Otimizando técnicas urodinâmicas de camundongos para maior precisão

Resumo

Este protocolo fornece um guia para impermeabilizar a pele com cianoacrilato para evitar a absorção de urina pelo e pela pele. Inclui instruções para aplicar a cola na pele, implantar um cateter vesical e eletrodos para cistometria e registros de eletromiografia do esfíncter uretral externo em camundongos acordados.

Resumo

A medição precisa dos parâmetros urinários em camundongos acordados é crucial para entender a disfunção do trato urinário inferior (LUT), particularmente em condições como lesão neurogênica da medula espinhal pós-traumática (LME). No entanto, a realização de registros de cistometria em camundongos apresenta desafios notáveis. Quando os camundongos estão em uma posição propensa e restrita durante as sessões de gravação, a urina tende a ser absorvida pelo e pela pele, levando a uma subestimação do volume miccional (VV). O objetivo deste estudo foi aumentar a precisão dos registros de cistometria e eletromiografia do esfíncter uretral externo (EUS-EMG) em camundongos acordados. Desenvolvemos um método exclusivo utilizando adesivo de cianoacrilato para criar uma barreira cutânea à prova d'água ao redor do meato uretral e do abdômen, impedindo a absorção de urina e garantindo medições precisas. Os resultados mostram que, após a aplicação do cianoacrilato, a soma de VV e VR permaneceu consistente com o volume de solução salina infundida, e não foram observadas áreas úmidas após o experimento, indicando prevenção bem-sucedida da absorção de urina. Além disso, o método estabilizou simultaneamente os eletrodos conectados ao esfíncter uretral externo (EUS), garantiu sinais de eletromiografia (EMG) estáveis e minimizou os artefatos causados pelo movimento do camundongo acordado e pela manipulação do experimentador. Detalhes metodológicos, resultados e implicações são discutidos, destacando a importância de melhorar as técnicas urodinâmicas na pesquisa pré-clínica.

Introdução

O armazenamento e a liberação de urina dependem da atividade coordenada da bexiga urinária e do esfíncter uretral externo (USE). Em algumas patologias, como a bexiga neurogênica, tanto os músculos detrusores da bexiga quanto o esfíncter podem se tornar disfuncionais, levando a problemas vesicais significativos, especialmente após lesão medular traumática (LM)¹.

Pequenos roedores são comumente usados como modelo experimental para estudar a função pré-clínica do trato urinário inferior (LUT)². As técnicas de registro de cistometria de enchimento (FC) e eletromiografia EUS (....

Protocolo

O protocolo de estudo em animais foi aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Escola de Medicina da Universidade de Indiana. Código de aprovação: 21098MD/R/MSS/HZ Data de aprovação: 29 de setembro de 2021.

1. Preparação do cateter

1. Corte um tubo de polietileno PE-30 de 30 cm (0,017 polegadas x 0,030 polegadas). Use um isqueiro para alargar uma extremidade do tubo, certificando-se de que não toque na chama, e retire o isqueiro assim que o tubo formar uma ponta apropriadamente redonda em forma de sino.
2. Insira cuidadosamente cerca de 3/4 da agulha 25G na outra extremidade do tubo. P....

Discussão

Esta técnica urodinâmica descreve um procedimento aprimorado para medir o volume de urina e o sinal EUS-EMG em camundongos acordados e contidos. A presença de pêlos ao redor do meato uretral e da área abdominal pode interferir na precisão da medição da VV pela absorção da urina. Embora o pêlo ao redor do meato uretral e do abdômen tenha sido cuidadosamente raspado antes da cirurgia, os pequenos pêlos restantes dentro dessas áreas e a pele ainda absorveram a urina, geralmente deixando uma área úmida no abd.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Accelerator	BOB SMITH INDUSTRIES	BSI-152
Cyanoacrylate	TED PELLA, Inc	14478
Disposable base mold	TED PELLA, Inc	27147-4
Infusion pump	Harvard Apparatus PHD ULTRA	70-3006
Isoflurane	Henry Schein Inc	1182097
PIN	World Precision Instruments	5482
Polyethylene Tubing 30	Braintree Scientific Inc	PE30
Sterile Weighing Boat	HEATHROW SCIENTIFIC	797CK2
Windaq/Lite	DATAQ INSTRUMENTS	249022