sie als Nächstes einen Mikroliter der vier Milligramm pro Milliliter Alpha-Synucleinlösung in eine P10-Pipette und platzieren Sie die Pipettenspitze in der Nähe der Nase der Maus, um einen runden Tropfen am Ende der Pipettenspitze zu bilden. Verabreichen Sie nun die Lösung intranasal in das einseitige Nasenloch. Warten Sie 30 Sekunden bis eine Minute, damit die Maus die Lösung auf natürliche Weise einatmen kann.
Wiederholen Sie diesen Vorgang, bis 20 Mikroliter Alpha-Synuclein verabreicht wurden. Reinigen Sie die Bank nach der Verabreichung von Alpha-Synuclein mit handelsüblichen Reinigungsmitteln, wenn eine Kontamination mit der Lösung auftritt, entsorgen Sie die Handschuhe und verabreichen Sie dann Atipamezol in einer Menge von drei Milligramm pro Kilogramm durch intraperitoneale Injektion, um die Genesung zu erleichtern. Bringen Sie die Maus nach vollständiger Wiederherstellung wieder in den Käfig zurück.
Zu Beginn verabreichen Sie den Mäusen intranasal Alpha-Synuclein-vorgeformte Fibrillen. Nachdem Sie die Maus eingeschläfert haben, machen Sie mit einem Skalpell einen zwei Zentimeter langen Schnitt in die Kopfhaut. Schneiden Sie mit einer Schere den Schädelknochen seitlich von der Basis bis zur Nase ein.
Um die Riechkolben zu erhalten, entfernen Sie den Schädelknochen, der die Riechkolben bedeckt, vollständig, drehen Sie dann den Kopf um und durchtrennen Sie die Hirnnerven. Entferne das Gehirn vorsichtig mit einer Pinzette und halte die Riechkolben intakt. Um die Zwiebeln zu erhalten, schneiden Sie vorsichtig die Riechnerven ab, da sie am Schädelknochen ansetzen.
Legen Sie die Gehirnproben in 4%-Paraformaldehyd, das in PBS hergestellt wurde, und lagern Sie sie über Nacht bei vier Grad Celsius. Eine Alpha-Synuclein-Pathologie wurde im Riechkolben auf der behandelten Seite nach einem von drei Monaten nicht beobachtet, aber Lewy-Neuriten-ähnliche P-Alpha-Synuclein-Aggregate wurden in den Glomeruli auf der behandelten Seite nach sechs und 12 Monaten beobachtet. Diese Aggregate waren in den Kolben auf der Kontrollseite nicht vorhanden.
Die Anzahl der Lewy-Neuriten-ähnlichen Alpha-Synuclein-Aggregate stieg in den Riechkolben auf der behandelten Seite über einen Zeitraum von 12 Monaten signifikant an, während die Kontrollseite nur sehr wenige solcher Aggregate aufwies.
