Оптимизация уродинамических методов мыши для повышения точности

Резюме

Этот протокол содержит руководство по гидроизоляции кожи цианоакрилатом для предотвращения впитывания мочи шерстью и кожей. Он включает в себя инструкции по нанесению клея на кожу, имплантации катетера мочевого пузыря, а также электроды для цистометрии и записи электромиографии наружного сфинктера уретры у бодрствующих мышей.

Аннотация

Точное измерение параметров мочи у бодрствующих мышей имеет решающее значение для понимания дисфункции нижних мочевыводящих путей (СНМП), особенно при таких состояниях, как нейрогенное посттравматическое повреждение спинного мозга (ТСМ) мочевого пузыря. Тем не менее, проведение записи цистометрии у мышей представляет собой заметную проблему. Когда мыши находятся в положении лежа и ограничены во время сеансов записи, моча имеет тенденцию поглощаться шерстью и кожей, что приводит к недооценке объема мочеиспускания (VV). Целью данного исследования было повышение точности регистрации цистометрии и электромиографии наружного сфинктера уретры (ЭУС-ЭМГ) у бодрствующих мышей. Мы разработали уникальный метод с использованием цианоакрилатного клея для создания водонепроницаемого кожного барьера вокруг уретрального прохода и брюшной полости, предотвращая всасывание мочи и обеспечивая точные измерения. Результаты показывают, что после применения цианоакрилата сумма VV и RV оставалась в соответствии с объемом введенного физиологического раствора, и после эксперимента не наблюдалось влажных участков, что указывает на успешную профилактику абсорбции мочи. Кроме того, метод одновременно стабилизировал электроды, соединенные с наружным сфинктером уретры (ЭУС), обеспечил стабильные сигналы электромиографии (ЭМГ) и минимизировал артефакты, вызванные движением пробужденной мыши и манипуляциями экспериментатора. Обсуждаются методологические детали, результаты и последствия, что подчеркивает важность совершенствования уродинамических методов в доклинических исследованиях.

Введение

Накопление и выделение мочи зависят от скоординированной деятельности мочевого пузыря и наружного сфинктера уретры (ЭУЗ). При некоторых патологиях, таких как нейрогенный мочевой пузырь, мышцы детрузора мочевого пузыря и сфинктер могут стать дисфункциональными, что приводит к значительным проблемам с мочевым пузырем, особенно после травматического повреждения спинного мозга (ТСМ)¹.

Мелкие грызуны обычно используются в качестве экспериментальной модели для изучения доклинической функции нижних мочевыводящих путей (СНМП)². Методы записи заполняющей цистометрии (ФК) и электро....

протокол

Протокол исследования на животных был одобрен Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию Медицинской школы Университета Индианы. Код утверждения: 21098MD/R/MSS/HZ Дата утверждения: 29 сентября 2021 г.

1. Подготовка катетера

1. Отрежьте полиэтиленовую трубку PE-30 диаметром 30 см (0,017 дюйма x 0,030 дюйма). Используйте зажигалку, чтобы раздуть один конец трубки, следя за тем, чтобы он не касался пламени, и вытащите зажигалку, как только трубка образует подходящий круглый наконечник в форме колокола.
2. Осторожно введите около 3/4 иглы 25G в другой конец трубки. Приготовьте шприц объе....

Результаты

Для анализа данных использовали цисометрию и отслеживание активности ЭУС-ЭМГ. Метод непрерывной цистометрии предполагает вливание физиологического раствора в мочевой пузырь и одновременное измерение изменения давления и объема мочевого пузыря. Для измерения ВВ 0,4 мл физиологическо?.......

Обсуждение

Этот уродинамический метод описывает усовершенствованную процедуру измерения объема мочи и сигнала ЭУС-ЭМГ у бодрствующих и удерживаемых мышей. Наличие шерсти вокруг уретрального прохода и области живота может мешать точности измерения ВВ из-за поглощения мочи. Хотя шерсть вокруг ур.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Accelerator	BOB SMITH INDUSTRIES	BSI-152
Cyanoacrylate	TED PELLA, Inc	14478
Disposable base mold	TED PELLA, Inc	27147-4
Infusion pump	Harvard Apparatus PHD ULTRA	70-3006
Isoflurane	Henry Schein Inc	1182097
PIN	World Precision Instruments	5482
Polyethylene Tubing 30	Braintree Scientific Inc	PE30
Sterile Weighing Boat	HEATHROW SCIENTIFIC	797CK2
Windaq/Lite	DATAQ INSTRUMENTS	249022