A doença de Parkinson foi proposta para se desenvolver e progredir através da propagação semelhante a príons de agregados de alfa-sinucleína. No presente estudo, estamos tentando associar a origem da patologia da alfa-sinucleína no bulbo olfatório na doença de Parkinson. Recentemente, acredita-se que a patologia da alfa-sinucleína se propague de maneira semelhante ao príon, começando no bulbo olfatório ou no núcleo dorsal da sinapse maior.
Embora a origem do agregado alfa-sinucleína no bulbo olfatório permaneça obscura, estudos recentes sugerem que a propagação pode se alternar a partir da mucosa olfatória. Mostramos que em outra administração de agregados de alfa-sinucleína no modelo de camundongo induziu a patologia da alfa-sinucleína no bulbo olfatório. Este método simples fornece outra maneira de avaliar a propagação da alfa-sinucleína da mucosa olfatória para o bulbo olfatório sem uma técnica cirúrgica.
A administração intranasal de agregado de alfa-sinucleína é um método muito simples e direto. Para começar, use equipamentos de proteção individual, como luvas descartáveis, máscaras e óculos de segurança. Prepare a solução de fibra de alfa-sinucleína de camundongo em PBS a uma concentração de quatro miligramas por mililitro e envolva o tubo com um filme transparente para evitar contaminação.
Em seguida, encha o banho ultrassônico de um sonicador com água e adicione cubos de gelo para resfriá-lo a quatro graus Celsius. Sonicar 200 microlitros da solução de fibrila para gerar fibrilas pré-formadas de alfa-sinucleína por cinco minutos. Coloque um camundongo anestesiado em decúbito dorsal sobre uma toalha de papel, com a cabeça ligeiramente inclinada para baixo.
Em seguida, desenhe um microlitro dos quatro miligramas por mililitro de solução de alfa-sinucleína em uma pipeta P10 e coloque a ponta da pipeta perto do nariz do camundongo para formar uma gota redonda no final da ponta da pipeta. Agora, administre a solução por via intranasal na narina unilateral. Aguarde de 30 segundos a um minuto para que o camundongo inale naturalmente a solução.
Repita esse processo até que 20 microlitros de alfa-sinucleína sejam administrados. Após a administração de alfa-sinucleína, limpe a bancada com detergentes comerciais se ocorrer alguma contaminação com a solução e descarte as luvas, depois administre atipamezol a três miligramas por quilograma por injeção intraperitoneal para facilitar a recuperação. Após a recuperação completa, retorne o mouse para a gaiola.
Para começar, administre fibrilas pré-formadas de alfa-sinucleína por via intranasal aos camundongos. Depois de sacrificar o camundongo, faça uma incisão de dois centímetros no couro cabeludo com um bisturi. Usando uma tesoura, incise o osso craniano lateralmente da base ao nariz.
Para obter os bulbos olfatórios, remova completamente o osso craniano que cobre os bulbos olfatórios e, em seguida, vire a cabeça e corte os nervos cerebrais. Remova cuidadosamente o cérebro com uma pinça, mantendo os bulbos olfatórios intactos. Para preservar os bulbos, corte cuidadosamente os nervos olfatórios à medida que eles se ligam ao osso do crânio.
Coloque as amostras de cérebro em aldeído paraforme a 4% preparado em PBS e armazene-as a quatro graus Celsius durante a noite. A patologia da alfa-sinucleína não foi observada no bulbo olfatório do lado tratado após um em três meses, mas agregados de alfa-sinucleína P semelhantes a neuritos de Lewy foram observados nos glomérulos do lado tratado após seis e 12 meses. Esses agregados estavam ausentes nos bulbos do lado controle.
O número de agregados de alfa-sinucleína semelhantes a neuritos de Lewy aumentou significativamente nos bulbos olfatórios do lado tratado ao longo de 12 meses, enquanto o lado controle tinha muito poucos agregados desse tipo.
