Parkinson hastalığının, alfa sinüklein agregatlarının prion benzeri yayılımı yoluyla geliştiği ve ilerlediği öne sürülmüştür. Bu çalışmada, Parkinson hastalığında koku soğancığındaki alfa sinüklein patolojisinin kökenini ilişkilendirmeye çalışıyoruz. Son zamanlarda, alfa sinüklein patolojisinin, koku soğancığından veya daha büyük sinapsın dorsal çekirdeğinden başlayarak prion benzeri bir şekilde yayıldığına inanılmaktadır.
Koku soğancığındaki orijin alfa sinüklein agregası belirsizliğini korusa da, son çalışmalar yayılmanın koku alma mukozasından değişebileceğini düşündürmektedir. Fare modelinde alfa sinüklein agregatlarının başka bir uygulamasında, koku soğancığında alfa sinüklein patolojisini indüklediğini gösterdik. Bu basit yöntem, alfa sinükleinin koku alma mukozasından koku soğancığına yayılımını cerrahi bir teknik olmadan değerlendirmenin başka bir yolunu sağlar.
Alfa sinüklein agregatının burun içine uygulanması çok basit ve anlaşılır bir yöntemdir. Başlamak için tek kullanımlık eldivenler, maskeler ve güvenlik çubukları gibi kişisel koruyucu ekipman kullanın. PBS'de fare alfa sinüklein lif çözeltisini mililitre başına dört miligram konsantrasyonda hazırlayın ve kontaminasyonu önlemek için tüpü şeffaf bir filmle sarın.
Ardından, bir sonikatörün ultrasonik banyosunu suyla doldurun ve dört santigrat dereceye kadar soğutmak için buz küpleri ekleyin. Beş dakika boyunca alfa sinüklein önceden oluşturulmuş fibriller oluşturmak için fibril çözeltisinin 200 mikrolitresini sonikleştirin. Anestezi uygulanmış bir fareyi, başı hafifçe aşağı doğru eğik olacak şekilde bir kağıt havlu üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin.
Daha sonra, mililitre alfa sinüklein çözeltisinin dört miligramından bir mikrolitresini bir P10 pipetine çekin ve pipet ucunun ucunda yuvarlak bir damla oluşturmak için pipet ucunu farenin burnunun yanına yerleştirin. Şimdi, çözeltiyi intranazal olarak tek taraflı burun deliğine uygulayın. Farenin çözeltiyi doğal olarak soluması için 30 saniye ila bir dakika bekleyin.
20 mikrolitre alfa sinüklein uygulanana kadar bu işlemi tekrarlayın. Alfa sinüklein uygulamasından sonra, çözelti ile herhangi bir kirlenme meydana gelirse tezgahı ticari deterjanlarla temizleyin ve eldivenleri atın, ardından iyileşmeyi kolaylaştırmak için intraperitoneal enjeksiyonla kilogram başına üç miligram atipamezol uygulayın. Tamamen iyileştikten sonra, fareyi kafese geri koyun.
Başlamak için, alfa sinüklein önceden oluşturulmuş fibrilleri farelere intranazal olarak uygulayın. Fareye ötenazi yaptıktan sonra, bir neşter ile kafa derisinde iki santimetrelik bir kesi yapın. Makas kullanarak, kafatası kemiğini tabandan buruna yanal olarak kesin.
Koku soğancıklarını elde etmek için, koku soğancıklarını kaplayan kafatası kemiğini tamamen çıkarın, ardından başı ters çevirin ve beyin sinirlerini kesin. Beyni forseps ile dikkatlice çıkarın, koku ampullerini sağlam tutun. Ampulleri korumak için, kafatası kemiğine yapışırken koku alma sinirlerini dikkatlice kesin.
Beyin örneklerini PBS'de hazırlanan% 4 paraform aldehit içine yerleştirin ve gece boyunca dört santigrat derecede saklayın. Üç ayda bir sonra tedavi edilen taraftaki koku soğancığında alfa sinüklein patolojisi gözlenmedi, ancak altı ve 12 ay sonra tedavi edilen taraftaki glomerüllerde Lewy nörit benzeri P alfa sinüklein agregatları görüldü. Bu agregalar kontrol tarafındaki ampullerde yoktu.
Lewy nörit benzeri alfa sinüklein agregatlarının sayısı, tedavi edilen taraftaki koku ampullerinde 12 ay boyunca önemli ölçüde artarken, kontrol tarafında bu tür agregalar çok az vardı.
