Preservación del hígado de donación porcina después de la muerte circulatoria (DCD) por perfusión y trasplante hepático ortotópico

Resumen

Este protocolo describe la metodología para establecer un modelo porcino que utiliza perfusión mecánica (MP) a temperatura variable controlada para la preservación del hígado del donante, seguido de un trasplante hepático ortotópico (OLTx). Su objetivo es promover la tasa de éxito de OLTx utilizando la donación de hígado después de la muerte circulatoria (DCD) de un donante y establecer un modelo estable.

Resumen

El almacenamiento en frío estático (SCS) convencional exacerba la lesión isquémica en el hígado DCD, lo que provoca graves complicaciones para los receptores de trasplantes. Para abordar este problema, se está llevando a cabo la aplicación clínica de la tecnología MP para la preservación del hígado de donante. Al mismo tiempo, los esfuerzos se centran en el desarrollo de diversos instrumentos de MP, validados a través de experimentos relevantes con modelos animales. Los ensayos eficaces con animales grandes desempeñan un papel fundamental en las aplicaciones clínicas. Sin embargo, persisten desafíos en la preservación ex vivo de hígados DCD y el procedimiento de trasplante en cerdos. Estos obstáculos abarcan abordar la preservación prolongada de los hígados de los donantes, realizar pruebas de viabilidad, aliviar las lesiones isquémicas y acortar la fase anhepática. El uso de un dispositivo MP con control de temperatura variable facilita la conservación prolongada de los hígados DCD a través de los modos secuenciales de perfusión con máquina oxigenada hipotérmica dual (DHOPE) y perfusión con máquina normotérmica (NMP). Este protocolo mejora el modelo OLTx porcino al mejorar la calidad de los hígados DCD, optimizar la técnica de anastomosis y reducir la duración de la fase anhepática.

Introducción

El trasplante de hígado sigue siendo el único tratamiento curativo para la enfermedad hepática en etapa terminal y los cánceres de hígado seleccionados. A pesar de los avances significativos en la obtención, preservación, técnicas quirúrgicas e inmunosupresión post-trasplante, persiste una notable tasa de mortalidad entre los pacientes en lista de espera debido a la escasez de órganos de donantes adecuados. Un desafío principal radica en la preservación de los hígados obtenidos de la DCD, ya que estos órganos requieren atención especializada para mitigar las lesiones isquémicas¹. La perfusión con máquina hepáti....

Protocolo

Todos los experimentos con animales se llevaron a cabo de acuerdo con la Ordenanza de Manejo de Animales Experimentales (Ministerio de Ciencia y Tecnología de la República Popular China, 2017). Se utilizaron cerdos miniatura hembra Bama (40-45 kg). El protocolo del estudio fue aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Hospital General del Comando del Teatro del Sur del EPL, China. Los cerdos se alojaron en el centro de investigación durante 1 semana antes del trasplante y luego se ayunaron pero con libre acceso al agua durante 12 horas antes del experimento. Los detalles de los reactivos y el equipo utiliza....

Discusión

En la actualidad, la MP hepática se utiliza ampliamente en ensayos clínicos, pero sigue siendo necesaria una mayor investigación preclínica con modelos animales grandes ^5,6. El OLTx porcino presenta desafíos significativos que resultan en bajas tasas de éxito. Estos desafíos abarcan la isquemia caliente del donante, las variaciones anatómicas y la intolerancia al pinzamiento prolongado de la vena cava y la vena porta

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia respirator	Mindray,Shenzhen	WATO EX-20
Automatic biochemical analyzer	MNCHIP, China	Celercare V5
Bama female miniature pigs	Pearl Lab Animal Sci & Tech Co,Ltd (Guangdong, China).		40-45 kg
Blood gas analyzer	Abbott	i-STAT300
ECG monitor	Shenzhen Ericon Medical Equipment Co., LTD China	M-9000S
Fully automatic snowflake ice	Changshu Shenghai Electric Co., Ltd. China
Perfusate in NMP			5% Human serum albumin 100-150 mL, Whole blood 1.2-1.5 L, 2.5% NaHCO3 21 mL, 10% CaCL2 7mL , Heparin 5000 U , Cefoxltin 1 g, Metronidazole 500 mg, Sodium taurocholate 5 g, Short acting insulin 72 U, Total parenteral nutrition solution 250-500 mL.
Potal catheter	Jinxin technology,Shunde,China		Portal vein catheter for custom cannula of varying internal diameter (6-8.5 mm)
Refrigeration centrifuge	hermo Fisher Scientific - CN
The CG8/CG4 blood gas test card	Abbott
The CHEM 8 test card	Abbott
The ex vivo liver machine perfuion device	Devocean Medical Instrument Co., Ltd, Guangdong, China	DEVOCEAN-LIVER 2000	This is a multi-mode, temperature-controlled, biomimetic ex vivo liver machine perfusion device, capable of preserving the liver outside the body for 24 h
UW Cold Storage solution	Bridge to Life, Ltd., USA	Belzer UW	Liver in SCS group were preserved in UW Cold Storage solution
UW Machine Perfusion Solution	Bridge to Life, Ltd., USA	Belzer MPS	Adenine (free base) 0.68 g, Calcium Chloride (dihydrate) 0.068 g, Dextrose (+) 1.80 g, Glutathione (reduced) 0.92 g, HEPES (free acid) 2.38 g, Hydroxyethyl Starch 50.0 g, Magnesium Gluconate 1.13 g, Mannitol 5.4 g, Potassium Phosphate (monobasic) 3.4 g, Ribose, D(-) 0.75 g, Sodium Gluconate 17.45 g, Sodium Hydroxide 0.70 g, Sterile Water for Injection To 1000 mL Volume
Vacuum extractor	SMAF	DYX-2A