精度向上のためのマウス尿流動態技術の最適化

要約

このプロトコルは、毛皮や皮膚による尿の吸収を防ぐために、シアノアクリレートで皮膚を防水するためのガイドを提供します。これには、接着剤を皮膚に塗布する方法、膀胱カテーテルを埋め込む方法、覚醒マウスの膀胱内測定および外部尿道括約筋電図記録用の電極の手順が含まれています。

要約

覚醒マウスの尿パラメータの正確な測定は、特に神経因性膀胱、心的外傷後脊髄損傷(SCI)などの状態における下部尿路(LUT)機能障害を理解するために重要です。しかし、マウスで膀胱測定の記録を行うことには、顕著な課題があります。録音セッション中にマウスがうつ伏せで制限された姿勢にあると、尿が毛皮や皮膚に吸収される傾向があり、排尿量(VV)が過小評価されます。この研究の目的は、覚醒マウスにおける膀胱測定および体外尿道括約筋電図(EUS-EMG)記録の精度を高めることでした。シアノアクリレート接着剤を使用して、尿道口と腹部の周囲に防水性の皮膚バリアを作成し、尿の吸収を防ぎ、正確な測定を保証する独自の方法を開発しました。結果は、シアノアクリレートを適用した後、VVとRVの合計が注入された生理食塩水の量と一致したままであり、実験後に濡れた領域が観察されなかったことを示しており、尿の吸収が成功したことを示しています。さらに、この方法は、外部尿道括約筋(EUS)に接続された電極を同時に安定化し、安定した筋電図(EMG)信号を確保し、覚醒したマウスの動きと実験者の操作によって引き起こされるアーチファクトを最小限に抑えました。方法論の詳細、結果、および影響について議論し、前臨床研究における尿流動態技術の改善の重要性を強調しています。

概要

尿の貯蔵と放出は、膀胱と外尿道括約筋(EUS)の協調活動に依存します。神経因性膀胱などの一部の病状では、膀胱排尿筋と括約筋の両方が機能不全になり、特に外傷性脊髄損傷(^SCI)1後に重大な膀胱の問題を引き起こす可能性があります。

小型のげっ歯類は、下部尿路(^LUT)2の前臨床機能を研究するための実験モデルとして一般的に使用されます。充填膀胱測定法(FC)およびEUS筋電図法(EUS-EMG)記録技術は、方法の選択、正確な測定、および結果の解釈に応じて、正確な客観的情報を提供することができます³。尿流動態テストは、排尿量(VV)、排尿効率(VE)、および膀胱容量⁴を評価するために一般的に使用されます。VEは、膀胱がどれだけ効果的に自己を空にできるかを測定します。これは、ボイドボリュームをボイドボリュームと残余ボリュームの合計(VV + RV)で割ることによって計算されます。一方、膀胱容量は、RV(排尿後に膀胱に残る尿^の量)にVV(排尿時に排出される尿の量)を足して算出されます5。したがって、VVとRVの測定は、他のパラメータを推論するための鍵となります。

プロトコル

動物実験のプロトコルは、インディアナ大学医学部の施設動物管理および使用委員会によって承認されました。承認コード:21098MD / R / MSS / HZ承認日:2021年9月29日。

1. カテーテルの調製

1. 30 cmポリエチレンPE-30チューブ(.017インチx .030インチ)をカットします。ライターを使用してチューブの一方の端をフレアし、炎に触れないようにし、チューブが適切な丸いベル型の先端を形成したらライターを引き出します。
2. 25Gの針の約3/4をチューブのもう一方の端に慎重に挿入します。1mLのシリンジを調製し、滅菌済みの0.9%NaClで満たします。シリンジを25Gの針に接続します。
3. 生理食塩水を静かに注入して、適切な丸い先端と針の端からの漏れがないことを確認します。圧力が感じられず、生理食塩水がカテーテルをスムーズに流れることを確認してください。

2. 電極の調製

1. 長さ20cmの鋼線を2本用意します。鋼線を取り、コーティングゾーンの両端にサンドポリッシュを塗布して、ワイヤーの5mmを剥がします。
2. 25Gの針を取り、ワイヤーの片側に挿入します。ワイヤーを傷つけないように、針を慎重に挿入してください。ワイヤーの剥がれた部分をフッ....

ディスカッション

この尿力学技術は、覚醒マウスと拘束されたマウスの尿量とEUS-EMG信号を測定するための改善された手順を説明しています。尿道口や腹部の周囲に毛皮が存在すると、尿を吸収してVV測定の精度に支障をきたすことがあります。尿道口と腹部の周囲の被毛は手術前に慎重に剃られていましたが、これらの領域と皮膚に残った小さな被毛はまだ尿を吸収しており、通常は記録後に腹部に濡れた部?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Accelerator	BOB SMITH INDUSTRIES	BSI-152
Cyanoacrylate	TED PELLA, Inc	14478
Disposable base mold	TED PELLA, Inc	27147-4
Infusion pump	Harvard Apparatus PHD ULTRA	70-3006
Isoflurane	Henry Schein Inc	1182097
PIN	World Precision Instruments	5482
Polyethylene Tubing 30	Braintree Scientific Inc	PE30
Sterile Weighing Boat	HEATHROW SCIENTIFIC	797CK2
Windaq/Lite	DATAQ INSTRUMENTS	249022