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Se presenta un método para recoger líquido cefalorraquídeo (LCR) y para crear un sistema que carece de CSF dentro del sistema ventricular del cerebro embrionario de pez cebra. Esto permite un examen más detenido de la composición de CSF y sus requerimientos durante el desarrollo embrionario del cerebro.
El líquido cefalorraquídeo (LCR) es un líquido rico en proteínas contenidas dentro de los ventrículos cerebrales. Está presente durante el desarrollo embrionario temprano de vertebrados y persiste durante toda la vida. Adulto CSF se piensa para amortiguar el cerebro, eliminar los desechos, y llevar a 1,2 secretada moléculas. En el embrión y adulto mayor, la mayoría de los CSF se hace por el plexo coroideo, una serie de regiones altamente vascularizados secretoras situados adyacentes al cerebro ventrículos 3-5. En el pez cebra, el plexo coroideo está completamente formado a 144 horas después de la fertilización (hpf) 6. Antes de esto, en embriones de vertebrados tanto pez cebra y otros incluyendo el ratón, una cantidad significativa de embrionario CSF (ECSF) está presente. Estos datos y los estudios sugieren que el polluelo en el neuroepitelio es secretora temprana en el desarrollo y puede ser la fuente principal de ECSF antes de plexo coroideo desarrollo 7.
ECSF contiene aproximadamente tres veces más proteínas tHan adulto CSF, sugiriendo que podría tener un papel importante durante el desarrollo 8,9. Los estudios en pollo y ratón demuestran que los factores secretados en el ECSF, la presión del fluido, o una combinación de éstos, son importantes para la neurogénesis, la expresión de genes de supervivencia, la proliferación celular y de la célula en el neuroepitelio 10-20. Análisis proteómico de rata humana, el ratón y el pollo ECSF han identificado muchas proteínas que pueden ser necesarios para la función LCR. Estos incluyen componentes de la matriz extracelular, apolipoproteínas, proteínas que regulan la presión osmótica, y proteínas implicadas en la muerte celular y la proliferación 21-24. Sin embargo, las funciones complejas de la ECSF son en gran medida desconocidos.
Hemos desarrollado un método para eliminar ECSF desde los ventrículos del cerebro del pez cebra, permitiendo así la identificación de los componentes ECSF y para el análisis de la exigencia ECSF durante el desarrollo. Aunque más ECSF se pueden obtener de otra w sistemas de vertebradosith embriones más grandes, ECSF se pueden recoger de las primeras etapas del desarrollo del pez cebra, y bajo condiciones genéticas o ambientales que conducen a volumen anormal ventrículo cerebral o en la morfología. La eliminación y recogida de ECSF permite el análisis de espectrometría de masas investigación, de la función ECSF, y la reintroducción de los factores seleccionados en los ventrículos para ensayar su función. Por lo tanto la accesibilidad del embrión de pez cebra temprana permite el análisis detallado de la función ECSF durante el desarrollo.
1. Preparación de agujas de microinyección y tranvía Celular
2. Preparación de los embriones
3. Vaciado del ECSF
4. La recolección de la ECSF para el Análisis de Composición
5. La reintroducción de factores seleccionados
Un ejemplo de un ventrículo cerebral escurrido se muestra en la figura 1B-C. Ventrículos cerebrales se derrumbó ya que carecen de ECSF (Figura 1B vs C). Como se ve en las imágenes dorsales (Figura 1B-C, y la Figura 2A-D) del neuroepitelio hindbrain retiene su morfología característica y parece estar abierto a pesar de la falta de ECSF probable debido a las robustas de bisagras puntos. Sin embargo, las vistas laterales (Figura 2A'-D ...
El uso de esta técnica para drenar manualmente ECSF desde los ventrículos del cerebro del pez cebra será útil para determinar el requisito de ECSF durante el desarrollo. Además, esta técnica permitirá descripción del perfil de proteínas ECSF en el curso del desarrollo embrionario. Identificación de proteínas diferentes durante este tiempo permitirá una mayor investigación en la función del CSF y su posible papel en el desarrollo cerebral. En amniotas, algunos factores identificados en ECSF (IGF2, FGF2, ác...
No hay conflictos de interés declarado.
Este trabajo fue apoyado por el Instituto Nacional de Salud Mental, y la National Science Foundation. Un agradecimiento especial a la Dra. Jen Gutzman, la Dra. Amanda Dickinson y otros miembros del laboratorio Sive para muchas discusiones útiles y críticas constructivas, y Olivier Paugois para la cría de peces experto.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Nombre de Reactivo | Empresa | Número de catálogo | |
Eppendorf CellTram Petróleo | Eppendorf | 516 000.025 | |
Aceite mineral | Sigma | M8410 | |
Tricaína polvo | Sigma | A5040 | |
Los tubos capilares | FHC Inc. | 30-30-1 |
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