Preservação da Doação de Suínos após Morte Circulatória (DCD) Hepática por Perfusão e Transplante Hepático Ortotópico

Resumo

Este protocolo descreve a metodologia de estabelecimento de um modelo suíno utilizando Perfusão de Máquina (MP) com temperatura controlada variável para a preservação do fígado do doador, seguido de transplante hepático ortotópico (OLTx). Tem como objetivo promover a taxa de sucesso do OLTx usando doação de doador após morte circulatória (DCD) hepática e estabelecer um modelo estável.

Resumo

O armazenamento refrigerado estático convencional (SCS) exacerba a lesão isquêmica no fígado DCD, levando a complicações graves para os receptores de transplante. Para resolver esse problema, a aplicação clínica da tecnologia MP para preservação do fígado do doador está em andamento. Simultaneamente, os esforços estão focados no desenvolvimento de vários instrumentos de MP, validados por meio de experimentos em modelos animais relevantes. Ensaios eficazes em animais de grande porte desempenham um papel fundamental em aplicações clínicas. No entanto, persistem desafios na preservação ex vivo de fígados DCD e no procedimento de transplante em suínos. Esses obstáculos abrangem abordar a preservação prolongada de fígados de doadores, realizar testes de viabilidade, aliviar lesões isquêmicas e encurtar a fase anepática. O uso de um dispositivo MP com temperatura controlada variável facilita a preservação prolongada de fígados DCD por meio dos modos sequenciais de Perfusão por Máquina Oxigenada Hipotérmica Dupla (DHOPE) e Perfusão por Máquina Normotérmica (NMP). Este protocolo aprimora o modelo OLTx suíno, melhorando a qualidade dos fígados DCD, otimizando a técnica de anastomose e reduzindo a duração da fase anepática.

Introdução

O transplante de fígado continua sendo o único tratamento curativo para doenças hepáticas em estágio terminal e cânceres hepáticos selecionados. Apesar dos avanços significativos na aquisição, preservação, técnicas operatórias e imunossupressão pós-transplante, uma taxa de mortalidade notável persiste entre os pacientes na lista de espera devido à escassez de órgãos de doadores adequados. Um dos principais desafios está na preservação dos fígados obtidos do DCD, pois esses órgãos necessitam de cuidados especializados para mitigar as lesões isquêmicas¹. A perfusão ex vivo da máquina hepática oferece um ....

Protocolo

Todos os experimentos com animais foram conduzidos de acordo com a Portaria de Gerenciamento de Animais Experimentais (Ministério da Ciência e Tecnologia da República Popular da China, 2017). Foram utilizadas porcas miniatura fêmeas Bama (40-45 kg). O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do Hospital Geral do Comando do Teatro Sul do PLA, China. Os porcos foram alojados no centro de pesquisa por 1 semana antes do transplante e depois em jejum, mas com livre acesso à água por 12 h antes do experimento. Os detalhes dos reagentes e do equipamento utilizado no estudo estão listados na

Discussão

Atualmente, o MP hepático é amplamente utilizado em ensaios clínicos, mas ainda são necessárias mais pesquisas pré-clínicas usando modelos animais de grande^{porte 5,6}. A OLTx suína apresenta desafios significativos que resultam em baixas taxas de sucesso. Esses desafios englobam isquemia quente do doador, variações anatômicas e intolerância ao pinçamento prolongado da veia cava e da veia porta .......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia respirator	Mindray,Shenzhen	WATO EX-20
Automatic biochemical analyzer	MNCHIP, China	Celercare V5
Bama female miniature pigs	Pearl Lab Animal Sci & Tech Co,Ltd (Guangdong, China).		40-45 kg
Blood gas analyzer	Abbott	i-STAT300
ECG monitor	Shenzhen Ericon Medical Equipment Co., LTD China	M-9000S
Fully automatic snowflake ice	Changshu Shenghai Electric Co., Ltd. China
Perfusate in NMP			5% Human serum albumin 100-150 mL, Whole blood 1.2-1.5 L, 2.5% NaHCO3 21 mL, 10% CaCL2 7mL , Heparin 5000 U , Cefoxltin 1 g, Metronidazole 500 mg, Sodium taurocholate 5 g, Short acting insulin 72 U, Total parenteral nutrition solution 250-500 mL.
Potal catheter	Jinxin technology,Shunde,China		Portal vein catheter for custom cannula of varying internal diameter (6-8.5 mm)
Refrigeration centrifuge	hermo Fisher Scientific - CN
The CG8/CG4 blood gas test card	Abbott
The CHEM 8 test card	Abbott
The ex vivo liver machine perfuion device	Devocean Medical Instrument Co., Ltd, Guangdong, China	DEVOCEAN-LIVER 2000	This is a multi-mode, temperature-controlled, biomimetic ex vivo liver machine perfusion device, capable of preserving the liver outside the body for 24 h
UW Cold Storage solution	Bridge to Life, Ltd., USA	Belzer UW	Liver in SCS group were preserved in UW Cold Storage solution
UW Machine Perfusion Solution	Bridge to Life, Ltd., USA	Belzer MPS	Adenine (free base) 0.68 g, Calcium Chloride (dihydrate) 0.068 g, Dextrose (+) 1.80 g, Glutathione (reduced) 0.92 g, HEPES (free acid) 2.38 g, Hydroxyethyl Starch 50.0 g, Magnesium Gluconate 1.13 g, Mannitol 5.4 g, Potassium Phosphate (monobasic) 3.4 g, Ribose, D(-) 0.75 g, Sodium Gluconate 17.45 g, Sodium Hydroxide 0.70 g, Sterile Water for Injection To 1000 mL Volume
Vacuum extractor	SMAF	DYX-2A