Optimización de las técnicas urodinámicas del ratón para mejorar la precisión

Resumen

Este protocolo proporciona una guía para impermeabilizar la piel con cianocrilato para evitar la absorción de orina por el pelo y la piel. Incluye instrucciones para aplicar el pegamento a la piel, implantar un catéter vesical y electrodos para la cistometría y los registros de electromiografía del esfínter uretral externo en ratones despiertos.

Resumen

La medición precisa de los parámetros urinarios en ratones despiertos es crucial para comprender la disfunción del tracto urinario inferior (LUT), particularmente en afecciones como la lesión postraumática de la médula espinal (LME) de la vejiga neurógena. Sin embargo, la realización de registros de cistometría en ratones presenta desafíos notables. Cuando los ratones están en una posición prona y restringida durante las sesiones de grabación, la orina tiende a ser absorbida por el pelaje y la piel, lo que lleva a una subestimación del volumen miccional (VV). El objetivo de este estudio fue mejorar la precisión de los registros de cistometría y electromiografía de esfínter uretral externo (EUS-EMG) en ratones despiertos. Desarrollamos un método único que utiliza adhesivo de cianoacrilato para crear una barrera cutánea impermeable alrededor del meato uretral y el abdomen, evitando la absorción de orina y asegurando mediciones precisas. Los resultados muestran que después de aplicar el cianoacrilato, la suma de VV y RV se mantuvo consistente con el volumen de solución salina infundida, y no se observaron áreas húmedas después del experimento, lo que indica una prevención exitosa de la absorción de orina. Además, el método estabilizó simultáneamente los electrodos conectados con el esfínter uretral externo (EUS), garantizó señales de electromiografía (EMG) estables y minimizó los artefactos causados por el movimiento del ratón despierto y la manipulación del experimentador. Se discuten los detalles metodológicos, los resultados y las implicaciones, destacando la importancia de mejorar las técnicas urodinámicas en la investigación preclínica.

Introducción

El almacenamiento y la liberación de orina dependen de la actividad coordinada de la vejiga urinaria y el esfínter uretral externo (USE). En algunas patologías como la vejiga neurógena, tanto los músculos detrusores vesicales como el esfínter pueden llegar a ser disfuncionales, dando lugar a importantes problemas vesicales, especialmente tras una lesión medular traumática (LM)¹.

Los pequeños roedores se utilizan habitualmente como modelo experimental para estudiar la función preclínica del tracto urinario inferior (LUT)². Las técnicas de registro de cistometría de llenado....

Protocolo

El protocolo del estudio en animales fue aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Facultad de Medicina de la Universidad de Indiana. Código de homologación: 21098MD/R/MSS/HZ Fecha de homologación: 29 de septiembre de 2021.

1. Preparación del catéter

1. Corta un tubo de polietileno PE-30 de 30 cm (.017 pulgadas x .030 pulgadas). Use un encendedor para ensanchar un extremo del tubo, asegurándose de que no toque la llama, y retire el encendedor una vez que el tubo haya formado una punta redonda en forma de campana adecuada.
2. Inserte con cuidado aproximadamente 3/4 de la aguja de 2....

Discusión

Esta técnica urodinámica describe un procedimiento mejorado para medir el volumen de orina y la señal EUS-EMG en ratones despiertos y restringidos. La presencia de pelo alrededor del meato uretral y el área abdominal puede interferir con la precisión de la medición del VV mediante la absorción de orina. Aunque el pelaje que rodea el meato uretral y el abdomen se había afeitado cuidadosamente antes de la cirugía, los pequeños pelajes restantes dentro de estas áreas y la piel aún absorbían la orina, por lo gen.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Accelerator	BOB SMITH INDUSTRIES	BSI-152
Cyanoacrylate	TED PELLA, Inc	14478
Disposable base mold	TED PELLA, Inc	27147-4
Infusion pump	Harvard Apparatus PHD ULTRA	70-3006
Isoflurane	Henry Schein Inc	1182097
PIN	World Precision Instruments	5482
Polyethylene Tubing 30	Braintree Scientific Inc	PE30
Sterile Weighing Boat	HEATHROW SCIENTIFIC	797CK2
Windaq/Lite	DATAQ INSTRUMENTS	249022