Una técnica modificada para la constricción aórtica transversa en ratones

Resumen

El presente protocolo describe una técnica modificada y simplificada con un procedimiento de constricción aórtica transversa (TAC) mínimamente invasivo utilizando un retractor de fabricación propia. Este procedimiento se puede realizar sin un ventilador o microscopio e introduce sobrecarga de presión, lo que eventualmente conduce a hipertrofia cardíaca o insuficiencia cardíaca.

Resumen

La constricción aórtica transversa (TAC) es una cirugía de uso frecuente en la investigación sobre insuficiencia cardíaca e hipertrofia cardíaca basada en la formación de sobrecarga de presión en modelos de ratón. El principal desafío de este procedimiento es visualizar claramente el arco aórtico transversal y colocar con precisión la banda del vaso objetivo. Los abordajes clásicos realizan una toracotomía parcial para exponer el arco aórtico transverso. Sin embargo, es un modelo de tórax abierto que causa un trauma quirúrgico bastante grande y requiere un ventilador durante la cirugía. Para evitar traumatismos innecesarios y simplificar el procedimiento operativo, el arco aórtico se aborda a través de la proporción proximal del esternón, alcanzando y uniendo el vaso objetivo utilizando un pequeño retractor de fabricación propia que contiene una trampa . Este procedimiento se puede realizar sin entrar en la cavidad de la pleura y no necesita un ventilador o una operación microquirúrgica, lo que deja a los ratones con patrones de respiración fisiológicos, simplifica el procedimiento y reduce significativamente el tiempo de operación. Debido al enfoque menos invasivo y menos tiempo de operación, los ratones pueden sufrir menos reacciones de estrés y recuperarse rápidamente.

Introducción

La insuficiencia cardíaca es un síntoma clínico complejo que resulta de la alteración de la estructura y función del llenado ventricular o la expulsión de sangre¹. El estadio de la enfermedad se define principalmente a través de la clasificación de funciones de la New York Heart Association basada en la gravedad de los síntomas y la actividad física². Para aquellos pacientes con una fracción de eyección superior al 50%, las anomalías estructurales y/o funcionales elevaron péptidos natriuréticos para apoyar el diagnóstico de insuficiencia cardíaca con fracción de eyección preservada (HFpEF)²

Protocolo

El protocolo actual está aprobado por el comité de ética del Hospital Tongji, Tongji Medical College, Universidad de Ciencia y Tecnología de Huazhong, Wuhan, China. Este procedimiento se realiza en ratones adultos machos C57/BL6 (>10 semanas de edad). Todos los instrumentos quirúrgicos fueron esterilizados en autoclave antes de la operación.

1. Preparación del instrumento quirúrgico

1. Prepare una jeringa de 5 ml y pellizque la punta de la aguja con un soporte para embotarla.
2. Prepare una aguja de 27 G y embote con un soporte para agujas. Cortar la punta de la aguja con tijeras oftálmicas es una forma altern....

Resultados

Después de una cirugía TAC exitosa, se detectó una sobrecarga de presión utilizando un sistema de imágenes de ultrasonido. Cuatro semanas después de la cirugía, los ratones desarrollan una disminución de la función cardíaca. En el presente estudio, la eficacia de la cirugía TAC se validó a través de la fracción de eyección (FE), el acortamiento fraccional (FS), la masa ventricular izquierda (masa del VI) y el diámetro interno del ventrículo izquierdo (LVID) de ratones que se sometieron a cirugí.......

Discusión

La inducción de una sobrecarga de presión sostenida puede causar gradualmente hipertrofia cardíaca e insuficiencia cardíaca. Este modelo ha sido utilizado en numerosos laboratorios de todo el mundo^14,15,16. El protocolo proporcionó un método TAC mejorado que no necesita habilidades microquirúrgicas ni ventilación mecánica.

El paso más importante en este protocolo es pasar la sutura de seda d.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
4-0 nonabsorbable suture	Jinhuan	HM403	Used for suturing the skin
5 mL syringe	Haifuda Technology Co., Ltd.	BD-309628	Used for making snare containing retractor
7-0 nonabsorbable suture	Jinhuan	HM701	Used for aorta ligation
Animal temperature monitor	Kaerwen	FT3400	Used for monitoring body temperature
Buprenorphine	Sigma	B-044	Used for post-surgical pain treatment
Depilatory cream	Veet	N/A	Used for remove body hair from the surgical area
Heating Pad	Xiaochuangxin	N/A	Used for maintaining body temperature
Ibuprofen	MCE	HY-78131	Used for post-surgical pain treatment
Iron wire (0.5 mm)	Qing Yuan	Iron wire #26	Used for making snare containing retractor
Microscopic tweezers	RWD	F12006-10	Used for penetrating and separating the tissue to open operation space
Needle holder	RWD	F12005-10	Used for pinching off the tip of gauge needle and blunting it
Ophthalmic forceps	RWD	F14012-10	Used for holding skin and other tissues
Ophthalmic scissors	RWD	S11001-08	Used for making sking incision of mouse
Pentobarbital sodium	Sigma	P3761	Used for mouse anesthesia
Sterile operating mat	Hale & hearty	211002	Used for placing animal during surgery
Ultra-sound imaging system	Fujifilm visualsonics	vevo1100	Used for measure the blood flow velocity, left ventricular wall thickness and ejection fraction, https://www.visualsonics.com/product/imaging-systems/vevo-1100