Conservazione della donazione suina dopo morte circolatoria (DCD) Fegato mediante perfusione e trapianto ortotopico di fegato

Riepilogo

Questo protocollo delinea la metodologia per stabilire un modello suino che utilizza la perfusione meccanica (MP) a temperatura variabile e controllata per la conservazione del fegato del donatore, seguita dal trapianto di fegato ortotopico (OLTx). Mira a promuovere il tasso di successo di OLTx utilizzando la donazione di donatori dopo la morte circolatoria (DCD) del fegato e stabilire un modello stabile.

Abstract

La conservazione a freddo statica convenzionale (SCS) aggrava il danno ischemico nel fegato DCD, portando a gravi complicanze per i riceventi di trapianto. Per affrontare questo problema, è in corso l'applicazione clinica della tecnologia MP per la conservazione del fegato del donatore. Contemporaneamente, gli sforzi si concentrano sullo sviluppo di vari strumenti MP, convalidati attraverso esperimenti su modelli animali pertinenti. Studi efficaci su animali di grossa taglia svolgono un ruolo fondamentale nelle applicazioni cliniche. Tuttavia, persistono sfide nella conservazione ex vivo dei fegati DCD e nella procedura di trapianto nei suini. Questi ostacoli comprendono la conservazione prolungata dei fegati dei donatori, l'esecuzione di test di vitalità, l'attenuazione delle lesioni ischemiche e l'accorciamento della fase anepatica. L'uso di un dispositivo MP a temperatura variabile e controllata facilita la conservazione prolungata dei fegati DCD attraverso le modalità sequenziali Dual Hypothermic Oxygenated Machine Perfusion (DHOPE) e Normothermic Machine Perfusion (NMP). Questo protocollo migliora il modello OLTx suino migliorando la qualità dei fegati DCD, ottimizzando la tecnica di anastomosi e riducendo la durata della fase anepatica.

Introduzione

Il trapianto di fegato rimane l'unico trattamento curativo per la malattia epatica allo stadio terminale e per alcuni tumori del fegato. Nonostante i significativi progressi nell'approvvigionamento, nella conservazione, nelle tecniche operative e nell'immunosoppressione post-trapianto, persiste un notevole tasso di mortalità tra i pazienti in lista d'attesa a causa della carenza di organi donatori idonei. Una delle sfide principali consiste nel preservare i fegati prelevati dal DCD, poiché questi organi richiedono cure specializzate per mitigare le lesioni ischemiche¹. La perfusione epatica ex vivo off....

Protocollo

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati condotti in conformità con l'ordinanza sulla gestione degli animali sperimentali (Ministero della scienza e della tecnologia della Repubblica popolare cinese, 2017). Sono state utilizzate femmine di maiale nano Bama (40-45 kg). Il protocollo di studio è stato approvato dal Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali dell'Ospedale Generale del Comando del Teatro Meridionale del PLA, in Cina. I suini sono stati alloggiati nella struttura di ricerca per 1 settimana prima del trapianto e poi hanno digiunato ma con libero accesso all'acqua per 12 ore prima dell'esperimento. I dett....

Discussione

La MP epatica è attualmente ampiamente utilizzata negli studi clinici, ma rimangono necessarie ulteriori ricerche precliniche utilizzando modelli animali di grandi dimensioni ^5,6. L'OLTx suino presenta sfide significative che si traducono in bassi tassi di successo. Queste sfide comprendono l'ischemia calda del donatore, le variazioni anatomiche e l'intolleranza al clampaggio prolungato della vena cava e della vena porta

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia respirator	Mindray,Shenzhen	WATO EX-20
Automatic biochemical analyzer	MNCHIP, China	Celercare V5
Bama female miniature pigs	Pearl Lab Animal Sci & Tech Co,Ltd (Guangdong, China).		40-45 kg
Blood gas analyzer	Abbott	i-STAT300
ECG monitor	Shenzhen Ericon Medical Equipment Co., LTD China	M-9000S
Fully automatic snowflake ice	Changshu Shenghai Electric Co., Ltd. China
Perfusate in NMP			5% Human serum albumin 100-150 mL, Whole blood 1.2-1.5 L, 2.5% NaHCO3 21 mL, 10% CaCL2 7mL , Heparin 5000 U , Cefoxltin 1 g, Metronidazole 500 mg, Sodium taurocholate 5 g, Short acting insulin 72 U, Total parenteral nutrition solution 250-500 mL.
Potal catheter	Jinxin technology,Shunde,China		Portal vein catheter for custom cannula of varying internal diameter (6-8.5 mm)
Refrigeration centrifuge	hermo Fisher Scientific - CN
The CG8/CG4 blood gas test card	Abbott
The CHEM 8 test card	Abbott
The ex vivo liver machine perfuion device	Devocean Medical Instrument Co., Ltd, Guangdong, China	DEVOCEAN-LIVER 2000	This is a multi-mode, temperature-controlled, biomimetic ex vivo liver machine perfusion device, capable of preserving the liver outside the body for 24 h
UW Cold Storage solution	Bridge to Life, Ltd., USA	Belzer UW	Liver in SCS group were preserved in UW Cold Storage solution
UW Machine Perfusion Solution	Bridge to Life, Ltd., USA	Belzer MPS	Adenine (free base) 0.68 g, Calcium Chloride (dihydrate) 0.068 g, Dextrose (+) 1.80 g, Glutathione (reduced) 0.92 g, HEPES (free acid) 2.38 g, Hydroxyethyl Starch 50.0 g, Magnesium Gluconate 1.13 g, Mannitol 5.4 g, Potassium Phosphate (monobasic) 3.4 g, Ribose, D(-) 0.75 g, Sodium Gluconate 17.45 g, Sodium Hydroxide 0.70 g, Sterile Water for Injection To 1000 mL Volume
Vacuum extractor	SMAF	DYX-2A